奈达铂对不同EBV状态鼻咽癌细胞放射增敏的实验研究

目的 观察奈达铂对人鼻咽癌细胞系CNE2（EBV-）和C666（EBV＋）的抑制作用及放射增敏作用,并探讨其作用机制.方法 不同浓度奈达铂（0～100μg/ml）作用于人鼻咽癌CNE2（EBV-）和C666（EBV＋）细胞,MTS法检测奈达铂的细胞增殖抑制作用,并计算IC50值;以IC5和IC10奈达铂浓度作为增敏剂量,MTS法和克隆形成法检测细胞放射敏感性的变化,流式细胞术检测细胞凋亡百分率及细胞周期的改变.结果 MTS实验奈达铂对CNE2和C666细胞IC50值分别为34.32μg/ml和63.69μg/ml（24h）;增敏实验分为空白对照组、NDP1组（CNE2 0.34μg/ml,C666 0.69μg/ml）和NDP2组（CNE2 0.64μg/ml,C666 1.27μg/ml）,4Gy照射后三组细胞存活率,CNE2细胞为（90.0±0.3）%、（80.2±0.5）%、（53.3±0.7）%（24h）,（76.7±0.1）%、（60.0±0.6）%、（40.0±0.2）%（48h）,（66.7±0.7）%、（40.2±0.4）%、（30.0±0.6）%（72h）;C666细胞为（92.3±0.2）%、（61.5±0.7）%、（50.3±0.3）%（24h）,（77.7±0.2）%、（44.6±0.9）%、（36.2±0.4）%（48h）,（53.8±0.2）%、（34.6±0.3）%、（23.1±0.4）%（72h）;以克隆形成结果拟合存活曲线,CNE2细胞SF2为0.46、0.26、0.14,C666细胞SF2为0.43、0.31、0.20;CNE2和C666细胞SER（SF2）为1.77和1.39（NDP1）,3.29和2.15（NDP2）;照射后三组细胞凋亡率,CNE2为（4.55±0.12）%、（9.02±0.75）%和（14.55±0.45）%,C666细胞为（4.02±0.33）%、（7.11±0.32）%和（10.36±0.58）%;三组细胞G2/M期比例,CNE2为（3.49±0.25）%、（17.55±0.55）%和（32.09±0.48）%,C666为（3.65±0.18）%、（13.75±0.51）%和（30.11±0.77）%;两种细胞系组间比较差异均具统计学意义（P＜0.05）.结论 奈达铂对不同EBV状态的人鼻咽癌CNE2和C666细胞具有放射增敏作用,增敏作用CNE2细胞（EBV-）优于C666细胞（EBV＋）,其增敏机制与增加细胞凋亡、调节G2/M期比例有关.

miR-342-3p对三阴性乳腺癌化疗敏感性的影响

目的:研究miR-342-3p对三阴性乳腺癌化疗敏感性的影响。方法:收集江苏省肿瘤医院乳腺外科2011年1月至2013年8月行术前化疗的三阴性乳腺癌病人32例,其中完全缓解(CR)5例,部分缓解(PR)27例,检测肿瘤组织中miR-342-3p的表达情况;应用脂质体转染方法,三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231转染has-miR-342-3p模拟物(mimic)和miR-342-3p抑制物(inhibitor),设立阴性对照(mim-NC)组和(inhi-NC)组。mimic组,mim-NC组,inhibitor组和inhi-NC组细胞株,分别加入浓度为2μmol/L的紫杉醇,顺铂及4μmol/L的阿霉素进行培养;应用CCK8法和流式细胞仪检测48 h后肿瘤细胞增殖率和凋亡的变化。结果:miRNA-342-3p在术前化疗后达到CR的三阴性乳腺癌组织中的表达明显高于PR的三阴性乳腺癌组织(P<0.05)。Mimic组细胞株与紫杉醇,顺铂作用48 h后肿瘤细胞增殖率低于mim-NC组,凋亡率高于mim-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。Inhibitor组细胞株与紫杉醇,顺铂作用48 h后,肿瘤细胞增殖率高于inhiNC组,凋亡率低于inhi-NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。但与阿霉素作用后细胞增殖率和凋亡率在mimic组与mimNC组,inhibitor组与inhi-NC组,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-342-3p高表达的三阴性乳腺癌对化疗药物反应更敏感,miR-342-3p能调控乳腺癌细胞株MDA-MB-231对紫杉醇和顺铂的化疗敏感性,但miR-342-3p不影响MDAMB-231细胞株对阿霉素的化疗敏感性。

