孕妇血浆中胎源性RASSF1A基因在无损性产前诊断中的应用研究

本研究旨在探讨运用非性别依赖的甲基化表观遗传学标记RASSF1A基因作为孕妇血浆中循环游离胎儿DNA存在的通用性标志的可行性。采用2种方法提取孕妇血浆游离DNA,选用其中效果较好的用磁珠法提取20例标本的游离DNA;采用RT-PCR方法扩增SRY基因以及甲基化酶处理后的RASSF1A基因,且对酶处理后RASSF1A基因的扩增体系进行条件优化。结果表明,在20例标本中11例检测有SRY基因,且与胎儿出生后性别相符;选用优化后的PCR体系扩增甲基化酶处理后的RASSF1A基因,在18例标本中检测有RASSF1A基因,在2例标本中未检测到此基因。结论:甲基化RASSF1A基因与SRY基因相比,不受胎儿性别限制,可作为广泛性胎儿特异性表观遗传学标记物,用于临床无损性产前诊断。

以海藻糖为添加剂冷藏保存血小板悬液的研究

本研究探讨以海藻糖(trehalose)为添加剂的血小板悬液冷藏保存方法。采用核素标记法检测血小板生存时间,用比浊法测定血小板聚集率,诱导剂为终浓度11.2μmol/L的ADP。采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板悬液(PCs),在悬液中加入50mg/ml的海藻糖,37℃水浴4小时后,放于4-8℃冰箱保存,冷藏12天后,测定血小板聚集功能和输入自身体内后的生存时间。结果表明:常温和冷藏储存24小时后的PC血小板聚集率分别为(75.3±9.8)%和(80.5±12.5)%;输入兔体内24、48和72小时时的血小板存活率分别为(78.1±7.9)%、(65.4±6.7)%、(57.5±7.2)%和(5.1±2.5)%、(2.8±2.0)%、(0.9±0.8)%。加入海藻糖的PC冷藏保存12天后,血小板聚集率为(77.8±9.5)%;输入体内24、48和72小时时的血小板存活率分别为(75.7±11.0)%、(67.0±8.5)%、(56.8±8.0)%,与常温保存24小时对照相比,两者相近,P值均>0.05。结论:海藻糖能保护冷藏储存的兔血小板,延长冷藏血小板在体内的生存时间,经海藻糖冷藏储存的兔血小板功能完好。

献血者血液中HCMVpp65检测方法的建立与初步应用

为保证病人的用血安全 ,建立适合于血站对HCMV病原检测的方法 ,本研究采用免疫组织化学的技术 ,结合本实验室具体条件检测HCMV的 pp6 5 ,细胞计数 (6 - 8)× 10 6/ml,取量 2 0 μl,涂片油镜镜检5 0 0 0 0个细胞。结果表明 :在 10 3人份样本中 ,阳性标本为 10例 ,阳性率为 9.71% ,对 10名阳性人中的 2人进行第 2次pp6 5的监测 ,结果均为阳性。结论 :该方法简单、快速、有效 ,完全适合于血站系统对献血者的HCMV进行病原学检测 ,有推广的价值。

南京汉族人群Duffy血型等位基因FYES及FYX调查研究

目的研究南京地区汉族人群中Duffy血型等位基因FYES及FYX的表达情况。方法随机提取200例无偿献血者EDTA-K2抗凝外周血血样DNA,采用PCR-SSP方法进行Duffy血型FYA、FYB等位基因分型;采用Sanger双脱氧链末端终止测序法分析Duffy血型FYES及FYX等位基因序列特点。结果PCR基因分型结果与测序结果一致,200例标本中,检出FYA/FYA 180例,FYA/FYB 20例;测序结果表明,200例标本中未发现FYES及FYX等位基因表达。结论 FYES及FYX等位基因在中国南京地区汉族人群中表达频率极低,与其他人种相比具有显著性差异。

