逆转录重组酶介导扩增技术快速检测基孔肯雅热病毒

本研究通过使用逆转录酶,将基孔肯雅热病毒RNA首先逆转录为cDNA。选取基孔肯雅热病毒保守序列设计引物及探针,建立基孔肯雅热病毒重组酶介导一步法等温核酸扩增RT-RAA(Reverse transcription recombinase aided amplification,RT-RAA)快速检测法,并分析其灵敏度及特异性。结果显示,该方法整个过程在39℃进行,检测时间短(<20 min),检测下限可达100 copy,并与黄热病毒、日本乙型脑炎病毒、西尼罗病毒、登革病毒I型等蚊媒病毒不存在交叉反应。本文建立的基孔肯雅热病毒RT-RAA检测法,灵敏度高、特异性强、操作简便,适应于口岸基层基孔肯雅热病毒的快速检测。

重组酶介导扩增方法快速检测A族乙型溶血性链球菌

目的利用重组酶介导核酸扩增技术(RAA)建立快速检测A族乙型溶血性链球菌的方法。方法根据A族乙型溶血性链球菌细胞包膜蛋白酶A(Cep A)基因的保守序列设计引物和探针,通过构建含有目的基因片段的质粒分析方法的灵敏度,通过检测沙门菌、大肠杆菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌标准菌株分析方法的特异性。结果建立的RAA方法在39℃,短时间内(<20 min)完成检测,灵敏度为10拷贝/μl,与沙门菌、大肠杆菌、志贺菌和金黄色葡萄球菌标准菌株无交叉反应,具有良好的特异性。结论建立的RAA方法速度快、特异性强、灵敏度高,适用于A族乙型溶血性链球菌的快速检测。

重组酶介导扩增技术快速检测沙门菌方法的建立

目的采用重组酶介导核酸扩增方法(Recombinase aided amplification,RAA),建立沙门菌快速检测方法。方法根据沙门菌的inv A基因设计引物和探针,通过构建含目的基因片段的质粒分析RAA方法的灵敏度,通过检测大肠杆菌、志贺菌验证方法的特异性,并检测沙门菌阳性样本进行验证。结果建立的方法在39℃下进行,检测时间在20min以内,检测下限为102拷贝/μl,与大肠杆菌、志贺菌无交叉反应,特异性良好。结论建立的RAA检测方法具有快速、灵敏、特异以及操作简便等特点,适用于沙门菌的快速检测。