神经生长液促大鼠坐骨神经再生的实验研究

目的评价一种新型中药-神经生长液对大鼠坐骨神经损伤后神经再生的影响。方法SD大鼠50只雌雄各半,采用随机数字表法将其随机分成5组:神经生长液低、中、高剂量组,弥可保组和空白对照组。采用坐骨神经夹伤模型,于术后每5d测定坐骨神经功能指数(sciaticnerveindex,SFI),术后第20天行电生理,组织学检测及超微结构观察。结果术后5d时实验组(-72±9)与对照组(-79±8)间SFI差异无显著性意义(F=1.58,P>0.05),10d时高剂量组(-60±9)和弥可保组(-61±7)优于对照组(-75±7)(F=5.1,P<0.05),15d和20d时低、中、高剂量组及弥可保组均优于对照组(F=6.83和9.92,P<0.05)。坐骨神经干动作电位传导速度,小腿三头肌最大收缩力检测,及脊髓前角运动神经元记数、再生有髓纤维数、肌细胞截面积等指标神经生长液低、中、高剂量组及弥可保组均优于空白对照组(F=26.29,51.35,7.86,37.38,11.11,P<0.05)。超微结构观察实验组有髓神经纤维的髓鞘形态、厚度、成熟度均优于对照组,变性纤维的数目少于对照组。结论神经生长液能促进周围神经再生及功能的恢复。

牛膝提取物神经再生素促小鼠坐骨神经再生的实验研究

目的观察中药牛膝提取物神经再生素(NRF)对小鼠损伤坐骨神经的修复作用。方法ICR小鼠50只,雌雄各半,行坐骨神经夹伤术,随机分成5组:NRF高、中、低剂量组,弥可保组(阳性对照),生理盐水组(空白对照)。术后每日腹腔注射给药。采用小鼠坐骨神经功能指数(sc iatic function index,SFI)、组织形态学及电镜检查,观察NRF对损伤坐骨神经的影响。结果与空白对照组相比,NRF可显著改善小鼠的坐骨神经功能。超微结构观察表明,实验组有髓神经纤维的髓鞘形态、厚度、成熟度均优于对照组,而变性纤维的数目少于对照组。结论NRF能促进小鼠坐骨神经损伤后的修复及其功能的恢复。

神经再生素激活PC12细胞ERK1/2的实验研究

本实验初步探讨了神经再生素 ( NRF)作用于 PC12细胞的信号传导途径。采用 MTT法检测 NRF对无血清培养的PC12细胞存活率的影响 ;用磷酸化的 Elk单克隆抗体 ,通过 Western blot法观察 NRF的不同浓度 ( 10、10 0、10 0 0 ng/ m l)及不同作用时间 ( 0 min、15 min、3 0 min、1h、2 h)对无血清培养的 PC12细胞 ERK1/ 2活性的影响 ;还运用 MEK1/ 2阻断剂 U0 12 6,观察NRF激活 ERK1/ 2是否需要其上游信号蛋白 MEK1/ 2的激活。结果表明 ,NRF作用于无血清培养的 PC12细胞 ,可以激活ERK1/ 2 ,存在明显的剂量效应关系和时间依赖作用 ,在 10 0 0 ng/ ml浓度下最大 ,作用 2 h时达峰值 ;U0 12 6作用后 ,可抑制 NRF作用于 PC12细胞引起的 ERK1/ 2的激活。由此可见 ,NRF对无血清培养的 PC12细胞具有保护作用 ,可能通过激活 ERK1/ 2磷酸化级联途径来介导这些作用。

神经再生素对实验性高眼压兔视网膜i-NOSmRNA表达的影响

目的探讨中药有效成分神经再生素(NRF)对实验性高眼压视网膜可诱导型一氧化氮合成酶(i-NOS)表达的影响。方法前房灌注法建立兔右眼实验性高眼压模型,分别给予NRF和磷酸盐缓冲液(PBS)。NRF组(n=6)在灌注前、灌注后4d、7d玻璃体腔内多点注射NRF4.5μg;PBS组(n=6)在灌注前、灌注后4d、7d玻璃体腔内注射等量0.1mol/LPBS;两组兔的左眼为正常对照组(n=12)。以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组兔眼视网膜i-NOS基因表达量。结果NRF组兔视网膜i-NOSmRNA的表达量低于PBS组(P=0.000),但高于左眼正常对照组(P=0.000)。结论神经再生素能抑制青光眼视网膜i-NOSmRNA的表达,对青光眼视网膜神经节细胞可能具有保护作用。