PCR-SSP法检测Rh阴性无偿献血者Duffy血型的基因分型研究

目的调查Rh阴性无偿献血者Duffy血型的基因分型情况。方法用分子生物学技术(PCR-SSP)进行DNA水平的检测,并以Rh阳性无偿献血者作为对照。结果Rh阴性无偿献血者Duffy血型的基因频率为Fya=0.9252,Fyb=0.0747;而Rh阳性无偿献血者的基因频率为Fya=0.95,Fyb=0.05。无Fy(a-b-)个体。结论Rh阴性无偿献血者Duffy血型的基因分型结果显示和Rh阳性无偿献血者无明显差异。

采用熔解曲线法进行RHD c.1227G>A基因检测研究

目的:建立用于RHD c.1227G>A基因检测的熔解曲线分析方法。方法:根据RHD c.1227G>A基因位点设计并合成序列特异性引物,在荧光定量PCR反应后对产物进行熔解曲线分析,根据熔解曲线峰值的差异进行基因检测结果判断,并与常规序列特异性引物PCR(PCR-sequence specific primer,PCR-SSP)RHD c.1227G>A基因分型方法进行比较;对与血清学结果不一致的标本进行测序分析。结果:在87例血清学初筛为RhD阴性表型的标本中,采用熔解曲线分析法,检测出16例含有RHD c.1227G>A,占比18.4%;与常规PCR-SSP分型结果一致。对1例与血清学吸收放散结果不一致的标本进行RHD exon 9测序分析,证实均为1227A纯合子。熔解曲线分析法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和总符合率均为100%,约登指数为1.0。结论:成功建立用于红细胞RHD c.1227G>A基因分型的熔解曲线分析方法,可以高效、快速地进行RHD c.1227G>A基因检测研究。

精准输血的初步探讨

本文通过对不同血型系统在临床中的重要性分析,从精准输血的概念、精准输血的内容、标本检测与电子配血等方面,提出了精准输血的三线原则,初步探讨了开展精准输血的相关问题。

用于血液保温输注的血袋辫加热套的设计

目的研制可以使得血袋辫升温的保温套,使血液输注前的温度得以提高,以保证输血安全。方法设计可闭合的长圆柱体升温套,血辫置入后流经该套的低温血得以升温,采用基于高性能的温度传感器控制温度,采用电子加热线路加热。结果经反复研讨该血袋辫加热保温套安全可靠,达到设计的要求。结论该保温套可以方便的用于血液输注前的升温。

血液,生命的礼物

血液就像奔腾的河水，在人体中所有器官和组织内流动着。每年的6月14日是世界献血者日，我国法律规定，只有18-55周岁的健康公民才能献血，

中国南京地区汉族人群Colton血型等4个血型系统稀有血型的初步调查

目的:调查和分析中国南京地区部分汉族人群Colton、Diego、Kell、Yt等4个稀有血型抗原的分布情况,以解决稀有血型病人的临床用血问题,并进一步充实国家稀有血型献血者资料库。方法:随机选择南京地区符合《献血者健康检查要求》的2 015名无偿献血者全血标本,提取DNA,采用PCR及多重PCR的方法检测Kell系统的K+和Kpc+、Yt系统的Ytb+、Colton系统的Cob+以及Diego系统的Dia+b+、Dia+b-血型抗原基因。结果:在2005例献血者中筛选出K+基因1例;在2 015例献血者中筛选出Ytb+8例和Dia+b+100例、Dia+b-2例,未筛查出Kpc+与Cob+。结论:中国南京地区汉族人群中K+、Ytb+和Dia+、Dib+基因频率分别为0.0003、0.0013和0.0258、0.9742,在现有筛查人群中未发现Kpc+与Cob+抗原存在。

