草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP7重组疫苗的构建及其免疫效力评价

为探明呼肠孤病毒(GCRV)外衣壳蛋白VP7基因工程亚单位疫苗产生的抗体效价水平和免疫保护力,用RT-PCR方法,从GCRV中扩增到VP7基因片段,并克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,得到重组质粒pET-VP7,酶切鉴定后,将pET-VP7转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,产生的重组蛋白经变性和复性后,按0.5、1.0、2.0 mg/尾的注射剂量分为3个免疫组,以等体积的氢氧化铝为佐剂进行注射。经SDS-PAGE电泳分析,发现了相对分子质量为34 000的蛋白表达带;Western Blot检测结果显示表达的蛋白具有很好的抗原性;间接凝集试验结果表明,3个免疫组均有抗体产生;攻毒试验结果表明,0.5、1.0、2.0 mg/尾重组蛋白剂量组的保护率分别为90%、85%、90%,对照组为0,表明所构建的疫苗具有较好的免疫作用。

脂质体对草鱼出血病核酸疫苗免疫效果的影响

将已构建完成的草鱼出血病核酸疫苗pFastBac-β-VP71-VP72以30μg的剂量,经Lipotap脂质体包裹后,背部肌肉注射草鱼体内,定期通过RT-PCR测定目的基因转录水平、间接凝集反应测定抗体水平,并通过与相应的重组质粒组、空载体组和对照组进行比较,来评价脂质体对核酸疫苗免疫保护效果的影响。结果显示,脂质体组至第70天仍能检测到目的基因的转录,且抗体效价明显高于其他各组,说明脂质体可显著增强该核酸疫苗的免疫活性,可作为一种有应用前景的核酸疫苗佐剂。