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QX型传染性支气管炎病毒病毒样颗粒的制备与初步评价
1
作者
张梦寒
程敏
+5 位作者
陈杨
薄宗义
张成成
郭梦娇
吴艳涛
张小荣
《中国家禽》
北大核心
2024年第5期46-55,共10页
研究旨在制备一种针对QX型传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)疫苗并对其免疫保护效果进行初步评价。试验首先构建了分别表达QX型IBV S蛋白(QXLS)、M蛋白(QXLM)和E蛋白(QXLE)...
研究旨在制备一种针对QX型传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)疫苗并对其免疫保护效果进行初步评价。试验首先构建了分别表达QX型IBV S蛋白(QXLS)、M蛋白(QXLM)和E蛋白(QXLE)的三种重组杆状病毒rBacmid-QXLS、rBacmid-QXLM和rBacmid-QXLE,并通过间接免疫荧光试验(IFA)和West-ern blot鉴定目的蛋白的表达;进一步将3种重组杆状病毒通过适当比例共感染Sf9细胞获得VLP,经蔗糖密度梯度离心纯化后使用透射电子显微镜观察鉴定VLP的组装效果;最后将纯化的VLP与氢氧化铝佐剂混合制成疫苗免疫SPF鸡进行免疫保护效果评价。结果显示:S、M和E三种目的蛋白均能成功表达,透射电子显微镜观察可见组装形成的VLP呈现典型的椭圆形病毒样结构,直径为80~120 nm;单独VLP疫苗免疫具有一定的免疫保护效果,QXL87+VLP疫苗联合免疫保护效果较好,可有效减轻临床病变、降低气管和泄殖腔排毒量及组织器官载毒量。研究表明,试验已经成功制备出QX型IBV VLP,且具有良好的免疫原性,为后续进一步研制基于VLP技术的QX型IBV基因工程疫苗奠定了基础。
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关键词
IBV
QX型
病毒样颗粒
重组杆状病毒
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职称材料
传染性支气管炎病毒N蛋白广谱单克隆抗体的制备与鉴定
被引量:
5
2
作者
杜旭彬
赵佳
+4 位作者
郭梦娇
李敏
张成成
吴艳涛
张小荣
《中国家禽》
北大核心
2021年第5期27-32,共6页
为制备能与多种基因型传染性支气管炎病毒(IBV)反应的广谱性单克隆抗体,反应谱能够覆盖当前在国内流行的主要优势基因型毒株。通过RT-PCR克隆了QX型IBV CK/CH/JS/2010/12株N基因,分别插入原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-6P-1构建了重组质...
为制备能与多种基因型传染性支气管炎病毒(IBV)反应的广谱性单克隆抗体,反应谱能够覆盖当前在国内流行的主要优势基因型毒株。通过RT-PCR克隆了QX型IBV CK/CH/JS/2010/12株N基因,分别插入原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-6P-1构建了重组质粒pET-N和pGEX-N,并在大肠杆菌中进行原核表达,通过亲和纯化获得His-N和GST-N两种重组融合蛋白。用GST-N融合蛋白免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以重组蛋白His-N作为检测抗原建立间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞。经过筛选和亚克隆,共获得12株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Western blot结果显示8株单克隆抗体能与测试的所有基因型IBV发生特异性反应,另外4株可以与793B型4/91株以外的其他毒株发生反应。本研究成功获得了广谱性IBV单克隆抗体,为进一步研究建立通用性IBV抗原检测方法奠定了基础。
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关键词
传染性支气管炎病毒
N蛋白
单克隆抗体
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职称材料
题名
QX型传染性支气管炎病毒病毒样颗粒的制备与初步评价
1
作者
张梦寒
程敏
陈杨
薄宗义
张成成
郭梦娇
吴艳涛
张小荣
机构
扬州大学
兽
医学院
江苏高校重要动物疫病与人兽共患病协同创新中心
出处
《中国家禽》
北大核心
2024年第5期46-55,共10页
基金