神经再生素对实验性急性高眼压兔眼视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨中药提取物神经再生素(nerve regeneration factor,NRF)对实验性急性高眼压(hyper-intraocular pressure,HIOP)兔眼视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)的保护作用。方法16只健康中华大耳白兔随机等分为实验(NRF)组和空白对照(PBS)组,前房灌注法建立右眼实验性急性HIOP模型,左眼作正常对照(NC)。于灌注前、灌注后4 d、7 d,NRF组和PBS组右眼玻璃体腔内分别注射NRF4.5μg或等量(5μL)0.1 mol.L-1磷酸缓冲液。实验兔第14天安乐致死。实验兔致死前48 h以辣根过氧化物酶逆向标记双眼RGCs,视网膜铺片后以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺法呈色,计数下半视网膜距视盘边缘为2 mm、4 mm、6 mm处的RGCs密度。结果距视盘边缘分别为2 mm、4 mm、6 mm处,NC组的RGCs密度分别为(1 621±407)mm-2、(762±235)mm-2、(366±125)mm-2;NRF组的RGCs密度分别为(1 268±378)mm-2、(699±253)mm-2、(284±104)mm-2,距视盘边缘2 mm、6 mm处,NRF组与NC组RGCs密度差异有显著统计学意义(P=0.000,0.006);PBS组的RGCs密度分别为(1 002±410)mm-2、(627±211)mm-2、(264±107)mm-2,与NC组RGCs密度差异均有统计学意义(P均<0.05);距视盘边缘2 mm处,NRF组与PBS组的RGCs密度的差异有统计学意义(P=0.033)。结论NRF可提高实验性急性HIOP兔眼RGCs的存活率,对RGCs具有保护作用。

神经再生素对神经细胞生长影响的实验研究

目的 :探讨神经再生素 (NRF)对离体培养的 PC12细胞、背根神经节细胞、大脑皮层细胞生长影响的分子生物学机制。方法 :采用细胞体外培养、半定量 RT- PCR、Western blot方法 ,观察和比较 NRF组 (添加 NRF)、NGF组 (添加 NGF)和空白对照组 (基础培养基 )中细胞生存状况及相关基因 m RNA及其蛋白水平的表达变化。结果 :NRF作用于离体培养的 PC12细胞 ,可促使其分化 ;作用于背根神经节细胞 ,GAP- 4 3和 NF- L m RNA表达在不同时间呈不同程度的上调 ;作用于大脑皮层细胞 ,GAP- 4 3和 NF蛋白亦比对照组表达量为高。结论 :NRF具有维持细胞生存和促进神经细胞突起生长的作用 ,并可使神经元 GAP- 4 3和 NF m RNA表达及其蛋白合成上调。

神经再生素对皮层细胞基因表达影响的基因芯片研究

目的 :采用基因芯片技术 ,观察神经再生素对体外培养的胚鼠大脑皮层细胞基因表达的影响。方法 :取ICR胚鼠 (15d)大脑皮层细胞 ,无血清培养。实验组加入神经再生素 (2 μg/ml) ,对照组加入等量基础培养液。培养 6h后 ,抽提实验组和对照组皮层细胞总RNA ,经反转录分别用Cy5、Cy3荧光标记成cDNA探针。将荧光标记的cDNA与MGEC 40s基因表达谱芯片杂交 ,芯片扫描、数据处理。结果 :实验组和对照组大脑皮层细胞出现 64条差异性表达的基因。呈现上调的基因有 :钙调素结合蛋白、锌指蛋白激酶、核糖体蛋白等基因 ;下调基因有 :抑制细胞分裂因子等基因。结论 :神经再生素可作用于体外培养的胚鼠大脑皮层细胞 。

