骨髓增殖性肿瘤患者JAK2V617F基因突变及凝血功能研究

目的探讨骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasm,MPN)患者JAK2V617F基因突变的发生及凝血功能。方法选择69例MPN患者为研究对象,其中真性红细胞增多症(PV)24例,原发性血小板增多症(ET)45例。采用等位基因特异性聚合酶链反应(allele-specific polymerase chain reaction,AS-PCR)技术,检测JAK2V617F基因突变情况。同时检测MPN患者凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(aPTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原浓度(Fbg)、D二聚体(D-D)、血管性血友病因子(vWF)、抗凝血酶(AT),分析其与JAK2V617F基因突变之间的关系。结果 69例MPN患者中JAK2V617F基因突变率为66.6%(46/69),其中PV 20例,阳性率83.3%(20/24);ET 27例,阳性率60.0%(27/45)。MPN患者与正常对照组之间PT、aPTT、TT、D-D存在明显差异(P<0.05),vWF、ATⅢ无明显差异;MPN患者JAK2V617F基因突变阳性组与阴性组之间PT、aPTT、TT、存在明显差异(P<0.05),D-D、vWF、AT均无明显差异。白细胞计数在MPN患者JAK2V617F基因突变阳性组与阴性组之间存在明显差异(P<0.01)。结论 JAK2V617F基因突变在MPN患者中发生率高,可作为MPN诊断、鉴别诊断的重要依据。初诊MPN患者检测JAK2V617F基因突变、白细胞计数、凝血常规可初步评估MPN患者凝血功能,早期预防血栓形成。

强直性脊柱炎活动期患者调节性T细胞表达及与其它指标相关性的研究

目的探讨CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞(Treg)在强直性脊柱炎(AS)活动期患者发病中的作用机制及其与C-反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)的相关性。方法采用流式细胞术分别检测39例AS活动期患者和20例健康对照者外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞占CD4+T细胞比例,同时分别检测两组C-反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)的表达水平,并分析AS活动期患者CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞与CRP、ESR的相关性。结果 AS活动组外周血CD4+CD25+CD127low/-Treg与对照组比较明显降低,具有统计学意义(P<0.01)。AS活动组CRP、ESR与对照组比较均明显升高(P>0.05),具有统计学意义(P<0.01)。但AS活动期患者CD4+CD25+CD127low/-Treg表达率与CRP、ESR均未见明显相关性。结论 AS活动期患者CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞数量的减少可能使免疫活性细胞逃避机体对它们的免疫调节,导致体内诱导免疫耐受机能不足,从而促进AS的发生发展。进行CD4+CD25+CD127low/-Treg的检测有助于评估AS活动期患者免疫状态,判断疾病进展,但其与CRP、ESR的相关性尚有待于进一步的研究。

荧光原位杂交技术在套细胞淋巴瘤石蜡切片的应用研究

目的建立淋巴瘤石蜡切片应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测的操作流程,探讨其在套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)诊断中的应用价值。方法优化石蜡切片FISH检测步骤和实验条件,在16例病理拟诊断MCL的石蜡切片上应用FISH检测IGH/CCND1融合基因。结果确立了本实验室石蜡切片FISH检测的实验方法和条件;拟诊断MCL的病例中IGH/CCND1融合基因阳性检出率为75%(12/16)。结论淋巴瘤石蜡切片FISH检测可满足临床应用要求;应用FISH技术检测IGH/CCND1融合基因有助于MCL的诊断。