鼻咽癌细胞增殖因素的检测与预后的相关性

目的 :探讨鼻咽癌组织中细胞增殖因素cyclinD1、c erbB 2、Ki 67、PCNA蛋白的表达及其与鼻咽癌预后的关系。 方法 :以免疫组化S P法检测 2 12例鼻咽癌组织cyclinD1、c erbB 2、Ki 67和PCNA蛋白的表型。 结果 :cyclinD1蛋白表达阳性率81 2 5 % ,表达程度与临床分期、原发灶范围、鼻咽部复发呈正相关 ,与患者 5年生存率呈负相关。c erbB 2蛋白表达阳性率为95 % ,表达程度与临床分期、原发灶、颈部转移灶、局部复发及远处转移呈正相关 ,与 5年生存率呈负相关。Ki 67蛋白表达阳性率为 97% ,表达程度与临床分期、原发灶、颈部转移灶呈正相关。PCNA蛋白表达阳性率为 99%。在cyclinD1、c erbB 2、Ki 67及PCNA 4因素中除Ki 67与PCNA无明显相关性外 ,其他因素间均存在明显的相关性。多因素分析表明对鼻咽癌预后有显著影响的因素是cyclinD1、c erbB 2。 结论 :cyclinD1、c erbB 2与鼻咽癌的预后有较好的相关性 ,对于cyclinD1、c erbB 2高表达的患者 。

miR-342-3p在不同乳腺癌分子亚型及乳腺癌细胞株中的表达

目的：乳腺癌的个体化治疗越来越受到人们的重视，不同乳腺癌分子亚型具有不同的预后和治疗方案，研究发现miR-342-3p与乳腺癌激素受体和内分泌治疗耐药相关，与肿瘤细胞凋亡相关，课题进一步研究miR-342-3p在不同乳腺癌分子亚型和不同乳腺癌细胞株中的表达，揭示miR-342-3p在乳腺癌个体化治疗中的重要作用。方法收集乳腺癌手术患者组织标本共90例及培养乳腺癌细胞株MCF-7、SKBr3和MDA-MB-231，使用实时荧光定量PCR检测miR-342-3p在乳腺癌组织中的表达情况。结果 miR-342-3p在不同分子亚型乳腺癌组织中的表达以Lumina B型最高（1．594±0．465），其次为Lumina A 型（1．386±0．443），再次是Her-2高表达型（1．165±0．337），三阴性乳腺癌组织中表达最低（0．837±0．351），差异有统计学意义（P＜0．05）；miR-342-3p的表达在不同年龄组、有无淋巴结转移及与肿瘤大小、组织分级和病理分期方面，差异无统计学意义（P＞0．05）；miR-342-3p在乳腺癌细胞株中的表达，以SKBr3为参照，MCF-7的相对倍数为126（118～134），MDA-MB-231的相对倍数为0．017（0．014～0．018）。结论 miR-342-3p在不同乳腺癌分子亚型和乳腺癌细胞株中表达存在差异，与乳腺癌不同分子亚型相关，可能成为乳腺癌分型的参考指标和好的预后相关。

亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与乳腺癌新辅助化疗敏感性关系的研究探讨

目的研究叶酸代谢的关键酶亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T、A1298C多态与乳腺癌患者对新辅助化疗敏感性的关系。方法收集经病理学或细胞学确诊的乳腺癌患者61例,均给予新辅助化疗。接受环磷酰胺、表阿霉素、5-氟尿嘧啶联合化疗方案（CAF）化疗34例,表阿霉素、紫杉醇联合化疗方案（AT方案）化疗27例。所有病例化疗前抽静脉血,提取白细胞DNA,用聚合酶链反应限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测MTHFR基因型。化疗后均测量肿块大小进行疗效评价,手术均行病理检查,观察化疗反应分级情况。结果 61例乳腺癌患者中,使用CAF方案和AT方案的临床有效率分别为61.5%、75.0%,差异无统计学意义;Ⅰ~Ⅲ级化疗反应率分别为55.9%、74.1%,差异无统计学意义。携带MTHFR C677T T/T基因型、C/T基因型、C/C基因型的乳腺癌患者化疗的临床有效率分别为83.3%、72.4%、42.9%,Ⅰ~Ⅲ级化疗反应率分别为83.3%、65.5%、35.7%。携带T/T基因型乳腺癌患者的临床有效率和Ⅰ~Ⅲ级化疗反应率均显著高于携带C/C基因型的患者,而与携带C/T基因型患者相比差异无统计学意义。携带MTHFR A1298C A/A基因型、A/C基因型、C/C基因型的乳腺癌患者化疗的临床有效率分别为70.5%、64.7%、0.0%,Ⅰ~Ⅲ级化疗反应率分别为70.5%、47.1%、0.0%。携带MTHFR A1298C A/A基因型患者的临床有效率和Ⅰ~Ⅲ级化疗反应率与A/C及C/C基因型患者之间差异均无统计学意义。结论 MTHFR C677T基因多态性的作用与乳腺癌新辅助化疗敏感性之间存在着一定的相关性,对预测乳腺癌新辅助化疗的疗效具有良好的临床应用前景。