神经再生素促大鼠海马神经元生长的研究

目的研究牛膝提取物神经再生素(NRF)对体外培养的大鼠海马神经元生长的促进作用及其对生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响。方法以体外原代培养的胎鼠海马神经元为研究模型,通过相差显微镜采用Scion软件测量不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1mg/L)、不同作用时间(6h、12h、24h)对海马神经元神经突起生长的影响;通过实时荧光定量PCR观察NRF不同浓度(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)及不同作用时间(6h1、2h、24h)对海马神经元GAP-43基因表达的影响;采用免疫荧光细胞化学法和Western blotting,观察不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h后,对海马神经元GAP-43表达的影响。结果NRF可有效地促进海马神经元的生长,加药后24h作用浓度为1mg/L时,作用最强;实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光细胞化学法和Western blotting的结果提示,NRF能增加体外培养的海马神经元GAP-43的表达,浓度为1.0mg/L时,作用最佳。结论NRF能促进体外培养的海马神经元神经突起的生长和GAP-43基因的表达,表明NRF对海马神经元具有神经营养作用。

神经再生素促大鼠背根神经节生长作用的研究

目的研究神经再生素(NRF)对体外培养新生大鼠背根神经节生长及NF-H表达的影响。方法体外大鼠背根神经节(DRG)培养;免疫荧光细胞化学、实时荧光定量PCR和Western blot等方法。结果免疫荧光细胞化学结果提示,NRF能促进背根神经节神经突起的生长,浓度为2.0 mg/L时生长状况最佳;实时荧光定量PCR和Western blot结果提示,NRF能增加体外培养的背根神经节NF-H mRNA和蛋白的表达,在浓度为2.0 mg/L时表达最高。结论NRF能促进体外培养背根神经节神经突起的生长和NF-H的表达,表明NRF对发育期感觉神经元具有神经营养作用。

神经再生素对PC12细胞Caspases-3的影响

目的 :探讨神经再生素抑制PC12细胞凋亡的作用机制。方法 :采用流式细胞仪和RT PCR ,观察神经再生素对无血清状态下PC12细胞Caspases 3活力及Bax、Caspases 3mRNA的影响。结果 :与对照组相比 ,神经再生素可抑制无血清培养的PC12细胞Caspases 3活力 ,并可使Bax、Caspases 3mRNA的表达减少。结论 :神经再生素可以通过抑制Caspases 3基因表达和活化 。

神经生长因子促进海马胆碱能神经再生过程中Lhx8的动态表达

目的探讨神经生长因子(NGF)促进海马胆碱能神经再生与同源盒基因Lhx8之间的关系。方法SD大鼠72只,在制备切割右侧穹隆海马伞模型和NGF侧脑室注射的基础上,分为对照组、切割组、NGF组、切割联合NGF组;Real-time PCR和Western blotting分别检测各组动物海马中Lhx8蛋白的表达变化;免疫荧光技术检测各组动物海马齿状回颗粒下层中胆碱乙酰转移酶(ChAT)/Lhx8双标细胞数。结果切割组和NGF组中Lhx8蛋白的表达量较对照组增高,切割联合NGF组增高更为明显,且Lhx8基因表达也增高;NGF组和切割联合NGF组中海马齿状回颗粒下层(SGZ)中的ChAT/Lhx8双标细胞数也较对照组和切割组明显增多。结论侧脑室注射NGF促进海马胆碱能神经再生与Lhx8的高表达有关。