再生障碍性贫血患者CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞及T淋巴细胞亚群表达的研究

[目的]探讨再生障碍性贫血（AA）患者CD4＋ CD25＋ CD127low/-调节性T细胞（Treg）和T淋巴细胞亚群的表达及其在疾病发生发展过程中的意义.[方法]采用流式细胞术分别检测本院28例AA患者和20例健康对照组外周血CD4＋ CD25＋ CD1271ow/-Treg的比例以及T淋巴细胞亚群的表达.[结果]AA患者组CD4＋ CD25＋ CD127low/-/CD4＋ Treg为（4.60±2.11）％,健康对照组为（7.50±1.62）％,两组比较差异具有显著性（P＜0.05）.外周血T淋巴细胞亚群的表达AA组为CD3＋ CD4＋/CD3＋ （Th）：（42.47±5.22）％,CD3＋ CD8＋/CD3＋ （Ts）：（47.46±7.06）％,Th/Ts：0.92±0.19,健康对照组分别为CD3＋ CD4＋/ CD3＋（Th）：（53.28±4.92）％,CD3＋ CD8＋/CD3＋ （Ts）：（37.06±6.08）％,Th/Ts：1.52±0.33,两组比较差异均具有显著性（P＜0.01）.[结论]AA患者CD4＋ CD25＋ CD127low/-Treg细胞数量的减少可能使免疫活性细胞逃避机体对它们的免疫调节,导致体内诱导免疫耐受机能不足,从而促进疾病的发生发展.AA患者存在T淋巴细胞亚群的失调,CD4＋T淋巴细胞减低,CD8＋T淋巴细胞增多导致CD4＋/CD8＋比值降低可能是其重要的免疫学发病机制,进行CD4＋ CD25＋ CD127low/-Treg和T淋巴细胞亚群的检测有助于评估AA患者免疫功能状态及辅助诊断和指导治疗.

强直性脊柱炎患者CD25和Survivin表达的相关性研究

目的通过对强直性脊柱炎（AS）患者T细胞活化的研究以初步探讨凋亡途径survivin在其发病过程中的机制，并揭示其由于T细胞活化而引起的免疫状态的改变.方法以流式细胞术研究初诊AS患者33例和20例正常对照组样本，分析survivin和CD25在两组之间的差异.结果AS患者淋巴细胞CD25表达为（12．87±5．53）%，而正常对照组CD25表达为（2．11±0．47）%，两者比较P〈0．05，差异有统计学显著性意义.同时AS患者淋巴细胞survivin表达为（3．49±2．38）%，而正常对照组为（0．93±0．65）%，两者比较P〈0．05，差异有统计学显著性意义.结论AS患者淋巴细胞CD25和survivin表达较正常对照组明显增高，表明AS患者淋巴细胞处于高度活化状态，活化的T细胞在AS的病理损伤中起重要作用，可能导致其免疫机能的紊乱.通过AS患者T细胞活化CD25和survivin表达的研究，初步揭示淋巴细胞活化和survivin在AS发病中的机制，为在AS应用抗淋巴细胞凋亡等免疫治疗提供了实验依据.

多参数MFC和WT-1基因表达评估急性白血病MRD疗效和疾病预后意义

目的采用多参数流式细胞术(MFC)检测细胞膜表面标记和实时荧光定量(qPCR)术检测WT-1基因表达,评估急性白血病治疗后微小残留病灶(MRD)水平及对预后影响。方法 收集2018-2020年诊断的急性白血病患者52例,女性32例,男性20例,平均年龄53岁(年龄分布14~76岁),其中ANLL 43例,ALL 9例,分为初诊组、化疗组、缓解组。MFC监测MRD>0.1% 为阳性分为MRD阴性组及阳性组,以WT-1中位数为界,分为WT-1高表达组(WT-1>0.59%)和低表达组(WT-1%0.59%)。结果 1. 初诊时所有患者原幼细胞数及WT-1表达明显增高。经1/2疗程化疗后45例获缓解(CR),7例未缓解(NR),缓解组MRD及WT-1 表达显著低于未缓解组。2. 缓解组有23例随访1年后其MRD及WT-1显著升高伴疾病复发,MRD水平与WT-1表达两者呈正相关;3. MRD阳性及WT-1均高表达组复发率高达63.33%(n19/30)。MRD阴性及WT-1高表达组复发率为37.50%(n3/8)。MRD阳性及WT-1低表达组复发率为20%(n1/5)。MRD阴性及WT-1低表达者无复发为2例;4. MRD及WT-1表达水平与年龄、性别、初诊时WBC水平以及疾病类型等一般生物学信息无显著相关性(P>0.05)。结论 1. 同时监测MRD水平及WT-1表达对AL患者疗效评估和预后有意义;2. MRD及WT-1表达水平与年龄、性别、初诊时原始细胞水平、外周血WBC数和白血病类型等生物学信息无相关性。

