中德生物STR荧光ZDgenetype9+1基因分型试剂盒应用结果分析

目的:确证中德生物STR荧光ZDgenetype 9+1基因分型试剂盒应用于个体基因分型的准确性和重复性。方法:应用中德生物ZDgenetype 9+1 STR荧光基因分型试剂盒扩增100例无关个体样本,建立扩增产物在ABI 310遗传分析仪上基因分型的方法,相同样本扩增结果与AmpFLSTR Identifiler基因分型结果进行比较。结果:ZDgenetype 9+1荧光基因分型试剂盒对100例无关个体血样进行复合扩增并实现了在ABI 310遗传分析仪上进行基因分型,其结果与AmpFLSTR Identifile扩增相同样本的基因分型结果吻合率为100%。结论:中德生物ZDgenetype 9+1 STR荧光基因分型试剂盒适用于法庭科学日常办案和科研使用。

集成免疫磁珠富集和免疫层析的黄曲霉毒素M_1快速检测法

以喷涂了检测抗原黄曲霉毒素M1-BSA和驴抗鼠二抗形成检测线和质控线的硝酸纤维膜制备免疫层析试纸条,采用EDC/NHS法制备偶联了抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体的免疫磁珠。免疫磁珠与待检样本混合,经捕获、磁分离后,浓缩重悬液直接用免疫层析试纸条检测,首次建立了集浓缩样本与免疫层析于一体的黄曲霉毒素M1快速检测法。该方法用于检测原料乳中黄曲霉毒素M1,检出限为0.1μg/L,低于我国制定的黄曲霉毒素M1限量标准(0.5μg/L),与其它真菌毒素和原料乳中常检违法添加物无交叉反应,分析结果与酶联免疫吸附法(ELISA)结果一致。本方法适合现场快速检测原料乳中黄曲霉毒素M1。

胶体金免疫层析法快速检测腹泻性贝毒软海绵酸的研究

腹泻性贝毒是一类分布较广的赤潮毒素,严重威胁到人类的健康和安全。本文用胶体金标记利用细胞融合技术制备的抗软海绵酸单克隆抗体,使用卵清蛋白合成高偶联比的包被抗原,以硝酸纤维素膜为载体,利用免疫层析技术原理,建立了快速检测软海绵酸的免疫层析试纸条方法。方法检出限12 ng/mL(0.96纳克/条)。

胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特罗

建立了基于T/C比值的胶体金免疫层析法快速定量检测猪肉中克伦特罗残留的新方法。胶体金免疫层析试纸条的定量检测线性范围为0.1～1.5 ng/g,检测猪肉中克伦特罗残留的最低检测灵敏度为0.19 ng/g。比较了5种猪肉组织样本中克伦特罗的简便提取方法,其中采用0.02 mol/L,含2.8%NaCl的HCl溶液抽提猪肉样品2次的提取方案,克伦特罗的平均回收率达到76.7%,变异系数为7.4%。实际样本加标回收实验显示,加标量为0.5、1.0、2.0及3.0 ng/g时,胶体金试纸条检测回收率分别为(60.4±12.8)%,(70.24±4.2)%,(75.9±4.9)%,(71.1±5.0)%。与传统ELISA方法比对,结果显示2种方法具有较好的相关性(R2=0.9136)。以上实验结果证实,基于T/C比值法的胶体金免疫层析试纸条可用于猪肉组织样品中克伦特罗的快速及定量检测。

胶体金免疫层析试纸条定量检测猪尿中克伦特罗

目的:建立胶体金免疫层析试纸条快速、定量检测尿样中克伦特罗的方法。方法:采用正交设计获得克伦特罗胶体金试纸条最佳工艺条件,建立T/C比值法定量检测尿样中克伦特罗残留。结果:胶体金免疫层析试纸条检测尿样中克伦特罗的最低检测限0.22ng/mL;当尿液中克伦特罗质量浓度在0.1～2.0ng/mL范围内,胶体金免疫层析试纸条具有较好的线性关系且50%抑制质量浓度(IC50)为0.36ng/mL;加标回收实验结果表明,阴性尿样分别添加0.5、1.0、1.5ng/mL克伦特罗,试纸条检测的平均回收率为(102.4±7.8)%、(96.5±6.8)%以及(103.3±7.2)%。结论:成功建立了基于胶体金免疫层析试纸条定量检测尿样中克伦特罗的方法。

