全血AS-PCR方法检测Wilson病ATP7B基因四个突变

目的研究肝豆状核变性ATP7B基因高频突变位点，探索全血等位基因特异性-PCR（allelespecificPCR，AS-PCR）技术在该基因4个常见突变检测中的应用。方法针对ATP7B基因4个突变位点（G2333T、C2850T、G2855A、G2975T）设计等位基因特异性弓I物，应用高保真酶对人抗凝全血样本进行聚合酶链反应，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳以判断待检样本有无基因突变及其等位基因型。PCR扩增人基因组ATP7B基因第8、12、13外显子，扩增产物直接进行基因序列测定。结果全血AS-PCR法检测ATP7B基因4个基因突变，各位点检测结果与基因序列测定完全相符。27份健康对照血样分型结果G2333T、C2850T和G2975T等3个位点没有出现突变，而G2855A位点突变率则达到了51．8％。22份患者血液样本分型结果显示除G2855A位点外，其余3个位点共检出11例含有突变，阳性率达到50％。结论建立了全血AS-PCR检测肝豆状核变性ATP7B基因4个基因突变的方法，为该病的早期诊断和及早治疗提供了有效的手段。