突变靶基因xylE转基因小鼠

本研究以ｐＥＳｎｘ穿梭质粒为载体，选用恶臭假单孢杆菌ＴＯＬ质粒上的ｘｙｌＥ基因作为突变靶基因组构建的重组构件，经微注射导入ＩＣＲ小鼠５４９枚受精卵雄原核，将存活的３５２枚卵移入２４只假孕鼠输卵管内，７只妊娠，共产仔４１只，其中７只死胎，出生后死亡４只，３０只存活。注射卵存活率为６４％（３５２／５４９），出生率为１１．６％（４１／３５２）。存活鼠经ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测，整合率为５７％（１７／３０）。在整合阳性鼠中选择了杂交信号较强的２只当代公鼠，通过回收载体和转化试验，结果表明整合基因完整，具有转化的功能，由此，建立了突变靶基因ｘｙｌＥ转基因小鼠模型。

胚胎冷冻技术在转基因动物中的应用

胚胎冷冻技术在转基因动物中的应用李劲松，成国祥，李厚达（扬州大学农学院生物技术研究所，江苏省生物工程重点实验室）１９８０年，Ｇｏｒｄｏｎ首次将外源基因导入小鼠受精卵而获得成活个体，从而开了转基因动物的先河。两年后，Ｐａｌｍｉｔｅｒ等将重组的大鼠生长激...

乙型肝炎病毒X基因转基因小鼠的初步建立

ＨＢｘ基因为ＨＢＶ基因组上的一个开放读框，可编码具有转录反式激活作用的蛋白（ＨＢｘＡｇ）。已证实在体外ＨＢｘＡｇ可使哺乳细胞株发生恶性转化［１］。为了探索在体内ＨＢｘＡｇ转化细胞的作用，国外数个实验室已相继建立了ＨＢｘ转基因鼠模型［２，３］。为研究Ｈ...

不同细胞培养基细胞培养动力学比较试验

应用宜兴赛尔生物化工厂产１９９、Ｆ－１０、１６４０和ＤＭＥＭ细胞培养基与美国Ｓｉｇｍａ公司产１９９、Ｆ－１０、１６４０和ＤＭＥＭ细胞培养基分别配制细胞培养液，培养ＳＰ２／０和Ｖｅｒｏ细胞系及原代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），做细胞培养动力学比较试验。比较这两种来源的细胞培养基对细胞生长的形态、分裂速度及鸡马立克氏病毒（Ｍａｒｅｋ＇ｓｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ．ＭＤＶ）疫苗毒株ＨＶＴ－ＦＣ１２６和ＲｉｓｐｅｎｓＣＶＩ９８８在ＣＥＦ单层上增殖量的差异。研究结果表明。

人溶酶体α-甘露糖苷酶cDNA的克隆与表达

溶酶体α-甘露糖苷酶是糖蛋白降解途径的主要外糖苷酶,该酶缺陷引起溶酶体α-甘露糖苷贮积症.用RT-PCR法从HeLa细胞中克隆的人溶酶体α-甘露糖苷酶cDNA含有1个由2964bp组成的阅读框,编码由988个氨基酸组成的多肽,前26个氨基酸为潜在的前导序列,成熟多肽的预测分子量为111kD,具有11个潜在的N-交联糖基化部位.用逆转录病毒介导法导入患者细胞后,该cDNA表达高活性α-甘露糖苷酶.序列分析表明,此cDNA与已发表的拟似人溶酶体α-甘露糖苷酶cDNA有不同程度的差异。

山羊胎儿成纤维细胞中基因打靶的初步研究

为评估在山羊胎儿成纤维细胞中通过同源重组进行基因打靶的可行性,构建打靶载体pTarget1,分别以山羊β 酪蛋白基因的5′、3′侧翼区为2条同源臂,中间插入正筛选基因(Neor),外侧插入负筛选基因(HSV tk)。将该载体线性化并纯化后电转染入30日龄的山羊胎儿成纤维细胞中,转染细胞系分别用G418和丙氧鸟苷进行正负药物筛选,存活细胞经PCR检测证明发生了同源重组事件。

反义Wx基因导入我国籼型杂交稻重点亲本

为改良我国籼型杂交稻稻米的食用品质,利用基因工程技术经农杆菌介导将反义蜡质基因导入保持系龙特甫B等3个高直链淀粉含量的籼型杂交稻重点亲本中,经潮霉素抗性筛选获得了较多的抗性植株.PCR和Southern杂交检测证明,反义Wx基因已整合进转基因水稻的基因组中,绝大多数转基因水稻植株的表型正常.成熟种子直链淀粉含量分析表明,部分转基因水稻T1和T2代种子中的直链淀粉含量已有不同程度的下降,最低的已下降至7％左右,与未转化对照相比下降了18.39％.此外直链淀粉含量改变后对稻米的胶稠度和糊化温度也有一定的影响.