烯醇化酶与寄生虫感染

烯醇化酶是生物体中广泛存在的一种重要的糖酵解酶类,近来发现其还具有激活纤溶酶原的功能,参与寄生虫在宿主体内侵染和转移过程,并能下调宿主免疫功能,协助寄生虫逃避宿主的免疫攻击。本文总结当前对寄生虫烯醇化酶的研究进展,旨在探究其用于寄生虫病诊断、药物研发及疫苗靶标的可能性。

日本血吸虫热休克蛋白70(Sj HSP70)的抗体反应特征及免疫诊断价值

目的制备重组日本血吸虫中国大陆株热休克蛋白[rSj HSP70（Grp78）],检测其抗体反应特征及用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板逆转录合成cDNA,采用基因特异性引物,通过PCR技术扩增编码Sj HSP70（Grp78）成熟肽的基因片段,并将该片段插入到表达质粒pET28a（＋）中,构建表达质粒HSP70（Grp78）-pET28a。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导表达后采用镍亲和层析法制备纯化的可溶性rSj HSP70（Grp78）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）及Western blot检测rSj HSP70（Grp78）的抗体反应特异性及抗rSj HSP70（Grp78）IgG在血吸虫感染小鼠血清中动态变化,以分析其早期诊断与疗效考核价值,并比较rSj HSP70（Grp78）-ELISA与SEA-ELISA检测血吸虫感染者血清抗体IgG的敏感性与特异性。结果编码Sj SP70（Grp78）成熟肽基因片段克隆成功,并获得纯化的分子质量单位约69ku的重组表达Sj HSP70（Grp78）蛋白。Western blot显示Sj HSP70（Grp78）蛋白能被日本血吸虫感染的小鼠及人血清识别,但不与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清及健康人、鼠血清反应。感染小鼠血清抗Sj HSP70（Grp78）IgG水平与血吸虫感染度呈正相关,并随着感染时间延长呈增强趋势,在感染后16~18周达到峰值,随后开始回调,但始终维持在较高水平。治疗组小鼠经药物治疗后第2周（感染后第8周）,体内抗体水平迅速上升并达到高峰,经过短暂下降后再次上升,出现第二个高峰,随后逐渐回调,至治疗16周（感染后第22周）,部分小鼠抗体水平已接近阴性阈值。部分个体在血吸虫感染后1周即可检测到血清抗rSj HSP70（Grp78）IgG。分别以rSj HSP70（Grp78）和SEA血吸虫、华支睾吸虫及卫氏并殖吸虫感染者血清及健康人血清,敏感性分别为82.9%和95.7%,特异性分别为94.3%和85.7%,与健康人血清的交叉反应率分别为0和16.67%,与华支睾吸虫感染者血清的交叉反应率分别为5.7%和14.29%;与卫氏并殖吸虫感染者血清的交叉反应率分别为5%和65%。结论 Sj HSP70（Grp78）具有高度的抗原特异性,以此为抗原采用ELISA检测抗Sj HSP70（Grp78）IgG具有日本血吸虫病辅助诊断价值,并具有一定的早期诊断与疗效考核潜能。