人源抗EB病毒潜伏膜蛋白1特异性基因工程抗体Fab的筛选与特性

目的:应用噬菌体展示技术制备抗EB病毒编码的潜伏膜蛋白1(latert membrare protern 1,LMP1)特异性、高亲和力的全人抗体Fab片段。方法:利用稳定转染表达LMP1的SUNE-1细胞及原核表达的LMP1胞外区蛋白作为抗原对大容量人源Fab抗体库进行差减筛选及固相筛选,经过5轮细胞筛选和3轮固相筛选,随机挑选30个克隆经酶联免疫吸附法鉴定,阳性克隆进行可溶性表达,用LMP1阳性表达的人鼻咽癌细胞株HNE2/LMP1鉴定抗LMP1抗体Fab的结合活性。结果:Western blot、免疫荧光结果显示,从大容量人源Fab抗体库中筛选出1株抗LMP1抗体Fab,细胞ELISA、荧光激活细胞分类术、免疫荧光分析、免疫组化检测结果显示Fab与人鼻咽癌细胞表面LMP1分子有较好的结合活性。结论:从人源Fab抗体库中筛选的Fab抗体能够与鼻咽癌细胞表面LMP1分子特异性结合,为研制用于EBV相关肿瘤如鼻咽癌生物治疗的靶向药物,提供了候选分子。

αB-crystallin在喉癌组织中的表达及临床意义

目的探讨αB-crystallin基因在喉癌组织中的表达及其与喉癌的关系。方法收集2008年3月~2014年10月南京医科大学第二附属医院及皖南医学院弋矶山医院手术切除的喉癌标本54例及13例癌旁正常黏膜标本,采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测8例喉癌组织及其癌旁正常组织中αB-crystallin基因的表达,免疫组化法检测54例癌组织及13例癌旁正常组织中αB-crystallin蛋白的表达,比较不同组织中αB-crystallin阳性表达率。结果喉癌组织中的αB-crystallin m RNA表达量及αB-crystallin蛋白阳性表达率均明显高于癌旁正常组织,差异均有高度统计学意义（P〈0.01）;不同TMN分期及淋巴结转移情况的喉癌组织中αB-crystallin蛋白的阳性表达率比较差异有统计学意义（P〈0.05）,不同性别、年龄、肿瘤分型及分化程度的喉癌组织中αBcrystallin蛋白的阳性表达率比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论αB-crystallin基因的高表达与喉癌发生发展及转移有关,可能为喉癌患者的预后提供一个潜在的风险评估指标。