重组人红细胞生成素影响系膜细胞生长与纤维连接蛋白表达的实验研究

目的通过观察重组人红细胞生成素(rhEPO)影响肾小球系膜细胞生长,以及表达纤维连接蛋白(FN)的作用,探讨应用rhEPO后对肾组织可能产生的生物学效应。方法培养的大鼠肾小球系膜细胞在不同剂量(1、10、100和1000U.ml-1)rhEPO的作用下,细胞计数和蛋白浓度测定评价细胞是否肥大;蛋白免疫印迹法检测FN蛋白表达的变化。♂CD-1小鼠接受单次(n=8)腹腔注射rhEPO(1000 U.kg-1体重),注射后24 h处死并分离肾小球以检测其FN表达量的变化。结果①rhEPO能够增加系膜细胞蛋白质的含量,以100 U.ml-1工作浓度rhEPO的作用效果最为明显[(1.269±0.382)μg.10-3cellsvs(0.247±0.058)μg.10-3cells;P<0.01)];②rhEPO能够刺激系膜细胞上调FN蛋白的表达,与对照组相比,100 U.ml-1的rhEPO明显增加系膜细胞FN蛋白的表达,随着rhEPO浓度的增加,系膜细胞FN的表达进一步增多,呈剂量依赖性;③间接免疫荧光检测可见rhEPO作用系膜细胞24 h后,可见大量呈网状、条索状,甚至板块状FN蛋白分布于细胞间隙;④单次腹腔注射rhEPO后24 h的肾小球FN增加。结论rhEPO可以造成系膜细胞的肥大,同时诱导系膜细胞增加FN合成,提示rhEPO可以通过影响系膜细胞的功能造成肾小球功能的异常。

中国人群CTLA-4基因49位点A/G多态性与1型糖尿病关联性的Meta分析

目的评价细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)基因外显子1上49位点A/G多态性与中国人群1型糖尿病(T1DM)的关联性。方法检索电子期刊数据库,应用RevMan 5.0对入选文献进行Meta分析,并评估发表偏倚。结果共6篇文献纳入研究,包括970例T1DM患者和1098名对照。CTLA-4基因49 A/G位点G等位基因与A等位基因OR值为1.82,95%CI为1.59～2.08,P<0.01;基因型(GG+GA)与AA的OR值为2.66,95%CI为1.97～3.60,P<0.01。Begg’s检验P=0.261,即所纳入研究未发生发表偏倚。结论 CTLA-4基因49位点G等位基因是中国人群T1DM的遗传危险因素之一。

金银花提取物对小鼠肝脏和人肝细胞PGC-1α表达及胰岛素抵抗的影响

目的检测金银花提取物对小鼠肝脏和L02细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)共激活因子-1α(PGC-1α)表达及对胰岛素抵抗(IR)的影响。方法分别将ob/ob小鼠、C57/B6J小鼠和L02细胞随机分为对照组和实验组,实验组给予金银花提取物,对照组给予生理盐水。给药后检测小鼠肝脏和L02细胞PGC-1α表达。结果与对照组相比,实验组ob/ob小鼠给予金银花提取物后肝脏PGC-1α mRNA和蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01);而实验组C57/B6J小鼠给药后肝脏PGC-1 α mRNA表达与对照组比较无统计学差异。给药5 d后实验组ob/ob小鼠FPG降低,但实验组与对照组组间胰岛素水平无统计学差异,实验组FPG/FIns比值显著降低。胰岛素耐量实验显示金银花提取物改善了ob/ob小鼠的IR。脂肪酸培养L02细胞,给予金银花提取物后PGC-1α mRNA表达下调(P<0.05),而正常培养L02细胞PGC-1α mRNA表达无变化。结论金银花提取物可以下调PGC-1α在肝脏中的病理性高表达,降低血糖,改善IR。

