活化血小板分子标志物:P-选择素、糖盏蛋白和糖蛋白V的研究进展

在血液循环中,正常人的血小板基本处于静息状态.而在血栓前状态、血栓性疾病和肿瘤转移等过程中,体内处于静止状态的血小板受各种因子的作用被激活而成为活化血小板.激活的血小板膜表面的糖蛋白迅速发生数量重排和构型变化,并与血浆中相应的受体蛋白结合而使血小板聚集,同时血小板内发生各种分泌反应.血小板膜内、膜表面及血浆中特定的血小板糖蛋白成分发生改变而成为血小板被活化的标志物.

抗血小板单克隆抗体片段的抗栓效应研究

目的 :研究抗血小板膜糖蛋白IIIa(GPIIIa)单克隆抗体 (mAb)SZ 2 1F(ab′) 2 片段的抗血栓效应。方法 :用木瓜蛋白酶在偏酸条件下 ( pH5 .5 )消化 2 0h ,经DEAE 5 2NaCl梯度洗脱消化产物 ,以得到F(ab′) 2 片段。收集产物经SDS PAGE鉴定 ,并通过ELISA和血小板聚集抑制试验 ,观察所获F(ab′) 2 片段免疫原活性和抗栓活性。结果 :该法制备F(ab′) 2 片段的得率为 6 0 .32 % ;酶免法测定其效价为 0 .8× 10 -9mol/L ;体外血小板聚集抑制半数有效剂量 (ED5 0 )为 3.395mg/L。F(ab′) 2 片段与血小板的结合性及对血小板聚集功能的抑制效果均高于完整的IgG。 结论 :利用木瓜蛋白酶制备的抗血小板mAbSZ 2 1的F(ab′) 2 片段 ,产率高且其抗栓活性与免疫原活性均优于完整的mAbIgG ,为mAbSZ 2

抗红细胞生成素单克隆抗体的制备及初步鉴定

红细胞生成素（ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＥＰＯ）是一种主要由肾小管内皮细胞产生的酸性糖蛋白，正常人血浆和尿中含量甚微。ＥＰＯ的主要生理功能是通过刺激骨髓多能干细胞进入红细胞系，并促进其增殖、分化而调节外周血液中红细胞的数量。ＥＰＯ用于治疗慢性肾衰...

抗P-选择素单抗的荧光素标记及其临床应用

目的 :探讨各种血栓形成相关性疾病患者的P -选择素的表达变化及其临床意义。方法 :用异硫氰酸荧光素 (FITC)标记抗P -选择素单抗SZ - 5 1-IgG和流式细胞术 (FCM)分析了 42例糖尿病患者、33例高血脂患者、2 3例脑梗塞患者和 2 0例正常人的血小板膜P -选择素表达 ,并与间接FCM和酶标记免疫吸附分析法(ELISA)作比较。结果 :FCM测得的血小板膜上P -选择素表达阳性率 ,在糖尿病组为 2 3 92 %± 15 83% ,高血脂组为 18 34 %± 9 46 % ,脑梗塞组为 19 32 %± 10 38% ,均显著高于正常对照 3 38%± 1 11% (P值均小于 0 0 1)。间接FCM测定血小板膜P -选择素表达在糖尿病和脑梗塞患者中均显著增高 ,ELISA法测得的血浆中P -选择素在糖尿病、高血脂和脑梗塞患者也显著高于正常对照。结论 :FITC标记的SZ - 5 1-IgG可用于FCM 。

阿魏酸对活化内皮细胞粘附分子表达的抑制作用

目的 观察阿魏酸对活化的人脐静脉内皮细胞表达粘附分子的影响 ,以探讨其抗动脉粥样硬化的部分分子机制。方法 用脂多糖 10mg·L- 1刺激培养的人脐静脉内皮细胞 4h诱导其表达E 选择素、刺激 18h诱导其表达血管细胞粘附分子 1;用过氧化氢 3 0 0 μmol·L- 1刺激 2h诱导其表达P 选择素 ,部分细胞在刺激前 3 0min用阿魏酸 0 2 1、0 41或 0 62mmol·L- 1预处理 ,用流式细胞术检测内皮细胞粘附分子表达水平。结果 阿魏酸抑制内皮细胞E 选择素及P 选择素表达 ,轻度抑制血管细胞粘附分子 1表达 ,同时抑制内皮细胞vWF的释放。

