耳聋左慈丸在大鼠体内的药代动力学

建立大鼠血浆中耳聋左慈丸中成分毛蕊花糖苷、氧化芍药苷、松果菊苷、苯甲酰芍药苷的共检测LC-MS/MS定量方法,并运用此方法评价耳聋左慈丸在大鼠体内的药代动力学行为。采用甲醇作为蛋白沉淀剂,用蛋白沉淀法处理血浆样本,以甲醇为有机相,0.1%甲酸水溶液为水相,在负离子模式下对毛蕊花糖苷、氧化芍药苷、松果菊苷、苯甲酰芍药苷进行定量分析方法的建立,并且对所建方法进行方法学考证。选取健康SD大鼠,单次灌胃20 mL/kg(相当于原药10 g/kg剂量)的耳聋左慈丸提取液,运用建立的方法测定在给药后不同时间间隔的待测物质血浆浓度,并利用Phoenix WinNonlin8.3软件经非房室模型拟合计算药代动力学参数。方法学验证结果表明,毛蕊花糖苷(r=0.9937)、氧化芍药苷(r=0.9946)在0.5~50 ng/mL范围内线性良好,松果菊苷(r=0.9936)、苯甲酰芍药苷(r=0.9926)在1~100 ng/mL范围内线性良好,4种物质的批间及批内精密度的RSD均小于15%,批间及批内准确度均在85%~115%之间。提取回收率、基质效应和稳定性均满足相关要求。在大鼠单次灌胃耳聋左慈丸提取液后,4种待测物质都发生了较快的吸收和消除,氧化芍药苷、松果菊苷、苯甲酰芍药苷的血药浓度-时间曲线中都出现双峰现象;与其他3种物质相比,氧化芍药苷在大鼠血浆中浓度较高,c_(max1)为(24.40±4.78)ng/mL,c_(max2)为(22.50±2.70)ng/mL。结果表明,该方法的验证结果符合生物样本分析方法指导原则,可用于评价耳聋左慈丸提取液在大鼠体内的药代动力学行为。

Caco-2细胞对人参皂苷Rg3的摄取及代谢研究

目的 :研究Caco 2细胞对人参皂苷Rg3的摄取、代谢及其动力学变化。方法 :采用液相色谱质谱联用 (HPLC MS)检测方法测定细胞中Rg3及其代谢产物Rh2药物浓度 ,考察时间、pH值、温度、药物浓度及抑制剂对Rg3摄取速率及代谢物产量的影响。结果 :Rg3在Caco 2细胞上的摄取是时间及浓度依赖性的 ,其被动转运系数Kd 为 0 .0 7nmol·h-1·mg-1prot ;最大摄取速率Vmax为 3.32nmol·h-1·mg-1prot;Km是 16 .31μmol·L-1。加入代谢抑制剂叠氮化钠及2 ,4 二硝基酚时摄取速率明显降低 (与对照组相比P <0 .0 1)。结论 :Caco 2细胞模型适用于人参皂苷的吸收机制研究 ;Rg3在肠道中的代谢为其生物利用度低的原因之一。

大鼠肠管外翻模型对人参皂苷Rg1吸收机制的研究

目的 :建立准确、灵敏、可靠的Rg1HPLC MS测定方法 ,研究Rg1是否存在分肠段吸收的差异并考察小肠上皮组织上的P 糖蛋白 (P glycoprotein)对人参皂苷Rg1吸收的影响。方法 :在不同肠段 (回肠和空肠 )的肠管外翻模型中加入 2 0 μg·ml-1Rg1Krebs液 ,在不同时间点取样并测定囊内药物浓度 ,比较两个小肠段对Rg1通透能力的差异 ,同时观察P 糖蛋白抑制剂维拉帕米对Rg1吸收的影响。结果 :不同肠段 (回肠和空肠 )的体外模型试验结果表明 ,Rg1在不同肠段的吸收良好 ,且无明显差异。维拉帕米对Rg1的吸收未见显著影响。结论 :Rg1在大鼠的各个肠段的吸收无显著性差异 ,Rg1可能不是P 糖蛋白的底物。

转染外源性白细胞介素6基因增强乳腺癌细胞株MCF-7表达肿瘤相关抗原

目的 :探索白细胞介素 6 (interleukin 6 ,IL 6 )增强乳腺癌细胞表达乳腺癌抗原 (CA15 3)和癌胚抗原 (CEA)的作用。方法 :将含IL 6蛋白编码顺序1176bpcDNA插入Pci neo哺乳动物表达载体。将重组载体转染MCF 7乳腺癌细胞 ,采用ELASA方法测定细胞培养上清液内IL 6浓度 ,用MEIA(microp articalenzymeimmunoassay)方法测定上清液中肿瘤相关抗原CA15 3、CEA和CA12 5。结果 :含有外源IL 6基因的MCF 7细胞分泌IL 6浓度 (338.5±2 2 .6pg·10 -6细胞 )明显高于父本没有含外源基因的MCF 7细胞 (2 5 .4± 4 .6pg·10 -6细胞 )和仅含空载体Pci neo的MCF 7细胞 (19.6± 3.0pg·10 -6细胞 ) (P<0 .0 1)。细胞培养d 3后 ,带外源IL 6基因的MCF 7细胞培养上清液中CA15 3和CA12 5水平 (分别为 14 .9± 2 .3和 38.8± 5 .1μg·10 -6细胞 )明显高于父本 (分别为 6 .6± 1.5和 10 .0± 1.6 μg·10 -6细胞 )和空载体Pci neo的MCF 7细胞 (分别为 3.4±0 .7和 14 .6± 2 .2 μg·10 -6细胞 ,P <0 .0 5 )。而转染IL 6基因没有明显改变CEA表达 (P >0 .0 5 )。结论 :IL 6具有诱导肿瘤相关抗原的表达和增强肿瘤细胞的免疫原性的作用 ,提示IL 6可能增强机体对肿瘤的免疫反应性。