中国南京地区十个红细胞血型系统稀有抗原的大规模调查

本研究调查南京地区人群中稀有血型抗原的类型及分布情况,为稀有血型病人的临床用血和献血招募提供基础性资料。采用4M尿素对红细胞进行Kidd血型系统的Jk(a-b-)表型筛选;利用抗血清对H系统的H-、MNS系统的GPA-、Gerbich系统的GPC-、Ii系统的i+、Lutheran系统的Lub-表型进行筛选;对Kell系统的k-和Jsb-、Duffy系统的Fya-、Ok系统的Ok-、MNS系统的s-和Digeo系统的Dib-表型采用多重PCR的方法进行筛选。结果表明:在40337例标本中,筛选出2例Jk(a-b-)表型;在1 782例标本中,筛出Fy(a-b+)表型3例,尚未发现Fy(a-b-)的表型,也未发现Ok-、s-和Dib-表型。在2 002、2 003、2 084、10 189和10 004例标本中,未发现相应的GPA-、GPC-、Lub-、H-和i+稀有表型者。在2017例标本中,也未发现k-和Jsb-的表型存在。结论:南京地区人群中Jk(a-b-)表型频率为0.0049%,Fy(a-b+)表型频率为0.168%,在现有筛查人数中尚未发现所查其它血型系统稀有抗原的存在。

抗-M抗体引起多次宫内死胎的血型血清学及基因分析

目的母婴血型不合导致的胎儿及新生儿溶血病(hemolytic disease of the fetus and newborn,HDFN)多见于ABO及Rh系统,其他系统引起的少见。文中介绍了1例罕见的由抗-M抗体引起的严重胎儿溶血导致多次宫内死胎的案例,旨在加强对IgG型抗-M抗体临床重要性的认识。方法复习该经产妇的5次妊娠史及胎儿情况,对其及其丈夫血型进行血清学及基因分型,并对其血型抗体进行筛查及效价检测。结果该经产妇为NN血型,其丈夫为MM血型;其血清中检测出抗-M抗体,多次抗体效价测定值波动范围为1∶8至1∶64。结论通过对本例血型基因的分析,确诊为抗-M抗体引起的HDFN,提示对于原因不明的多次死胎、流产等,需要考虑到抗-M抗体或其他血型抗体引起的可能性。

甘氨酸-HCl/EDTA酸放散法在AIHA标本配血中的应用

目的考察甘氨酸-HCl/EDTA酸放散法试用于AIHA标本的配血的情况。方法甘氨酸-HCl/EDTA酸放散法。结果甘氨酸-HCl/EDTA酸放散法放散充分,放散液清澈,红细胞膜破坏程度轻。结论甘氨酸-HCl/EDTA酸放散法完全可用于AIHA患者的血型鉴定及交叉配血。

RhD阴性孕妇产前意外抗体筛查回顾性分析

目的:回顾性分析RhD阴性孕妇产前意外抗体筛查情况。方法:对2013—2017年江苏省血液中心RhD阴性孕妇血液标本进行RhD确认试验;同步采用盐水介质法及抗人球蛋白法对血清中意外抗体进行筛查;并分析抗体特异性,同时测定效价。结果:430位孕妇中,RhD确认试验21位为阳性,409位为阴性。总计435次筛查中(含5例再次妊娠者),意外抗体筛查阳性共28例(6.44%,28/435),其中18例抗D(效价2~256),1例抗C(效价8),2例抗CD(效价2),1例抗M(效价8),2例抗Lea(效价2),另有4例含低效价IgM型冷抗体,特异性不明。每位孕妇意外抗体检测频次不一,初次检测时机以及间隔期不尽相同。只检测1次的共269例,检测2~6次的分别为108、40、8、8及1例,最高1例检测频次为10次;每频次IgG型意外抗体检出率(%)分别为:3.72(10/269)、3.70(4/108)、5.00(2/40)、0.00(0/8)、50.00(4/8)、0.00(0/1)、100.00(1/1);检测频次与抗体阳性率并不完全呈正相关。结论:RhD阴性孕妇存在一定比例的意外抗体,规范产前抗体筛查流程有助于保障孕妇输血安全及早期干预新生儿溶血病。

