综合医院实验中心新冠肺炎疫情防控实践探索与思考

新冠肺炎疫情期间,苏北人民医院实验中心根据自身特点,结合疫情防控要求,提出苏北人民医院实验中心的疫情防控管理策略。通过建立完善疫情防控制度、人员分类管理、强化人员感控培训及考核、加强实验场所及冷链试剂管理以及创新工作模式等措施,有效降低实验中心的感染风险,保障了实验中心的安全运行。

地方综合性医院生物样本库在新冠肺炎疫情常态化下的工作实践

新型冠状病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引起的传染病,该病目前被纳入《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病,并按甲类传染病进行管理[1]。随着疫情发展和蔓延,奥密克戎毒株已取代德尔塔毒株成为新的主要流行株。奥密克戎毒株传染性更强、隐匿性更高、传播速度更快、传染范围更广[2],导致全球COVID-19病例报告数激增[3]。截至2022年11月8日,全球累计报告确诊病例629978289例,死亡病例6582023例[4]。目前,国内疫情呈逐渐放开趋势,预防重心从预防感染转到预防重症,但同时钟南山院士也表示依然要在现有的政策体系下做好感染预防工作。生物样本库是医院临床科研的重要平台,受疫情传播影响,样本保藏工作的风险急剧增加,在疫情常态化防控期间,如何高效而有序开展非传染性疾病的样本保藏工作,是医院科研面临的一大挑战。因此,样本库需积极制订并完善疫情防控相关制度、切实提高样本库工作人员疫情防控意识和技能水平,同时做好样本保藏工作的全流程管理。

琥珀酸脱氢酶A对胃癌增殖、迁移和侵袭的影响及意义

目的检测琥珀酸脱氢酶A(SDHA)在胃癌组织及细胞中的表达水平,探讨其对胃癌增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法通过免疫组织化学法检测SDHA在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况。结合Western blotting检测SDHA在正常胃上皮细胞与胃癌细胞中的表达。通过Transwell实验、划痕实验、CCK-8实验、克隆形成实验进一步研究异常表达SDHA对胃癌细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响。结果免疫组织化学及Western blotting结果提示,SDHA在胃癌组织及胃癌细胞中高表达。敲低及过表达SDHA可影响胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。此外,SDHA表达与肿瘤免疫浸润显著相关。结论SDHA能够促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,有望成为胃癌治疗的潜在靶点。

miR-17-5p在胶质瘤细胞中的作用机制

目的研究miR-17-5p在胶质瘤细胞中的作用机制。方法通过qRT-PCR检测miR-17-5p在胶质瘤细胞中表达及克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术验证胶质瘤细胞的增殖迁移及放疗敏感性。结果 miR-17-5p在胶质瘤组织样本高于癌旁正常组织,在胶质瘤细胞系高于正常星状细胞。转染miR-17-5p mimics后,促进细胞增殖侵袭;转染miR-17-5p ASO后,降低细胞增殖和侵袭能力。转染miR-17-5p组胶质瘤细胞的凋亡细胞百分比显著低于对照组。结论 miR-17-5p在胶质瘤细胞中促进细胞增殖及迁移,同时具有降低胶质瘤细胞对放疗敏感性的作用。

RNA结合蛋白Larp1在卵巢癌侵袭转移中的作用及机制

目的 RNA结合蛋白Larp1在卵巢癌细胞转移与上皮间质转化(EMT)中有重要作用,进一步探讨Larp1在上皮性卵巢癌细胞中的侵袭转移作用与机制具有重要临床意义。方法在卵巢癌细胞中通过慢病毒转染过表达Larp1,通过3D侵袭实验、定点趋化实验分析在促生长因子影响下Larp1过表达对细胞侵袭转移的影响。结果细胞质内Larp1表达及分布与卵巢癌侵袭转移能力呈正相关,Larp1过表达会促进卵巢癌EMT,增强卵巢癌细胞侵袭能力;Larp1过表达的SKOV-3与OVCAR-3细胞对促生长因子(TGF-β、EGF、b FGF)趋化反应更加明显;Larp1过表达能促进卵巢癌细胞肌动蛋白纤维与应力纤维生成且Larp1与肌动蛋白纤维共定位。结论卵巢癌细胞中Larp1过表达能促进癌细胞侵袭转移,因此更加全面地理解Larp1在卵巢癌中的作用,可为诊断卵巢肿瘤分期及治疗提供新的理论依据。

