葛根调控PPARs信号通路改善脂肪细胞胰岛素抵抗的体外研究

目的通过体外研究探讨葛根改善脂肪细胞胰岛素抵抗的关键分子机制。方法优化建立胰岛素抵抗(IR)-3T3-L1细胞模型,以5%、10%和15%葛根含药血清干预24 h后,采用ELISA法检测脂肪细胞上清液中脂联素(ADPN)含量;油红O染色法观察脂肪细胞的形态变化。分子对接预测葛根化学成分与过氧化物酶体增殖物激活受体家族(PPARs)的结合活性。采用Western Blot法检测脂肪细胞PPARγ/α蛋白及其磷酸化表达水平,并采用试剂盒检测其PPARγ/α活性;以PPARγ/α特异拮抗剂GW9662/GW6471分别干预后,采用qPCR法检测PPARγ/α及其调控基因的转录水平。结果与IR模型组比较,5%、10%和15%葛根含药血清组细胞外泌ADPN含量显著增加(P<0.05,P<0.01),小脂肪细胞数量增多,胞内脂滴变小。分子对接显示葛根中多个活性成分与PPARγ和PPARα有较强结合活性,而与PPARδ结合相对较弱。与IR模型组比较,5%、10%和15%葛根含药血清能显著上调PPARγ和PPARα蛋白表达(P<0.001),下调p-PPARγ(Ser112)蛋白表达(P<0.001),而p-PPARα(Ser12)蛋白条带检测不到,提示非磷酸化活性状态PPARγ和PPARα表达上调,与检测到的PPARγ/α活性显著增强(P<0.001)相吻合。GW9662/GW6471分别拮抗后,与非拮抗对照组比较,10%葛根含药血清组细胞PPARγ及其靶基因ADPN、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA表达均显著下调(P<0.001);PPARα及其靶基因中链脂酰辅酶A脱氢酶(MCAD)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)mRNA表达均显著下调(P<0.05,P<0.001)。此外,与IR模型组比较,10%葛根含药血清组细胞的胰岛素受体(InsR)、胰岛素受体底物1(IRS1)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、PPARδ和诱导细胞死亡的DFF45样效应因子B(CIDEB)mRNA表达显著上调(P<0.01,P<0.001)。结论葛根可能通过激活PPARγ/α表达及活性功能,协调调控脂肪细胞糖脂代谢,改善其IR。

清热复方抗代谢炎症治疗2型糖尿病的研究进展

糖尿病是我国三大慢性疾病之一,多数(>90%)是2型糖尿病。现代医学研究表明,2型糖尿病是长期全身系统性的低度慢性代谢炎症,与传统典型炎症"红肿热痛"不同。长期服用降糖西药,易出现低血糖、耐药性、体重增加等副作用和不良反应。清热中药复方切中肥胖相关2型糖尿病以"热"辨证论治病机,采用清热治则的中药复方多成分、多靶点、多通路,减毒增效改善代谢炎症、协同调控糖脂代谢紊乱,延缓2型糖尿病进程。本文从抗代谢炎症角度探讨清热中药复方干预调控机体糖脂稳态失衡的研究进展,为中医药防治2型糖尿病提供新的治疗策略和依据。