单克隆抗体SZ-95亲和色谱纯化人血小板第4因子

目的用单克隆抗体亲和色谱从人血小板破碎液中纯化血小板第 4因子 (PF4 )。方法将单克隆抗体SZ 95 IgG与溴化氰活化的Sepharose 4B凝胶连接成亲和色谱柱SZ 95 IgG Sepharose 4B ,人血小板破碎液经此亲和色谱柱上样后 ,经洗脱获得PF4 ,采用 15 %SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯度 ,用点印迹鉴定其免疫活性。结果SZ 95 Sepharose 4B亲和色谱柱的偶联率为 72 % ,每 1ml(约 1× 10 9个血小板 )血小板破碎液中可以纯化到PF4 18μg ,其相对分子量约为 12kD ,经点印迹显示与单抗SZ 95反应显带。结论用SZ 95 Sepharose 4B亲和色谱柱纯化的PF4产品得率高、纯度高。

血小板活化的分子标志物的探讨及在疾病中意义

在正常情况下循环血液中,血小板处于静息状态,而在某些生理状态或病理状态下,血小板可被激活后活化。近些年来,通过对血小板活化的深入研究,发现很多血小板活化后释放的因子在血小板活化中发挥着的重要作用。血小板活化的因子包括α颗粒内容物,如β球蛋白和血小板因子4等,以及血小板膜蛋白或其水解片段,如P-选择素、糖萼蛋白、糖蛋白V等。这些标志物可用ELISE方法在体外测得以反映血小板的活化状态。

抗内皮细胞抗体和血小板生成素测定在ITP与SLE鉴别中的意义

目的:探讨抗内皮细胞抗体(AECA)和血小板生成素(TPO)测定在鉴别特发性血小板减少性紫癜(ITP)和系统性红斑狼疮(SLE)中的临床意义。方法:用ELISA法分别测定76例ITP患者、41例SLE患者及50例正常人血清中的AECA和TPO水平。结果:SLE组、ITP组患者血清AECA水平明显高于正常对照组(P<0.01);SLE组患者血清AECA水平显著高于ITP组(P<0.01);ITP组患者血清TPO水平与正常对照组无显著差异(P>0.05),而SLE组血清TPO水平显著高于ITP组患者和正常对照组(P<0.01)。结论:血清AECA和TPO的测定在鉴别诊断ITP和SLE中有显著的临床意义。

人血小板第4因子和P-选择素的纯化

目的 用单克隆抗体亲和层析方法从人血小板破碎液中纯化血小板因子 4和P -选择素。方法 将单克隆抗体SZ - 95 -IgG和SZ - 5 1-IgG分别与溴化氰活化的Sepharose4B凝胶连接成SZ - 95 -IgG -Sepharose4B和SZ -5 1-IgG -Sepharose4B亲层析柱 ,人血小板破碎液经此亲和层析柱上样后 ,再经FPLC系统获得的所要的产品 ,产品经SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯度 ,用点杂交鉴定其生物学活性。结果 SZ - 95 -Sepharose4B和SZ - 5 1-Seph arose4B亲和层析柱的偶联率分别 72 %和 6 8% ,每 1ml(约 1× 10 9个血小板 )血小板破碎液中可以纯化到 18μgPF4和12 μgP -selectin ,所得产品经SDS -PAGE ,在分子量约为 12kD和 140KD处各显单一的蛋白区带 ,经点杂交印迹显示产品分别与单抗SZ - 95和SZ - 5 1反应显带。结论 用单克隆抗体亲和层析柱纯化的PF4和P -selectin产品得率高、纯度高。

DPC4/Smad4基因转染对胰腺癌细胞体外生长的抑制作用

目的观察抑癌基因DPC4/Smad4对胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法将人全长DPC4/Smad4cDNA亚克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,分别导入包装细胞GP+E86和PA317,经G418筛选获取阳性抗性克隆。收集病毒上清液,转染至胰腺癌BxPC-3细胞;获稳定表达后,观察其对BxPC-3体外生长的抑制作用。结果聚合酶链反应扩增证实GP+E86、PA317/pLXSNDPC4+细胞中有外源性DPC4/Smad4基因整合;DPC4基因转染BxPC-3细胞后,可获得稳定表达,并可显著抑制胰腺癌细胞的生长和集落形成,下调癌细胞内VEGF基因的表达。结论将DPC4/Smad4逆转录病毒载体转染到人源性胰腺癌细胞后,可显著抑制癌细胞的生长及血管形成能力。