许旺细胞对周围神经再生的促进效应

学术背景:许旺细胞是周围神经纤维的鞘细胞,是周围神经不可缺少的一部分。在周围神经损伤修复过程中,如何运用和调控许旺细胞的活性成为周围神经领域内的研究热点。目的:深入认识许旺细胞的作用及其促周围神经再生的研究进展。检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Science Direct及PUBMED数据库1990-01/2007-10的相关文献,检索词"schwann cells,peripheral nerve injury,proliferation,macrophage,activation,neurotrophic factors,extracellular matrix,adhesion molecule,axon,interaction,myelination,transplantation,gap,transgene,over-expressing,isolation,purification,stemcells",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库1990-01/2007-10的相关文献,检索词"雪旺氏细胞,周围神经再生,人工神经移植物",并限定文章语言种类为中文。共检索到285篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①文章所述内容应与许旺细胞促周围神经再生密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:①重复性研究。②Meta分析。文献评价:文献的来源主要是通过对许旺细胞促周围神经再生的作用机制与应用及其相关研究进展进行汇总分析,所选用的48篇文献中,2篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。资料综合:①周围神经损伤后,其远侧段轴突及髓鞘崩解,同时许旺细胞大量增殖,增殖的许旺细胞在基底膜管内形成Bungner带,引导再生轴突的生长并最终形成新的髓鞘;增殖的许旺细胞还通过激活单核/巨噬细胞清除组织碎片、分泌神经营养因子以及维持受损神经元的活力、抑制其凋亡,进一步促进周围神经的再生;并且通过许旺细胞与再生轴突之间的缝隙连接和紧密连接,使得再生过程中物质交换和信息交换更为便捷和有效的进行。②目前大量研究尝试利用许旺细胞促进周围神经再生,许旺细胞与人工神经移植物共同运用在动物实验中已经取得了显著功效。随着转基因技术的发展,遗传修饰的许旺细胞成为研究热点。③许旺细胞的分离纯化技术从最早的反复植块法、消化法,到以heregulin/forskolin处理细胞然后用神经切断造模法,再到最近的抗体磁珠分选法,体外培养许旺细胞的纯度得到不断提升。④实验证明间充质干细胞诱导后可以分化为表达p75、S100、GFAP等胶质细胞的标志性分子,并能显著促进轴突生长和髓鞘形成。结论:许旺细胞促进周围神经再生的作用已受到广泛肯定,但其作用的信号通路仍不确定。正确诱导许旺细胞分化为成熟的成髓鞘许旺细胞、保证其在损伤局部的存活是修复周围神经损伤的关键。

Lhx8在海马胆碱能神经再生中的作用

目的探讨切割穹隆海马伞大鼠海马胆碱能神经再生过程中Lhx8的作用。方法 72只SD大鼠随机分成4组,每组18只。所分的4组分别为:对照组(未做任何处理),切割组(切割右侧穹隆海马伞),过表达组(右侧海马齿状回中注射Lenti6.3-Lhx8慢病毒)及切割联合过表达组(右侧海马齿状回中注射Lenti6.3-Lhx8慢病毒并切割右侧穹隆海马伞)。28d后每组各取6只分别制备脑冷冻切片行免疫荧光检测,提取海马总RNA行Real-time PCR,提取海马蛋白行Western blotting检测。结果与对照组相比,切割组、过表达组和切割联合过表达组中Lhx8 mRNA和蛋白水平均显著上调,以切割联合过表达组中上调最为显著,组间比较差异均有统计学意义;切割组胆碱乙酰转移酶(ChAT)mRNA水平与对照组相比无统计学差异,过表达组和切割联合过表达组中ChAT mRNA显著上调,且以切割联合过表达组中上调最为显著;切割组、过表达组和切割联合过表达组中均检测到ChAT蛋白,组间比较差异有统计学意义;切割组、过表达组和切割联合过表达组海马齿状回门区和颗粒下层中均能检测到新生的Lhx8阳性的胆碱能神经元,且以切割联合过表达组最多,组间比较差异均有统计学意义。结论上调Lhx8的表达能促进海马中神经干细胞向胆碱能神经元分化,Lhx8可能与海马胆碱能神经再生有关。

神经再生素对PC12细胞凋亡的影响

目的 研究神经再生素 (NRF)对PC12细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。 方法 通过观察细胞形态的变化、MTT微量比色法、流式细胞仪AnnexinV和caspase 3活力检测等方法 ,了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响。NGF和RPMI16 40作对照。 结果 培养细胞的突起生长数量和长度、MTT微量比色的A值、AnnexinV PE 7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase 3活力的检测等指标 ,在NRF组和NGF组间无明显差异 ;而与空白对照组间差异有显著性意义。 结论 神经再生素对低血清培养下PC12细胞的凋亡有抑制作用。

