三种小干扰RNA干扰VP16 mRNA对单纯疱疹病毒-1复制的影响研究

目的探讨体外合成小干扰RNA(siRNA),在RNA干扰(RNAi)技术条件下,单纯疱疹病毒-1(HSV-1)感染Vero细胞过程中,病毒间层蛋白VP16的生物学功能。方法用T7RNA聚合酶体外合成针对VP16mRNA的三种siRNA。用脂质体2000转染Vero细胞后接种HSV-1,感染后不同时相点(12,24,36,48,60,72hpi)分别采取实验组(R)和对照组(C)标本,检测病毒滴度值,绘制子代病毒一步生长曲线。用同位素标记新合成的VP16进行免疫沉淀法检测病毒蛋白表达的变化。结果病毒子代一步生长曲线显示,转染siRNA的实验组Vero细胞接种HSV-1后24h(24hpi),病毒滴度明显低于对照组;12hpi也观察到病毒滴度低于对照组的现象;多位点的siRNA具有协同作用;实验组病毒滴度高峰出现时间后移大约12h。siRNA影响了病毒的蛋白表达。结论T7RNA聚合酶体外合成的siRNA可以用于RNAi技术研究;HSV-1间层蛋白VP16对病毒复制和组装、成熟起重要的生物学作用。