肝细胞癌中PGC-1α基因的表达下调及其意义

目的探讨PGC-1α在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及其在肝细胞癌发生发展中的调节作用。方法采用定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）分析HCC组织和正常肝组织中PGC-1α基因的表达，比较癌组织与正常组织的表达差异。采用siRNA干扰技术体外抑制人正常肝细胞株L02中PGC-1α基因的表达，并在光镜下观察细胞形态，电镜下观察细胞超微结构的改变。应用人全基因组Oligo DNA芯片分析比较肝组织和肝细胞基因的表达变化。结果HCC组织中PGC-1α基因的表达明显下调，仅为正常肝组织的25．0％。抑制PGC-1α基因的表达可使人正常肝细胞株L02呈现出类似肝癌细胞的形态和超微结构变化，即细胞变小、变圆，胞质减少、核增大，细胞数量减少，成簇分布，线粒体膜呈髓鞘样变性等。基因芯片分析显示，抑制PGC-1α基因的表达可使人正常肝细胞株L02呈现出类似肝癌组织的基因变化趋势，即细胞黏附基因（TNFAIP6、ITGAX、ICAM1、FN1、EMR1、ITGA6、PARVA）、成瘤基因（PMAIP1、CRKL、FHIT、IRF1、PLK）和促进细胞增殖基因（STAT1、CCL3L1、IL6、WARS、PCK1、MUC2、PRKR、IFITM1）表达上调，肿瘤抑制基因（FHIT、PRKR、IL24、DLEU1、RCN2）表达下调。结论PGC-1α表达下调能诱导人正常肝细胞株L02的肿瘤性转化，PGC-1α在肝癌发生发展中具有重要的调节作用。

整合素连接激酶介导的高糖诱导肾小管上皮细胞纤连蛋白的表达

目的观察在高糖刺激下纤连蛋白（FN）与整合素连接激酶（ILK）在肾小管上皮细胞的表达情况，探讨糖尿病肾病小管间质纤维化的发病机制。方法以人肾小管上皮细胞株（HKC）细胞和链脲佐菌素（STZ）诱导的CD-1小鼠糖尿病动物模型为研究对象，采用Western印迹的方法检测细胞或肾组织ILK和FN蛋白的表达。通过基因转染的方法，将含无激酶活力的人ILK基因表达质粒pCMV-kdlLK转染HKC细胞，观察抑制ILK活力对高糖诱导的HKC合成FN的影响。结果STZ注射后4周，CD-1小鼠血糖水平显著高于对照组[（20．3±2．7）mmol／L比（6．1±1．4）mmol／L，P〈0．01]，同时，肾组织ILK和FN的表达量亦显著高于对照组，且ILK与FN表达量呈正相关（P〈0．01）。细胞培养实验证实，高糖能够刺激HKC上调ILK和FN蛋白的表达，并且呈时间和剂量依赖性。HKC细胞转染pCMV—kdILK质粒以抑制ILK的活力，能够显著地拮抗高糖刺激HKC表达FN的作用。结论高糖通过上调ILK蛋白增加肾小管表达并合成FN，抑制ILK能够拮抗高糖刺激HKC合成FN的作用。

红细胞生成素对肾小管上皮细胞纤连蛋白表达的影响

重组人红细胞生成素（rhEPO）是纠正肾性贫血的有效药物。随着该药在治疗慢性肾脏病（CKD）患者贫血中的推广使用，其对CKD患者肾组织结构与功能的影响亦日益受到关注。rhEPO是否参与并造成肾脏组织结构的变化，影响肾衰竭的进展，对于应用rhEPO的CKD患者具有十分重要的意义。因此，我们通过观察rhEPO对肾小管纤连蛋白（FN）表达的影响，探讨rhEPO对机体肾组织可能产生的生物学效应。

一例Fabry病患者α-半乳糖苷酶基因突变和酶活性分析

目的分析1例临床诊断的15岁典型Fabry病男性患者的临床表现、α-半乳糖苷酶A（d—GalA）基因（GLA）突变位点及其活性，并对无临床表现的患者母亲进行了相应的对照分析。方法收集该例患者的临床资料，提取患者及其母亲、1名健康对照者的外周血基因组DNA，PCR分段扩增GLA基因的7个外显子，产物纯化后克隆人T载体进行DNA测序，检测是否存在突变位点，进一步应用荧光底物法检测α-GalA的活性。结果基因检测证实患者GLA基因第7号外显子发生一个错义突变，即10036—10038位的AAG缺失（10036—10038delAAG），导致其编码的第374位的赖氨酸和第375位甘氨酸突变成精氨酸，该突变位点经国内外文献检索未见报道。该患者为带有突变基因的半合子，母亲为携带突变基因的杂合子，健康对照者未发现突变。α-GalA酶活性检测结果显示，携带该突变位点GLA基因的患者，其α—GalA酶活性只有健康对照者的50％左右，患者母亲的α—GalA酶活性为健康对照者的70％左右。结论对临床疑似的Fabry病患者及其亲属，进行GLA基因突变检测，结合α—GalA酶活性检测，有助于早期筛选出家系中的其他患者，能更加深入地了解Fabry病的分子发病机制。