H19/miR-29b/LOX影响胶质瘤细胞侵袭能力的体外研究

目的研究H19/miR-29b/LOX在胶质瘤细胞中的作用机制。方法通过qRT-PCR、克隆形成实验、Transwell实验检测H19、LOX在胶质瘤细胞中的表达及增殖转移能力。通过荧光素酶实验和生物信息学方法探讨H19/miR-29b/LOX之间的相关性。结果 H19、LOX在胶质瘤中随着转移程度异常表达量越高,正向调控细胞的转移增殖能力。H19能够结合miR-29b,而且miR-29b能够潜在靶向LOX基因,同时H19可以负向调控miR-29b。结论 H19/miR-29b/LOX在胶质瘤细胞中相互作用,影响细胞增殖及迁移。

rhuPAa-melittin在卵巢癌体内外的作用机制

目的利用流式细胞术检测不同浓度的rhu PAa-melittin作用于卵巢癌细胞的活性,进而初步探讨rhu PAa-melittin对卵巢癌细胞的抑制作用及体内抗瘤作用。方法利用不同浓度的rhu PAa-melittin蛋白分别作用于人卵巢癌细胞48 h,利用流式细胞术检测细胞周期及凋亡。rhu PAa-melittin蛋白作用于卵巢癌皮下移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况。结果分别以0、4、8、16μg/m L浓度作用人卵巢癌细胞48 h,凋亡率分别为1.16%、3.83%、6.51%、10.2%。不同浓度下G0/G1期细胞无明显作用,主要作用于S期,阻止由S期进入G2/M期,从而抑制肿瘤生长。结论 rhu PAa-melittin在卵巢癌的体内外实验中有效抑制了肿瘤的生长。

国内阿尔茨海默病样本收集现状分析

阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease,AD,俗称老年痴呆症）是最普遍的神经退行性疾病（占老年性痴呆总数的60%--80%）。自1906年发现至今已有一百多年时间。常以短期记忆力减退为首要症状,临床表现为认知和记忆功能不断恶化,日常生活能力进行性减退,并有各种神经精神症状（抑郁、焦虑不安、幻觉、妄想和失眠等）和行为障碍（踱步、攻击行为、坐立不安等）,最终进行性地发展为长期记忆障碍直至死亡。在世界老年人口（65岁以上）中每8人便有1人患此疾病。

动脉粥样硬化中巨噬细胞介导胞葬作用的研究进展

动脉粥样硬化斑块内累积的大量凋亡和坏死细胞是斑块增大、坏死核心形成及斑块破裂的主要原因。生理状态下,机体通过巨噬细胞等吞噬细胞介导的胞葬作用能及时吞噬和清除凋亡细胞。然而近年来研究表明,斑块内凋亡细胞的清除速度远远低于生理状态,其机制与巨噬细胞介导的胞葬功能障碍密切相关。本文综述了巨噬细胞介导的胞葬作用及其功能缺陷在动脉粥样硬化中的研究进展,期望为动脉粥样硬化性心血管疾病防治提供理论和实验基础。

Mistic融合蛋白促进ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1在大肠埃希菌中高效表达

目的构建真核膜蛋白ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因在大肠埃希菌中的高效表达质粒。方法利用分子克隆技术构建携带Fat-1基因的重组原核表达质粒pET32a-Fat-1和插入膜蛋白表达分子伴侣Mistic基因的pET32a-Mistic-Fat-1;将两种重组质粒转化大肠埃希菌株BL21(DE3),IPTG诱导表达Fat-1蛋白和M110-Fat-1蛋白,通过十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)灰度分析其表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)进一步鉴定蛋白表达。结果经酶切鉴定和测序证实成功构建了pET32a-Fat-1和pET32a-Mistic-Fat-1原核表达载体;SDS-PAGE和Western blot证实ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1在原核表达系统中没有明显诱导表达,而M110-Fat-1融合蛋白在大肠埃希菌中获得了高效表达,占全细胞蛋白总量的15%。结论ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因与Mistic基因融合表达,实现了在原核宿主中高效表达真核膜整合蛋白ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1。

多种脂源性细胞因子与2型糖尿病患者胰岛素抵抗相关

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者多种脂源性细胞因子与胰岛素抵抗作用关系。方法选择T2DM患者40例,根据BMI水平分为每20例为1组的obesity组和non-obesity组及正常对照组20人,检测血清空腹胰岛素(FINs)、空腹血糖(FPG)、血浆脂质(TG、TC、LDL、HDL)、脂联素(APN)、C1q/TNF相关蛋白3(CTRP3)、瘦素(leptin)及肿瘤坏死因子(TNF-α)等指标,根据HOMA公式,计算HOMA-AR并分析各指标之间相关性。结果 1)与正常对照组比较,T2DM组血清APN和CTRP3水平明显降低,leptin和TNF-α水平升高;与non-obesity组比较,obesity组APN和CTRP3的水平明显降低(P<0.05或P<0.01),leptin水平升高(P<0.05);2)相关分析发现,APN浓度与年龄、BMI、FPG、TC、TG、LDL、FINs和HOMA-IR呈负相关(P<0.05);CTRP3与FPG、FINs和HOMA-AR呈负相关(P<0.05),与TG呈正相关(P<0.05);leptin与FPG呈负相关(P<0.05);TNF-α与FPG呈正相关(P<0.05)。结论2型糖尿病患者血清中低APN、CTRP3和高leptin水平与肥胖和HOMA-IR密切相关可能是发病因子,其中FPG和TG作为独立因子,可作为评价胰岛素抵抗程度的新的敏感指标。

