基于核酸等温扩增的病原微生物微流控检测技术

病原微生物的快速检测对疫情的预防控制至关重要。基于PCR的病原微生物核酸检测方法克服了传统病原微生物培养方法耗时长、免疫学检测存在窗口期等问题,已成为目前最主要的病原微生物筛查方法。然而,对精确控温热循环仪的依赖却严重限制了其在资源匮乏地区的应用。虽然基于核酸等温扩增的病原微生物检测方法可摆脱对高精度温控设备的依赖,但仍需要进行样本核酸分离提取、扩增与检测等步骤。近年来,微流控技术与核酸等温扩增技术相结合,诞生了多种病原微生物等温扩增微流控检测技术。该技术通过设计芯片结构、优化进样模式及检测方式,实现了病原微生物核酸提取、扩增与检测一体化,并具备多重检测、定量检测等功能,具有对仪器依赖度小、对操作人员要求不高、样本量需求小和自动化程度高等优点,适合于在多种环境下的病原微生物快速检测。本文从核酸等温扩增原理、进样方式、检测方式等方面对核酸等温扩增病原微生物微流控检测技术进行了综述,以期为病原微生物的快速筛查提供更多的方案思路,提升公共卫生领域对传染性疾病的防控能力。

LC-MS/MS测定大鼠血浆中阿托伐他汀及其活性代谢产物

目的建立LC-MS/MS同时测定大鼠血浆中阿托伐他汀、邻羟基阿托伐他汀及对羟基阿托伐他汀的方法,并应用于CYP3A酶诱导模型大鼠和正常大鼠体内阿托伐他汀的药动学研究。方法采用甲基叔丁基醚-乙酸乙酯(50︰50)液液萃取法提取大鼠血浆中药物。使用XBridgeC18(2.1mm×250mm,3.5μm)色谱柱,柱温35℃;流动相为0.1%甲酸-乙腈(40∶60),等度洗脱4.4 min,流速0.2 mL·min?1;进样体积10μL。质谱采用电喷雾离子(ESI)源,以正离子多反应监测(MRM)模式进行定量分析,选择m/z559.1→440.1(阿托伐他汀),m/z575.3→440.2(邻羟基阿托伐他汀/对羟基阿托伐他汀),m/z 564.3→445.3(阿托伐他汀-d5,内标)作为检测离子对。以地塞米松80 mg·kg?1·d?1连续灌胃给药4 d,建立CYP3A酶诱导模型,取正常及模型大鼠给药后0,0.083,0.17,0.25,0.33,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6 h血样于肝素抗凝管中,离心收集血浆,冷冻保存直到进行测定。结果阿托伐他汀及其2种代谢产物在0.49～500.00 ng·mL?1内均有良好的线性关系(r2>0.99);批内、批间精密度RSD<15%(n=6);方法的提取回收率和基质效应均满足生物样品的检测要求;含药血浆在室温放置4,24h、4℃放置3d稳定。诱导组大鼠血浆中阿托伐他汀血药浓度达峰时间(Tmax)提前,血药浓度-时间曲线下面积(AUC0-t)显著低于正常组,消除速率常数K和清除率CL略高于正常组。结论新建立的方法简便、稳定、灵敏,能够用于大鼠血浆内阿托伐他汀及其活性代谢产物的浓度测定和药动学研究。进入CYP3A酶诱导模型大鼠与正常大鼠体循环的活性药物成分差异显著。