1号染色体克隆性异常在恶性血液病中的发生及其临床意义

目的分析1号染色体克隆性异常在恶性血液病中的发生频率、类型，并了解其临床和生物学意义。方法对256例恶性血液病患者细胞遗传学R显带核型分析结果进行回顾性分析，将累及1号染色体的异常核型及临床资料进行总结，并结合文献复习。结果256例中涉及1号染色体异常的恶性血液病25例（9．8％），分别见于急性淋巴细胞白血病（ALL）-L2、急性非淋巴细胞白血病（ANLL）-M2、骨髓增生异常综全征（MDS）、多发性骨髓瘤（MM）、淋巴瘤骨髓浸润、慢性粒细胞加速急变期、浆细胞白血病、慢性粒单核细胞白血病。1号染色体与其他染色体之间易位11例，其中t（1；19）3例，t（1；14）2例，1号染色体部分增加或缺失7例，增加1条完整或部分缺失的1号染色体7例，1q等臂染色体3例。t（1；19）见于B淋巴细胞增殖性疾病，t（1；14）见于急性T淋巴细胞白血病。随访涉及1号染色体异常的20例患者，临床疗效差，生存期短。结论发生1号染色体克隆性异常的恶性血液病主要见于急性白血病、MDS、MM，非特异性的异常多见，特异性的异常主要是与其他染色体之间的易位和1q三体。具有重现性的异常有t（1；19）、t（1；14），均与白血病免疫表型相关；而1q三体和1q21扩增分别对MDS和MM的治疗、预后有指导意义。

细胞遗传学检测在慢性粒细胞白血病中的应用价值

目的分析慢性粒细胞白血病(CML)初诊和急变期患者染色体核型分析和间期FISH技术检测BCR/ABL融合基因的结果,探讨两种细胞遗传学方法在CML中的临床应用价值。方法 60例CML患者,包括44例初诊的患者和16例急变期患者,进行染色体R显带核型分析,同时应用间期荧光原位杂交技术(FISH),利用BCR、ABL位点特异性探针,检测患者的BCR/ABL融合基因。结果 60例CML患者中,染色体R显带核型分析57例(占95%)患者Ph(+),3例Ph(-)。FISH技术检测58例(占96.7%)患者BCR/ABL融合基因(+),2例BCR/ABL融合基因(-)。44例初诊患者中,42例Ph(+)/BCR/ABL(+),占95.5%;,1例Ph(-)/BCR/ABL(+),占2.3%;1例Ph(-)/BCR/ABL(-),占2.3%;16例急变期CML患者,15例Ph(+)/BCR/ABL(+),占93.8%;1例Ph(-)/BCR/ABL(-),占6.2%。其中8例(占50%)患者染色体R显带核型分析发现额外染色体异常,额外异常有+7,+8,t(4;22),t(1;3),t(4;11)及双Ph染色体等。结论常规R显带染色体核型分析和FISH技术在CML诊断均有重要的临床应用价值;FISH技术判断变异易位和Ph(-)/BCR/ABL(-)患者有重要意义;急变期染色体核型分析可预示病情进展。

多指标检测在骨髓增生异常综合征诊断中的应用评估

目的探讨多指标联合检测对骨髓增生异常综合征(MDS)诊断和分型的临床意义,并初步评估各实验指标的应用价值。方法收集江苏省苏北人民医院2010年1月—2014年12月期间确诊为MDS的89例患者临床资料,89例行骨髓细胞形态学和细胞遗传学分析(R显带核型分析);其中44例行荧光原位杂交技术(FISH)分析,62例完成骨髓活检组织病理学诊断;50例行流式细胞术(FCM)完成细胞免疫表型检测。结果 (1)形态学特征符合MDS诊断与分型标准59.6%(53/89),在各亚型中差异有统计学意义(P<0.05);(2)R显带核型分析检出率67.1%(53/79),在各亚型中差异无统计学意义(P>0.05);(3)同时行R显带核型分析和FISH检测异常染色体检出率为59.5%(22/37),仅核型分析检出率为54.1%(20/37),仅FISH检出率为48.6%(18/37)。2种检测方法符合率78.4%(29/37);(4)符合MDS病理组织学诊断特征者72.6%(45/62);FCM免疫学分析,32.0%(16/50)发现异常细胞群;(5)与细胞形态学单一指标相比,联合细胞形态学与遗传学2项指标以及细胞形态学、骨髓活检组织病理学和遗传学三项指标诊断MDS的符合率高(P<0.05);联合细胞形态学与骨髓活检组织病理学两项指标诊断符合率差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合多项检测指标,可提高MDS诊断率;形态学、骨髓病理学、细胞遗传学、免疫表型等各检测指标在MDS诊断和分型中各有其特点,均有重要的应用价值。