大肠杆菌O157:H7胶体金试纸条研制

采用胶体金标记抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体(鼠源),通过将大肠杆菌O157:H7多克隆抗体和驴抗鼠抗体(二抗)喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,研制大肠杆菌O157:H7胶体金快速检测试纸条。通过优化实验,确定最佳条件为标记量16.8μg/mL、标记pH8.0、封闭剂PEG20000、检测时样品最佳pH7.0～7.5。对26株常见细菌交叉反应结果表明,该试纸条除与鼠伤寒沙门氏菌ATCC13311和金黄色葡萄球菌CMCC26003有轻微交叉反应外,与其他24株菌均无交叉反应。该试纸条灵敏度为104CFU/mL。用该试纸条检测大肠杆菌O157:H7操作简便、快捷、灵敏度高、特异性强。

胶体金免疫层析法定量检测孔雀石绿

基于竞争抑制反应原理,制备孔雀石绿胶体金免疫层析试纸条,通过胶体金读取仪,读取试纸条上检测线(T线)及质控线(C线)的吸光度,建立孔雀石绿免疫层析定量检测方法。使用胶体金读取仪在多个时间段对不同质量浓度的孔雀石绿标品进行检测。以标品的不同质量浓度为横坐标,分别以T线吸光度、T/C值和T/(T+C)值为纵坐标建立3种检测模式。结果表明:检测时间为10min时,T线吸光度与标品质量浓度关系曲线的R2=0.9438,变异系数为1.6%～8.2%;T/C值与标准品质量浓度关系曲线的R2=0.9811,变异系数为0.4%～3.7%;T/(T+C)值与标准品质量浓度关系曲线的R2=0.9916,变异系数为0.3%～2.2%,和其前两种模型比较,最后一种方法的线性关系好,变异系数小,检测灵敏度为3μg/L,是一种较为理想的检测模型。

胶体金试纸条快速检测食品中磺胺二甲基嘧啶残留

目的:旨在建立一种快速、简便的针对磺胺二甲基嘧啶残留的检测方法。方法:应用竞争抑制免疫层析原理,研制磺胺二甲基嘧啶胶体金试纸条。结果:该试纸条检测限为10ng/mL、检测时间5min,与其他磺胺类药物交叉反应小,可用于多种食品样本的检测,且样本检测限为100μg/kg。结论:该方法操作简便、灵敏度高且特异性强,可实现对食品样品中磺胺二甲基嘧啶残留的快速检测。

赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制及与传统胶体金试纸条的比较

本实验介绍了赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的研制方法,其中包括胶体金的生产、金标抗体的制备、无毒体系试纸条的组装等步骤。所制备的赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条和传统的胶体金试纸条进行了比较,测试结果表明,赭曲霉毒素A无毒体系胶体金试纸条的检测限和检测时间与传统的胶体金试纸条相同,适合于赭曲霉毒素A现场筛查之用。

应用胶体金试纸条快速检测赭曲霉毒素A的研究

本文介绍了一种快速检测赭曲霉毒素A的胶体金试纸条的研制方法,其中包括胶体金的生产、金标抗体的制备、试纸条的组装和测试等步骤。测试结果表明赭曲霉毒素A快速检测试纸条的检测限为10ng/ml,检测时间为10min,加上使用方便,经济适用,使之适合于赭曲霉毒素A现场快速检测之用。

盐酸克仑特罗ELISA试剂盒的研制

在间接竞争酶联免疫吸附法的基础上,研制了一种可以检测尿样或食品中盐酸克仑特罗的试剂盒。ELISA检测方法的各个影响因素均通过实验进行了优化。该试剂盒具有良好的灵敏度,半抑制率(IC50)为0.6ng/ml,该抗体与肾上腺素等结构类似物的交叉反应率均小于0.3%,回收率为90%～104%,批内变异系数小于6%,批间变异系数小于10%,试剂盒在12个月保存期内稳定。可用于盐酸克仑特罗的快速定量检测。

