基于Nrf2/TXNIP信号通路探讨葛根芩连汤含药血清对非酒精性脂肪性肝炎的影响

目的:探讨葛根芩连汤(GGQLT)含药血清对游离脂肪酸(FFA)诱导人肝癌细胞HepG2非酒精性脂肪性肝炎(NASH)体外模型的影响。方法:建立HepG2细胞NASH体外模型,使用不同体积分数的GGQLT含药血清及白藜芦醇干预细胞。利用油红O染色检测各组细胞内脂质沉积;采用流式细胞术检测各组细胞内活性氧(ROS)水平;通过试剂盒检测各组细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)含量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组HepG2细胞内核转录因子(NF)E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、NF-κB、白细胞介素-1β(IL-1β)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)的mRNA表达情况。运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞Nrf2、TXNIP的蛋白表达情况。结果:FFA诱导引起细胞内脂质大量堆积。与正常组比较,模型组抗氧化酶GSH-Px和SOD的活性显著降低(P<0.01),TG、ROS和MDA含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,GGQLT各剂量组和白藜芦醇组均可不同程度地升高细胞内SOD的活性(P<0.05,P<0.01),明显降低细胞内ROS、MDA水平(P<0.05,P<0.01);GGQLD高、中剂量组和白藜芦醇组可显著升高GSH-Px的活性(P<0.01),GGQLD中、低剂量组和白藜芦醇组明显降低TG的含量(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,GGQLT高、中剂量组和白藜芦醇组可显著上调Nrf2、HO-1、NQO1的mRNA表达水平(P<0.01),GGQLT各剂量组、白藜芦醇组可明显下调TXNIP蛋白表达水平和Keap1、NF-κB的mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01)。Nrf2-小分子干扰核糖核酸(siRNA)转染细胞后发现,与相应剂量药物的阴性对照(NC)-siRNA组比较,其Nrf2-siRNA组细胞内Nrf2表达显著下调(P<0.01);GGQLT和白藜芦醇对TXNIP、IL-1β的抑制作用被减弱。结论:FFA诱导HepG2细胞内产生ROS和炎症因子,GGQLT可提高细胞的抗炎、抗氧化能力,其作用机制可能与调节Nrf2/TXNIP信号通路相关,进而达到改善NASH的目的。