荧光成像与药物控释双功能表阿霉素载药胶束的制备与体外评价

目的制备荧光成像与药物控释双功能表阿霉素载药胶束(fluorescence imaging and drug controlled-release bifunctional epirubicin drug-loaded micelles,EPI-FIDCR)。研究EPI-FIDCR胶束的体外释放行为;初步评价EPI-FIDCR胶束在Hela细胞中的摄取及细胞毒性。方法采用薄膜分散法制备EPI-FIDCR胶束;以不同pH磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline,PBS)作为释放介质,评价EPI-FIDCR胶束的体外释放行为;通过MTT(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法评价盐酸表阿霉素(epirubicin hydrochloride,EPI)、EPI-FIDCR胶束、聚乙二醇一聚乳酸嵌段共聚物(polyethylene glycol-polylactic acid block copolymers,PEG-PDLLA)及聚乙二醇修饰的石墨烯量子点(polyethylene glycol-modified graphene quantum dots,GQDs-PEG)的细胞毒性及测定IC_(50)值;用荧光显微镜对EPI-FIDCR胶束在Hela细胞内的荧光成像进行研究。结果制备的EPI-FIDCR胶束平均粒径为(19.59±1.21)nm,Zeta电位为(-22.87±0.85)mV,包封率为(74.02±0.55)%,载药质量分数为(3.78±0.28)%,EPI-FIDCR胶束表现出缓释行为,通过计算分别得出EPI的IC_(50)值为(5.54±0.06) mg·L^(-1),EPI-FIDCR胶束的IC_(50)值为(7.03±0.03) mg·L^(-1)。EPI-FIDCR胶束能够进入细胞,发挥荧光成像作用。结论成功制备了荧光成像与药物控释双功能表阿霉素载药胶束,具有较好应用前景。

核壳结构表阿霉素靶向纳米粒及其体外光热化疗联合作用研究

目的制备具有高光热转换效率的核壳结构磷脂包覆装载表阿霉素的聚多巴胺杂合靶向纳米粒(lipid-coated hybrid polydopamine-cysteine cores for the delivery of epirubicin,E/PCF-NPs),并对其进行了表征和光热化疗体外联用作用研究。方法采用改进的氧化自聚合法制备聚多巴胺杂合内核(dopamine to form hybrid PDA-cysteine cores,PDAC cores),利用甲醇注入法制备得到E/PCF-NPs。绘制光照下温度时间变化曲线评价纳米粒光热转化性能;采用超滤法与高效液相色谱仪测定包封率及载药量;透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)、原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)、扫描电镜(scanning electron microscopy,SEM)评价纳米粒结构;通过测定Zeta电位、粒径分布、贮存及血浆稳定性、体外释放考察纳米粒理化性质;采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide),MTT]测定纳米粒的细胞毒性。结果PDA-NPs具有稳定光热转换性能及极低的衰减率。E/PCF-NPs的粒径为(106.7±2.4)nm,Zeta电位为(-46.7±5.28)mV,TEM、SEM、AFM显示纳米粒子呈球形或类球形,粒径分布均匀。表阿霉素包封率为(99.7±0.4)%,载药量为(10.26±0.04)%,且具有良好的贮存及血浆稳定性。体外释放表明E/PCF-NPs中表阿霉素的释放具有pH敏感性,且在近红外光照射下释放加快。细胞毒性证实在光照下可联合化疗药物实现更强细胞毒性。结论E/PCF-NPs光热转换性能良好,可实现表阿霉素的高效包封及缓释,在体外联合光热治疗后具有高抗肿瘤活性。

磷脂包覆银-石墨烯量子点多功能纳米粒的制备与体外评价

本文制备了磷脂包覆银-石墨烯量子点多功能纳米粒(ADG-DDPC)并对其进行了体外评价。通过正负电荷之间的相互吸引作用,使得阳离子磷脂1,2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷(1,2-dioleoyl-3-trimethy-lammoniumpropane)(DOTAP)优先吸附在银纳米粒(AgNPs)内核的表面,利用相转换原理及疏水作用使得二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-环肽(DSPE-PEG_(2000)-cRGD)自组装到DOTAP表面,形成稳定的多功能纳米制剂,并对其紫外吸收特性、粒径分布性质、形貌、释放行为、杀灭癌细胞能力及细胞摄取情况进行研究。合成的纳米制剂的最大紫外吸收峰在400 nm左右,马尔文粒径仪及透射电子显微镜均证明了该纳米制剂粒径约为30～40 nm,分布均一。纳米制剂的释放与H_2O_2浓度呈正相关。与AgNPs对肿瘤细胞的IC50值[(347.78±0.06) ng·mL^(-1)]比较, ADG-DDPC的IC50值为(209.68±0.09) ng·mL^(-1),具有更强的细胞毒性。通过细胞摄取实验,证实了该纳米制剂能被肿瘤细胞摄取,且能在肿瘤部位发光。本文成功制备了ADG-DDPC,该制剂体外具有肿瘤细胞标记的作用及较高体外抗肿瘤活性。

载siRNA的眼用三甲基壳聚糖修饰纳米粒的制备及其跨角膜作用评价

目的:构建三甲基壳聚糖修饰非对称脂质双层PARP-1 siRNA基因递送系统(trimethyl chitosanmodified nanoparticles with asymmetric lipid bilayers loading with poly ADP-ribose polymerase-1 siRNA,TMC-siNPs),并对其理化性质及其角膜透过能力进行评价。方法:采用qRT-PCR实验筛选最佳沉默效果的PARP-1 siRNA;采用兔眼部刺激性实验考察TMC安全性;采用钙磷沉淀-微乳法、薄膜分散法,并通过静电吸附制备TMC-siNPs;采用透射电子显微镜、粒度仪、琼脂糖凝胶电泳法对其形态、粒径、Zeta电位、包载能力进行测定;通过流式细胞仪考察人晶状体上皮细胞(HLECs)对TMC-siNPs的摄取能力;采用离体兔角膜透过实验结合激光共聚焦扫描显微镜成像考察TMC-siNPs的角膜透过能力。结果:确定最佳PARP-1 siRNA序列,并确定TMC最终浓度为0.1%。TMC-siNPs粒子形态呈球形且分散性良好;平均粒径为(57.3±0.6)nm,粒径分布良好;Zeta电位为(19.8±0.7)mV,显著高于TMC未修饰组,且琼脂糖凝胶电泳表明siRNA能稳定地包裹于纳米粒中。细胞摄取结果表明,相同时间下TMC-siNPs荧光强度明显强于Free-siRNA组,且随着时间增加,荧光逐渐增强。角膜透过性实验结果表明,与Free-siRNA组相比,siNPs和TMC-siNPs渗透至角膜深层的距离分别是Free-siRNA组的4和6倍,且主要通过细胞旁路通道途径发生角膜透过。结论:TMC修饰非对称脂质双层纳米粒可高效包载PARP-1 siRNA、促进基因角膜透过,有望提高基因药物的眼内疗效。