化脓性汗腺炎一家系γ-分泌酶基因突变检测

目的:检测一化脓性汗腺炎(HS)家系γ-分泌酶基因亚基(PS-1,PENEN-2,APH-1,NCSTN)的突变。方法:提取一化脓性汗腺炎家系及50名无亲缘关系的健康对照血DNA,采用PCR技术扩增PS-1、PENEN-2、APH-1和NCSTN基因的全部外显子,经测序、比对确定致病基因突变位点。结果:该家系HS患者均存在NCSTN c.1300 C>T(p.R434X)突变,而该家系正常成员及50名健康对照者未发现该突变,检索NCBI网站单核苷酸多态性(SNP)数据库亦未发现该突变。其余3个亚基未检测到突变位点。结论:NCSTN基因c.1300C>T突变可能是该家系的致病基因位点。

抗念珠菌感染免疫现状及进展

念珠菌为引起皮肤黏膜和系统性感染的常见机会性致病真菌,近年来宿主抗念珠菌感染免疫研究取得了长足进展。本文对念珠菌相关的固有免疫和适应性免疫反应研究进展进行介绍。前者包括主要模式识别受体Toll样受体(TLR2,4,9等)、C型凝集素受体(CLRs,包括Dectin-1,2,3,Mincle,DC-SIGN,DC-SIGN等)、核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)蛋白样受体(NLRs,包括NLRP3和NLRC4等),与念珠菌胞壁相应的病原体相关分子模式及其相关信号通路,在诱导固有免疫效应中的作用及机制以及相关基因突变导致的易感性。适应性免疫方面,主要包括Th17,Th1和Treg免疫反应的作用机制,及Th17免疫相关分子的基因突变与慢性皮肤黏膜念珠菌病易感性,并初步提出本领域的研究展望。

申克孢子丝菌酵母相对人急性单核细胞白血病细胞NF-κB信号通路及TNF-α的影响

目的:明确申克孢子丝菌酵母相对人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)NF-κB信号通路激活和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌的影响。方法:实时荧光定量PCR分析申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1细胞TNF-αmRNA的表达,酶联免疫吸附法检测TNF-α分泌量,免疫印迹法分析申克孢子丝菌酵母相体外作用于THP-1细胞后IκBα和磷酸化IκBα的水平,免疫荧光法观察NF-κB-p65核转位。同时设置地塞米松(NF-κB抑制剂)抑制组,并检测100 n M地塞米松预处理THP-1细胞后TNF-αmRNA水平的变化。结果:申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1细胞后6 hTNF-αmRNA水平显著高于空白对照组(P<0.001)。申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1细胞后24 h,TNF-α蛋白水平为(4610.419±121.501)pg/mL,显著高于空白对照组(186.964±98.073)pg/m L,差异具有统计学意义(P<0.001)。申克孢子丝菌酵母相作用THP-1细胞后30~60 min,磷酸化IκBα蛋白水平显著升高,为时间依赖性。申克孢子丝菌酵母相组细胞核内NF-κB-p65较空白对照组荧光强度增强。100 nM地塞米松预处理各组THP-1细胞后,TNF-αmRNA水平较前明显降低。结论:人THP-1细胞体外与申克孢子丝菌酵母相作用后激活NF-κB信号通路并上调TNF-α分泌。

白念珠菌对人急性单核细胞白血病细胞系产生肿瘤坏死因子α、活化信号分子p38MAPK 的影响

目的：探讨白念珠菌对人急性单核细胞白血病细胞系（THP-1细胞系）分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）和细胞内信号分子 p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活的影响。方法实时荧光定量 PCR 分析105、106 CFU/ml 灭活白念珠菌及阳性刺激物脂多糖刺激 THP-1细胞1、3、6 h 后 TNF-α mRNA 表达水平变化。40μg/L 地塞米松预先与 THP-1细胞共培养30 min 后，再用106 CFU/ml 白念珠菌、脂多糖刺激6 h 后检测TNF-α mRNA 表达水平。酶联免疫吸附法检测白念珠菌刺激 THP-1细胞24 h 后 TNF-α分泌量。免疫印迹法分析白念珠菌体外作用 THP-1细胞30 min、1 h 后 p38MAPK 和磷酸化 p38MAPK 的水平。结果105 CFU/ml 白念珠菌、106 CFU/ml 白念珠菌、脂多糖刺激 THP-1细胞组以及空白对照组 TNF-α mRNA 表达水平差异有统计学意义（F =110.98，P 〈0.001）；白念珠菌刺激1、3、6 h 之间差异也有统计学意义（F =701.680，P 〈0.001），随培养时间延长，THP-1细胞 TNF-α mRNA 水平增高，呈时间依赖效应。106 CFU/ml 白念珠菌刺激 THP-1细胞后24 h，TNF-α蛋白水平（6385.70±533.99 ng/L）较空白对照组（147.10±0.53 ng/L）明显升高，差异有统计学意义（P 〈0.01）。106 CFU/ml 白念珠菌作用于 THP-1细胞30、60 min 后磷酸化 p38MAPK 蛋白水平也明显升高。40μg/L地塞米松预先与 THP-1细胞共培养30 min 后，再以106 CFU/ml 白念珠菌刺激6 h 后 TNF-α mRNA 表达水平（3.77±0.62）较未用地塞米松组（208.50±10.50）明显降低，地塞米松可阻断白念珠菌上调 TNF-α mRNA 水平。结论人 THP-1细胞体外与白念珠菌作用后激活信号分子 p38MAPK 并分泌 TNF-α，参与抗念珠菌感染固有免疫反应。

烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系产生肿瘤坏死因子α、活化信号分子p38丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的探讨烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞分泌肿瘤坏死因子仪（TNF-α）和细胞内信号分子β38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活的影响。方法10^6、10^7CFU／ml烟曲霉悬液（10^6和10^7CFU／ml烟曲霉组）、100mg／L阳性刺激物β-葡聚糖（β-葡聚糖组）及培养基（空白对照组）分别与2×10^5／mlTHP-1细胞共孵育1、3、6h，实时荧光定量PCR分析各组THP-1细胞TNF-α mRNA表达水平。10^7CFU／ml烟曲霉悬液（烟曲霉组）、β-葡聚糖（β-葡聚糖组）及培养基分别作用THP-1细胞24h，酶联免疫吸附法检测各组培养上清液中TNF-α含量。Western印迹法检测10^7CFU／ml烟曲霉体外作用THP-1细胞后15、30、60minβ38MAPK和磷酸化β38MAPK水平。采用20μmol／LSB203580预先与THP-1细胞共培养2h后，再用10^7CFU／ml烟曲霉、β-葡聚糖或培养基作用6h，检测各组THP-1细胞TNF-α mRNA表达水平变化。结果10^6、10^7CFU／ml烟曲霉组、100mg／L β-葡聚糖组及空白对照组TNF-α mRNA表达水平差异有统计学意义（F=110．983，P〈0．001），且随培养时间延长，THP-1细胞TNF-α mRNA水平增高（F=701．680，P〈0．001）。1^7CFU／ml烟曲霉刺激THP-1细胞24h后，TNF-α蛋白水平（6236．30±437．12ng／L）较空白对照组（132．10±0．61ng／L）明显升高（P〈0．01）。10^7CFU／ml烟曲霉作用THP-1细胞30min后磷酸化β38MAPK蛋白水平明显升高，60rain时开始减弱。SB203580阻断的烟曲霉组TNF-α mRNA表达水平（3．83±0．62）较未阻断的烟曲霉组（187．23±21．62）明显降低。结论人THP-1细胞体外与烟曲霉作用后激活信号分子β38MAPK并分泌TNF-α，表明单核细胞可能参与抗烟曲霉感染固有免疫反应。

非剥脱性激光治疗痤疮的研究进展

痤疮是一种毛囊皮脂腺单位受累的慢性炎症性皮肤病,外用和口服药物是治疗痤疮的常规方案,激光治疗痤疮逐渐证实为一种有效的治疗方法。激光治疗的作用机制主要包括光热作用、光化学反应、诱导转化生长因子-β表达等,发挥抑制皮脂分泌、杀灭痤疮丙酸杆菌和减轻炎症和瘢痕形成的作用。目前,非剥脱性激光是治疗痤疮常用的激光治疗方式,包括多种不同波长的激光器。由于激光技术的种类繁多,如何制定合理的激光治疗方案改善痤疮症状有一定的难度。

Dectin-1介导人急性单核细胞白血病细胞巨噬细胞样细胞吞噬白念珠菌的作用研究

目的探讨Dectin-1受体在源于人急性单核细胞白血病细胞（THP-1）的巨噬细胞样细胞吞噬白念珠菌中的作用。方法以THP-1巨噬细胞样细胞为靶细胞，siRNA靶向下调Dectin-1受体表达，并与热灭活白念珠菌共培养，通过荧光显微镜计数、流式细胞仪检测其对白念珠菌的吞噬作用。应用SPSS19．0统计软件，采用单因素方差分析及t检验进行统计分析。结果细胞转染siRNA-Dectin-1后，Dectin-1mRNA相对表达量及蛋白表达水平明显降低（t=26．163，P〈0．001）。显微镜观察转染siRNA-Dectin-1和siRNA无义片段（NC）的THP-1巨噬细胞样细胞与白念珠菌共培养1、2、4h吞噬率分别为17．5％和22．1％、18．6％和24．3％、39．2％和59．1％，两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；吞噬≥3个菌的细胞百分比分别为2．2％比4．7％、2．5％比5．4％、5．1％比8．3％，两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞仪检测显示，THP-1巨噬细胞样细胞与带有荧光的白念珠菌共培养30min、1h、2h、4h后，转染siRNA-Dectin-1组较转染siRNA-NC组平均荧光强度明显降低，分别为36．8和45．7、54.3和62．4、72．1和84．9、93．6和116．7，两两比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论Dectin-1受体在巨噬细胞吞噬白念珠菌的效应中发挥重要作用。