a-1,3-N-乙酰半乳糖胺转移酶基因EXON 7突变形成A311血型基因亚型

本研究对1例产生抗A抗体的血清学正反定型不符的A血型标本进行血型血清学分析及基因分析,以了解其分子基础。采用试管法进行血型血清学的检测,采用PCR-SSP对A基因进行扩增分析,采用Sanger测序法对A血型糖基转移酶基因进行测序分析。结果表明:血清学正反定型不符,初定为A亚型;PCR-SSP扩增检测结果有O、A血型基因的存在;对ABO基因第6外显子测序发现存在c.261delG,显示有O基因;对A、O基因第7外显子进行特异性扩增测序分析显示,在A单倍型基因第7外显子出现c.467 C>T、c.626 G>A的突变,在O单倍型基因第7外显子出现c.646T>A、681G>A、771C>T、829G>A等突变。结论:该献血者在A基因第7外显子的c.626G>A是新的等位基因突变,c.467 C>T是SNP;新突变的GenBank序列号是KC690281,被BGMUT命名为1个新的A等位基因亚型A311。

血型基因分析鉴定罕见的B(A)04亚型1例

B（A）型是ABO血型的变异型,在我国人群中的比例极低,常因血清学正反定型不符而难以最终确定。借助于血型基因分析技术,能较好地解决这个问题。本研究通过基因分型及分子测序的方法检测1份临床术前备血的疑难标本,确认其为B（A）04型,报道如下。

高效价抗-D的RhD cat Ⅵ type 3型标本分析——附报告1例

目的通过对1例弱D的标本进行RHD基因外显子检测，分析其产生抗-D的分子基础。方法RhD血型采用盐水试管法、抗-D效价及弱D确认的检测均采用卡式抗球蛋白法；RHD基因外显子D1。D10、270A、1227A的检测采用PCR—SSP法。结果该标本IgM抗-D检测为初筛阴性；血清中抗-D效价128；IgG、IgG＋IgM抗-D检测结果为弱D；RHD基因检测结果为D3—6外显子缺失，确认该标本为部分D即RhDcatVItype3，基因结构为RHD—CE（3-6）-D。结论Rh部分D血型可以产生高效价抗-D。

RASSF1A在无损性孕妇外周血浆中胎儿ABO基因分型中的运用

目的:探讨甲基化表观遗传标志RASSF1A在O型孕妇外周血浆中胎儿ABO基因分型中的运用,以无损性预测产前胎儿ABO血型。方法:首先提取O型孕妇外周血浆游离DNA,扩增SRY及甲基化RASSF1A作为胎儿DNA存在的标志;检测血浆游离DNA中B及非O预测胎儿ABO血型;并将基因分型结果与胎儿分娩后血清学结果进行比对,以评价该方法的准确性。结果:20例标本中,11例检测出SRY,检测结果与胎儿出生后性别相符;其余9例标本酶切后均扩增出RASSF1A,证实胎儿游离DNA存在。对血浆游离DNA进行ABO基因检测,20例标本中8例标本同时扩增出非O和B,提示为B血型;5例标本只扩增出非O,未扩增出B,提示为A型;7例标本均未扩增出非O及B,提示为O型。上述预测结果与胎儿出生后ABO血清学血型一致。结论:初步建立了基于RASSF1A的O型孕妇血浆中游离DNA中胎儿ABO基因的检测程序,可用于临床无损性产前胎儿ABO血型的预测。

儿童患者RhD弱阳性变异体的初步分析

目的对RhD弱阳性儿童患者进行RhD变异体检测分析。方法用微柱凝胶血型鉴定卡及盐水试管法进行RhD血型初筛;微柱凝胶抗球法进行弱D确认试验;确认试验RhD弱阳性者进行PCR-SSP及RHD外显子测序分析。结果 RhD初筛阴性46例(0.38%),确认实验检出弱阳性4例(8.7%);4例RhD弱阳性标本经基因检测,1例1227A杂合子(Del型),1例DⅢa型,2例弱D15型。结论 Del型也可能被血清学方法检出;RhD弱阳性患者中抗原数量减少者较多;针对RhD阳性红细胞是否产生需进一步研究。