长链非编码RNA AFAP1-AS1在肺腺癌吉非替尼耐药细胞中的作用及机制研究

目的研究长链非编码RNA AFAP1-AS1对非小细胞肺癌耐吉非替尼细胞株PC9/GR耐药性的影响及其可能的作用机制。方法采用不同浓度的吉非替尼处理亲本PC9和耐药PC9/GR细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率,计算半数致死量(IC_(50))。应用qRT-PCR检测AFAP1-AS1在吉非替尼耐药PC9/GR及亲本细胞株PC9、H1975中AFAP1-AS1的表达水平。将Scrambled和si-AFAP1-AS1转染PC9/GR细胞,qRT-PCR检测干扰效率,CCK-8法检测对照组(Scrambled组)和干扰组(si-AFAP1-AS1组)的IC_(50)。分别应用CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测PC9/GR对照组和干扰组细胞对吉非替尼药物敏感性、联合吉非替尼处理后细胞增殖能力、细胞凋亡率及细胞周期分布;Western blot检测对照组和干扰组PC9/GR细胞E-cadherin的蛋白表达水平。结果AFAP1-AS1在PC9/GR耐药细胞中的表达量高于PC9亲本细胞,差异有统计学意义(P<0.05);PC9/GR干扰组细胞的IC_(50)、增殖能力低于对照组,细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);干扰组细胞周期阻滞在G_(0)/G_(1)期比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组比较,干扰AFAP1-AS1表达的干扰组PC9/GR细胞E-cadherin表达水平明显升高。结论干扰AFAP1-AS1表达可能通过抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,上调E-cadherin蛋白表达而逆转PC9/GR细胞对吉非替尼的耐药性。