国家重点研发计划项目子课题(2022YFD1801004-6)
财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系资助项目(CARS-40-K16)
江苏高校优势学科建设工程资助项目(2022年)。
文摘
研究旨在制备一种针对QX型传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)疫苗并对其免疫保护效果进行初步评价。试验首先构建了分别表达QX型IBV S蛋白(QXLS)、M蛋白(QXLM)和E蛋白(QXLE)的三种重组杆状病毒rBacmid-QXLS、rBacmid-QXLM和rBacmid-QXLE,并通过间接免疫荧光试验(IFA)和West-ern blot鉴定目的蛋白的表达;进一步将3种重组杆状病毒通过适当比例共感染Sf9细胞获得VLP,经蔗糖密度梯度离心纯化后使用透射电子显微镜观察鉴定VLP的组装效果;最后将纯化的VLP与氢氧化铝佐剂混合制成疫苗免疫SPF鸡进行免疫保护效果评价。结果显示:S、M和E三种目的蛋白均能成功表达,透射电子显微镜观察可见组装形成的VLP呈现典型的椭圆形病毒样结构,直径为80~120 nm;单独VLP疫苗免疫具有一定的免疫保护效果,QXL87+VLP疫苗联合免疫保护效果较好,可有效减轻临床病变、降低气管和泄殖腔排毒量及组织器官载毒量。研究表明,试验已经成功制备出QX型IBV VLP,且具有良好的免疫原性,为后续进一步研制基于VLP技术的QX型IBV基因工程疫苗奠定了基础。
关键词
IBV
QX型
病毒样颗粒
重组杆状病毒
Keywords
IBV
QX genotype
virus-like particle
recombinant baculovirus
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
传染性支气管炎病毒N蛋白广谱单克隆抗体的制备与鉴定
被引量:
5
2
作者
杜旭彬
赵佳
郭梦娇
李敏
张成成
吴艳涛
张小荣
机构
扬州大学
兽
医学院
江苏高校重要动物疫病与人兽共患病协同创新中心
出处
《中国家禽》
北大核心
2021年第5期27-32,共6页
基金
国家重点研发计划项目(2017YFD0500703-2)
现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-40-K16)
+1 种基金
江苏省高校优势学科(2018年)项目
扬州大学“高端人才支持计划”(2016年)。
文摘
为制备能与多种基因型传染性支气管炎病毒(IBV)反应的广谱性单克隆抗体,反应谱能够覆盖当前在国内流行的主要优势基因型毒株。通过RT-PCR克隆了QX型IBV CK/CH/JS/2010/12株N基因,分别插入原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-6P-1构建了重组质粒pET-N和pGEX-N,并在大肠杆菌中进行原核表达,通过亲和纯化获得His-N和GST-N两种重组融合蛋白。用GST-N融合蛋白免疫BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以重组蛋白His-N作为检测抗原建立间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞。经过筛选和亚克隆,共获得12株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Western blot结果显示8株单克隆抗体能与测试的所有基因型IBV发生特异性反应,另外4株可以与793B型4/91株以外的其他毒株发生反应。本研究成功获得了广谱性IBV单克隆抗体,为进一步研究建立通用性IBV抗原检测方法奠定了基础。
关键词
传染性支气管炎病毒
N蛋白
单克隆抗体
Keywords
infectious bronchitis virus
N protein
monoclonal antibody
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
QX型传染性支气管炎病毒病毒样颗粒的制备与初步评价
张梦寒
程敏
陈杨
薄宗义
张成成
郭梦娇
吴艳涛
张小荣
《中国家禽》
北大核心
2024
0
下载PDF
职称材料
2
传染性支气管炎病毒N蛋白广谱单克隆抗体的制备与鉴定
杜旭彬
赵佳
郭梦娇
李敏
张成成
吴艳涛
张小荣
《中国家禽》
北大核心
2021
5
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职称材料
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