神经再生素促进大鼠坐骨神经损伤后再生

目的：探讨神经再生素（NRF）对大鼠坐骨神经损伤后再生的影响。方法：SD大鼠30只，雌雄各半，随机分为3组：NRF低、高剂量组和空白对照组。分别于坐骨神经夹伤术后10、15、20d测定大鼠坐骨神经功能指数（SFI），分离出大鼠双侧坐骨神经行电生理学检测，计算神经干动作电位恢复率；各组随机选取2只大鼠，应用透射电镜观察再生坐骨神经超微结构；其余大鼠行光镜下观察脊髓腰膨大（k～k）、夹伤远端处坐骨神经、损伤侧腓肠肌组织，并测定脊髓前角运动神经元数、再生有髓神经纤维数、腓肠肌肌细胞截面积等指标。结果：术后10d各组SFI无显著差异，术后15d仅仅高剂量组SFI明显优于对照组（P〈0．01），术后20d高、低剂量组SFI均优于对照组（P〈0．01，P〈0．05）；术后20d高、低剂量组及对照组大鼠坐骨神经干动作电位的恢复率分别为（57±26）％、（44±15）％、（31±9）％，其中高剂量组与对照组相比有显著差异（P〈0．05）；高剂量NRF组的有髓神经纤维成熟度优于对照组，而变性纤维少于对照组；光镜下NRF高剂量组再生神经纤维排列致密整齐、结构均匀，腓肠肌肌细胞饱满、排列整齐，双侧脊髓前角运动神经元更接近；NRF高剂量组脊髓前角运动神经元计数、有髓神经纤维计数均显著高于对照组（P〈0．05，P〈0．01），NRF高、低剂量组腓肠肌肌细胞截面积显著高于对照组（P〈0．01，P〈0．05）。结论：NRF能促进坐骨神经再生及其功能恢复。

神经再生素促进神经干细胞的生长和分化

目的：研究神经再生素对体外培养神经干细胞分化的促进作用及对其生长相关蛋白（GAP43）、神经丝蛋白（NF-H）表达的影响。方法：取出生3～5d的新生SD大鼠大脑皮层进行神经干细胞的体外培养、鉴定，神经干细胞与0、1、2mg／L的神经再生素（NRF）共培养8d，相差显微镜观察分析，应用Real-timePCR对与不同浓度的NRF（0、1、2、4、8rag／L）共培养8d的神经干细胞进行GAP43、NF-H的表达量检测。结果：成功培养出具有多向分化潜能的神经干细胞；神经再生素可明显促进神经干细胞的分化，并能在一定范围内随浓度递增而有效促进GAP43、NF-H的表达，且最佳作用浓度为4mg／L。结论：神经再生素可以促进神经干细胞的生长和分化。

中药神经再生素在基因水平对神经元生长的影响

目的观察神经再生素(NRF)影响海马神经元生长的机制。方法用胚胎17d的大鼠海马离体培养神经原,分用药组和对照组,培养6h加NRF(1μg/ml),检测神经元突起长度,提取细胞的总RNA并纯化,设计合成G蛋白偶联受体(GPCR)基因的引物,采用Taqman荧光探针,实时定量PCR,检测离体培养海马神经元用药组和对照组细胞GPCR基因表达量的变化。结果用药组的神经元突起生长较长,GPCR的基因表达量显著高于对照组(P<0·01)。结论NRF使海马神经元生长并增加GPCR基因的表达,GPCR可引起神经细胞生长的生物效应。

神经再生素促海马神经元生长的基因芯片研究

目的:探索中药“神经再生素”对海马神经元生长的作用及生物学机制。方法:采用海马神经元培养及基因芯片技术,中药组加入神经再生素1μg/ ml ,对照组加入等量基础培养液。培养6 h后,观察海马神经元突起长度,并提取2组的神经元总RNA,经反转录分别用荧光标记成cDNA探针,与大鼠全基因组芯片杂交,芯片扫描,后行GCOS软件处理。结果:中药组细胞突起长度(18μm)明显长于对照组(12μm)(P<0 .01)。在基因芯片15866条基因中,248条基因上调,316条基因下调,这些基因有细胞组份、生物过程生长代谢调控因子、信号转导分子、凋亡调控因子、免疫蛋白、酶等。结论:中药“神经再生素”可促海马神经元生长。差异表达的基因为寻找药物作用的基因靶点提供了基础。

神经再生素对PC12细胞凋亡的影响

目的 :研究神经再生素 (NRF)对PC12细胞凋亡的影响。方法 :通过多种方法 ,了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响。结果 :培养细胞的突起生长数量和长度、MTT微量比色、AnnexinV -PE/7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase -3活力的检测等指标 ,在NRF组和NGF组间无明显差异 ;和空白对照组间差异有显著性意义。结论