纯种犬在15个STR基因座上的遗传多态性

目的:指导纯种犬的繁育及建立一套简便的犬个体识别和亲权鉴定方法。方法:通过设计引物进行PCR扩增及PAGE检测的方法,分析了88头纯种犬在15个STR基因座上的遗传学多态性。结果:15个STR基因座的累积非父排除率(CPE)和累积个体识别率(TDP)分别为0.999678和0.999999999997,而平均杂合度和平均多态信息含量分别为0.607和0.640。12个STR基因座(PEZ1、PEZ2、PEZ3、PEZ5、PEZ6、PEZ8、PEZ12、FHC2010、FHC2054、FHC2087UbF、HC2132、FHC2611)的多态信息含量(PIC)和杂合度(H)大于0.5,它们的TDP和CPE值分别为0.999999999963和0.999334,能有效用于犬的个体识别和亲权鉴定。结论:这15个STR基因座可以用于指导犬的繁育,其中12个STR基因座能有效用于犬的个体识别和亲权鉴定。

三聚氰胺胶体金免疫层析方法的建立

建立了一种快速检测三聚氰胺的胶体金试纸条的方法,其中包括胶体金的制备、金标抗体的制备、试纸条的组装和测试等步骤。结果表明:三聚氰胺快速检测试纸条的检测限为10 g/L,检测时间为10min,可实现原料乳不经处理直接上样,是一种简便准确的快速检测方法。

黄曲霉毒素M_1模拟表位的筛选和鉴定

目的:从噬菌体表面7肽库中筛选出黄曲霉毒素M1抗原的模拟表位。方法与结果:经过4轮淘选,筛选获得了4个与抗AFM1单克隆抗体具有较高亲和性的阳性噬菌体克隆,编号为A1、A2、A3和A4。间接竞争抑制实验结果表明:当噬菌体滴度为2.5×1010CFU时,噬菌体A1、A2、A3和A4对AFM1与抗AFM1单克隆抗体结合的抑制率分别为41.8%、40.6%、36.7%和37.6%。测定其核酸序列,其中A1、A2为同一克隆,氨基酸序列为LTSFPRH;A3、A4为同一克隆,氨基酸序列为MAPSSWR。结论:从噬菌体7肽库中筛选到2个AFM1的理想模拟表位。

多枝状胶体金免疫层析试纸条定量检测猪尿中沙丁胺醇

以65 nm多枝状胶体金(金纳米花,Au NFs)为新型探针,建立了检测猪尿中沙丁胺醇(SAL)的免疫层析新方法。采用吸附方法将抗SAL单克隆抗体标记在Au NFs上制备检测探针,以牛血清白蛋白-SAL偶联物及羊抗鼠二抗喷涂在硝酸纤维素膜上形成试纸条检测线(T线)和质控线(C线),建立了基于T/C比值法定量检测猪尿中沙丁胺醇的新方法。Au NFs免疫层析试纸条检测SAL的定量线性范围为0.05~1.0 ng/m L(y=-21.4 ln x+10.407,R^2=0.995),半数抑制浓度(IC_(50))为0.143 ng/m L(n=5),检测猪尿中SAL的最低检测限为0.027 ng/m L。单个样品定量检测时间12 min。加标回收实验显示,试纸条批内加标回收率为101.53%~110.68%,批间加标回收率为98.86%~110.50%,批内、批间实验相对标准偏差(RSD)均小于10%。将Au NFs免疫层析试纸条与商业化酶联免疫试剂盒同时检测50个SAL加标的猪尿样品,两种方法检测结果具有良好的相关性(R^2=0.955)。

提高ELISA在食品安全检测中性能的技术进展

酶联免疫吸附检测(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)的核心是抗原/抗体结合反应,应用在食品安全检测中的ELISA方法,面临着待测物质在样品中含量低、免疫原性小、存在交叉反应、干扰因素多等困难。对提高食品安全ELISA灵敏度、特异性、稳定性、线性相关性的技术进行综述。