中肠共生菌嗜水气单胞菌对淡色库蚊溴氰菊酯抗性的影响

目的探究中肠共生菌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)与淡色库蚊对溴氰菊酯抗性之间的关系。方法测定淡色库蚊敏感品系与抗性品系中肠中嗜水气单胞菌相对丰度;分离培养抗性蚊中肠内嗜水气单胞菌,对敏感品系蚊虫进行嗜水气单胞菌口饲添加,抗性品系口饲抗生素消除及消除后回饲,然后进行CDC Bottle抗性测定和细胞色素酶P450(P450s)活性测定。结果嗜水气单胞菌在抗性蚊中肠中的丰度显著高于敏感蚊(P<0.05)。CDC Bottle试验显示,接触溴氰菊酯120 min时敏感品系增菌组的抗药性是对照组的2.41倍,抗性显著提升;口饲抗生素的抗性品系消除组的抗药性降低至对照组的66%,抗药性有所下降;嗜水气单胞菌回饲后抗性回升至消除组的1.71倍。敏感品系添加嗜水气单胞菌后P450s活性水平提高到对照组的2.05倍;消除抗性品系蚊肠道内嗜水气单胞菌后P450s活性水平降低至对照组的58%;回饲组P450s活性提高至消除组的2.13倍。结论蚊中肠共生菌嗜水气单胞菌可通过提高蚊体内外源物质代谢酶的活性介导蚊对溴氰菊酯的抗性,这为针对蚊杀虫剂抗性产生机制的研究及蚊害的综合性治理提供了一个新的思路。

淡色库蚊溴氰菊酯抗性与性别相关性分析

目的研究淡色库蚊抗药性与性别之间的关系。方法建立淡色库蚊溴氰菊酯敏感、抗性两品系的杂交系,对所得子二代抗性分离群体以抗性程度区分为四组不同的表型。转录组测序后对雌雄蚊之间的抗性差异进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR进行表达量的验证。结果子7代三组60min击倒率分别为雌蚊:13.6%、36.4%、34.0%,雄蚊:51.1%、51.1%、82.9%;子8代两组60min击倒率分别为雌蚊:13.0%、19.6%,雄蚊:26.4%、51.9%;子9代五组60min击倒率分别为:雌蚊47.2%、66.7%、14.8%、38.5%、32.9%,雄蚊:68.7%、70.0%、54.8%、41.7%、58.3%,抗性击倒试验显示,杂交蚊雄蚊抗性水平低于雌蚊;定量PCR显示抗性相关基因乙酰葡萄糖胺水解酶蛋白(protein O-GlcNAcase)基因和溶血磷脂酶(lysophospholipase)基因在敏感雄蚊中高表达,而在抗性雌蚊中低表达。结论淡色库蚊溴氰菊酯抗性与性别相关,提示淡色库蚊雌雄蚊间可能存在不同的抗性机制。

淡色库蚊溴氰菊酯敏感品系与抗性种群的肠道菌群多样性分析

目的探讨淡色库蚊溴氰菊酯敏感品系与抗性种群成蚊肠道菌群多样性和组成结构。方法分离淡色库蚊溴氰菊酯敏感品系与抗性种群成蚊肠道并提取总基因组DNA,对敏感品系与抗性种群成蚊肠道菌群16S rDNA基因的V3+V4区进行测序,分析其物种组成结构、菌群多样性及相对丰度;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术验证细菌相对丰度以检测测序数据的可靠性。结果通过优化剪切得到216022条有效序列,根据序列相似性进行聚类分析共获取766个操作分类单元,分别注释到31个门,62个纲,132个目,215个科和339个属。样本覆盖度均接近99%,表明测序量基本覆盖所有细菌物种。敏感品系的Chao1指数、香农指数和辛普森指数分别为374.53±40.27、2.56±0.59和0.36±0.11,抗性种群分别为201.58±29.34、1.14±0.13和0.55±0.07。淡色库蚊敏感品系与抗性种群肠道菌群均以变形菌门和厚壁菌门居多;在目分类水平上,敏感品系的优势菌目分别为红螺菌目、肠杆菌目及伯克霍尔德氏菌目,而抗性种群的优势菌目为红螺菌目、气单胞菌目及乳酸杆菌目;在属分类水平上,敏感品系的优势菌属为未鉴定属的醋酸杆菌科,其次是朝井杆菌属与红球菌属,而朝井杆菌属以绝对优势作为抗性种群的优势菌属,其次是未鉴定属的醋酸杆菌科与气单胞菌属。随机挑选细菌的RT-qPCR结果验证了测序数据的可靠性。结论淡色库蚊敏感品系与抗性种群肠道菌群结构和多样性有差异,提示蚊肠道菌群在杀虫剂抗性中发挥重要作用,为蚊媒的综合防制提供新的视角和线索。