miR-342-3p对乳腺癌化疗敏感性的影响

目的:研究miR-342-3p对乳腺癌化疗敏感性的影响。方法:检测乳腺癌细胞株MCF-7、SKBr3和MDA-MB-231中miR-342-3p的表达。应用脂质体转染方法,转染hsa-miR-342-3p模拟物到低表达miR-342-3p的乳腺癌细胞株(mimic转染组),同时设立阴性对照(mim-NC转染组);转染miR-342-3p抑制物到高表达miR-342-3p的乳腺癌细胞株(inhibitor转染组),同时设立阴性对照(inhi-NC转染组)。mimic转染组、mim-NC转染组、inhibitor转染组和inhi-NC转染组细胞,分别加入浓度为2μmol/L的紫杉醇、顺铂及4μmol/L的阿霉素的进行培养,应用CCK8法检测药物作用48 h后细胞增殖率的变化。结果:以SKBr3为参照,miR-243-3p在MCF-7细胞中的相对表达倍数是126.000,在MDA-MB-231细胞中的相对表达倍数是0.017。mimic转染组细胞与紫杉醇、顺铂孵育48 h后,肿瘤细胞增殖率低于mim-NC转染组,差异有统计学意义(P<0.05),但与阿霉素孵育后细胞增殖率与mim-NC转染组差异无统计学意义(P>0.05);inhibitor转染组细胞与紫杉醇、顺铂和阿霉素孵育48 h后,肿瘤细胞的增殖率高于inhi-NC转染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-342-3p能调控乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7对紫杉醇和顺铂的化疗敏感性,但提高miR-342-3p表达不能增加MDA-MB-231细胞对阿霉素的化疗敏感性,降低miR-342-3p的表达却可以减弱MCF-7细胞对阿霉素的化疗敏感性。

miR-342与乳腺癌ERα表达及他莫昔芬敏感性关系探讨

目的:探讨miR-342与乳腺癌临床病理的关系及是否参与调节ERα并影响他莫昔芬(TAM)的敏感性。方法:RT-PCR检测48例癌组织miR-342和ERαmRNA水平及其中24例癌旁组织miR-342的表达;免疫组化评价癌组织ER、PR、HER-2和VEGF的状态;RT-PCR检测乳腺癌细胞株MCF-7、SKBR-3及MB-231的miR-342、ERαmRNA水平;检测MCF-7细胞瞬时转染hsa-miR342(分mimic、inhibitor及各自阴性对照共4组)48h后miR-342和ERαmRNA的变化;1×10-8 mol/L 17-β雌二醇(E2)单独或联合2×10-5 mol/L TAM处理MCF-7细胞72h,CCK-8法测不同转染组细胞增殖;各转染组细胞1.5×10-5 mol/L TAM处理48h,流式细胞术分析细胞凋亡率。结果:miR-342及ERαmR-NA在ERα阳性乳腺癌组织及细胞中均明显升高,P<0.01;miR-342和ERαmRNA之间存在正相关,P=0.003。miR-342在HER-2阴性(P=0.001)及VEGF阴性(P=0.031)乳腺癌组织中上调;miR-342与PR、淋巴转移、病理分级等因素无明显关系,P>0.05;癌与癌旁miR-342表达差异无统计学意义,P=0.065。MCF-7细胞mimic组ERαmRNA表达为1.80±0.14,高于对照组的1.0±0.0,P=0.001;inhibitor组为0.747±0.087,较对照组低,P=0.037。TAM作用72h,mimic组细胞增殖率为(45.9±1.3)%,与对照组的(55.0±1.5)%相比明显抑制,P=0.001;inhibitor组增殖率为(72.9±1.9)%,较对照组升高,P=0.000。流式细胞术分析TAM处理后的细胞凋亡率,结果显示,mimic组凋亡率为(9.54±1.14)%,较对照组的(4.50±0.46)%增加,P=0.002;inhibitor组凋亡率为(3.06±0.42)%,较对照组的(4.95±0.59)%降低,P=0.011。结论:miR-342的表达可以一定程度预测ERα的表达水平,并作为分子标志预测乳腺癌细胞对TAM的敏感性;miR-342有望成为潜在靶点来参与乳腺癌内分泌治疗。