ω-3多不饱和脂肪酸对内毒素致大鼠急性肺损伤的影响

目的观察肠道给予ω-3多不饱和脂肪酸（PUFA）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠急性肺损伤模型的作用。方法将58只雄性SD大鼠分为5组：空白对照组（n=10），模型组（各组n=12），ω-3 PUFA高、中、低剂量组（各组n=12）。造模前7d开始，ω-3PUFA高、中、低剂量组分别口服灌胃t｜）-3PUFA1、0．5、0．25g／kg体重，1次／d，连续7d。末次给药后24h，除空白对照组外，其余各组大鼠尾静脉注射LPS（6mg／kg）造成急性肺损伤模型，造模后观察大鼠一般情况。0、6、24h测量大鼠体温。造模24h后眼静脉丛采血检测血常规和血生化指标。大鼠活杀后取左叶肺称量湿重、干重和湿／干重比（W／D），取右叶肺做光学显微镜下病理学观察，计算半定量病理指数（PI）。结果造模24h后，除空白对照组外其他各组均有死亡，各组指标按n=10计算。大鼠注射LPS后均出现蜷卧少动等症状。6h时模型组体温明显高于空白对照组[（37．4±O．27）℃比（35．9±0．05）℃，P：0．00]；ω-3PUFA高、中、低剂量组体温分别为（36．2±0．38）、（36．3±0．30）、（36．3±0．32）℃，均显著低于模型组（P均=0．01）。模型组白细胞、中性粒细胞和淋巴细胞计数均升高，但与其他组比较，差异无统计学意义。模型组血清谷草转氨酶（GOT）和谷丙转氨酶（GPT）水平明显高于空白对照组[（353±235）U／L比（157±55）U／L，P=0．02；（141±103）U／L比（54±23）U／L，P=0．03]，CO-3PUFA高剂量组的GOT和GPT水平低于模型组[（167±94）U／L，P=0．03；（63±57）U／L，P=0．04]。模型组大鼠肺湿重；（371±38）mg比（281±24）mg，P=0．01]和W／D均显著高于空白对照组（7．34±1．40比5．41±0．84，P=0．01）；ω-3 PUFA高、中、低剂量组W／D较模型组显著降低（6．17±0．58，P=O．03；6．17±O．76，P=0．03；6．13±1．23，P=0．04）。光学显微镜下观察，模型组肺泡因充血而明显扩张，间质可见散在炎性细胞浸润；ω-3 PUFA各组大部分肺泡结构尚好。模型组PI值显著高于空白对照组（3．9±0．9比0．0±O．0，P=0．00），ω-3 PUFA高、中、低剂量组PI值均显著低于模型组（2．1±0．3、2．1±0．3、2．3±0．5，P均=0．01）。结论LPS可成功建立大鼠急性肺损伤模型。高、中、低剂量ω-3PUFA均可改善大鼠急性肺损伤。早期肠道给予（o-3PUFA可减轻LPS诱导的急性肺损伤，理想的干预时机及剂量仍需进一步研究。

强直性肌营养不良症的产前诊断及家系分析

目的通过检测强直性肌营养不良(DM)家系中临床疑似DM孕妇及其胎儿的强直性肌营养不良蛋白激酶(DMPK)基因中的CTG三核苷酸重复拷贝数,为DM家族中的患者和疑似个体的基因诊断及产前检查提供科学依据,以证实进行产前诊断的必要性。方法采用全外显子组测序(WES)及线粒体基因组检测、PCR联合毛细管电泳法,检测DM家系中可疑孕妇的外周血,胎儿的羊水及孕妇妹妹外周血中DMPK基因中CTG三核苷酸重复拷贝次数。结果胎儿WES结果未发现复合表型的新发变异或复合杂合突变,在受检者中未检测到明确致病性或疑似致病性拷贝数变异(CNV)。孕妇、胎儿及孕妇妹妹的DMPK等位基因CTG重复次数>100次,属于经典型动态突变。结论具有DM遗传家族病史的孕妇应及时进行产前诊断,以避免DM患儿的出生,提高人口素质。