基于网络药理学对生姜药用活性成分的发现和作用机制分析

目的:通过网络药理学研究,发现生姜重要的功能物质成分、发挥作用点、有关生物过程的信号通路和疾病信息等各方面的联系,并揭示其发挥药效的作用机制。方法:从中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)和Batman数据库中获得生姜的化学功能成分,并把其中活性成分的口服生物利用度(OB)≥30%和药物相似类药性(DL)≥0.18作为筛分条件,获得生姜的主要活性功能成分和疾病相关作用靶点信息。通过UniProt数据库提取作用靶点的基因名称,并用CTD网络在线分析平台得到与疾病作用点和信号路径。在此基础上用Cytoscape 3.7.2构建"发挥作用的活性成分-靶点""PPI靶点互作"和"功能靶点-疾病"网络图,采用Network Analyzer插件分析该网络图,探讨生姜的多重药理作用机制。结果:通过网络药理学研究共获得了姜8个主要活性功能成分,涉及PTGS2、TP53、HSP90AA1、ERS1、PGR等74个靶点,通过调节乙型肝炎、癌症通路、Ca+信号通路、3K-Akt信号通路等信号通路发挥治疗疾病的作用,其中肿瘤、免疫相关的占绝大部分。结论:生姜可以通过多成分、多靶点、多信号通路的协调作用发挥潜在的治疗疾病作用,其中在肿瘤疾病治疗和增强人体免疫功能方面具有比较好的优势。

基于多组学技术整合的中药复方治疗溃疡性结肠炎的作用机制研究进展

中药复方是传统中医治病的主要手段,在多因素复杂慢性疾病的临床治疗中具有显著优势。而中药复方作用机制的阐释对中医药现代化和国际化的推进具有重大意义。中药复方基于“整体观”,体现了多组分、多靶点、多途径等特点,而多组学如转录组学、代谢组学、肠道微生态等技术为中药复方作用机制的阐释提供了不同的视角。溃疡性结肠炎是一种结肠黏膜的慢性非特异性炎性疾病,其病程缠绵难愈,反复发作,已被世界卫生组织列为现代难治病之一。随着大数据时代的到来,高通量、高效的多组学等联合分析已成为必然趋势,在探究溃疡性结肠炎的发病机制和治疗方面可提供极大的帮助。越来越多的研究者通过两种或两种以上技术方法从基因、菌群以及代谢产物等水平共同解释溃疡性结肠炎病变过程及中药复方的作用机制。该文以溃疡性结肠炎为例,基于转录组学、代谢组学、肠道微生态等多组学技术,对近20年国内外中药复方治疗溃疡性结肠炎作用机制文献进行梳理和分析,并对各种技术在应用层面的内在联系加以阐述,为防治溃疡性结肠炎等炎症性肠病的中药研发和其他中药复方作用机制提供研究思路。

葛根芩连汤对胰岛素抵抗大鼠肝脏能量代谢及游离脂肪酸的影响

目的探讨葛根芩连汤对胰岛素抵抗(IR)大鼠肝脏能量代谢及游离脂肪酸(FFA)的影响。方法采用60%脂肪的高脂饲料连续喂养13周复制IR大鼠模型。将SD大鼠随机分为正常组、模型组、罗格列酮组(5 mg·kg^(-1))以及葛根芩连汤低、中、高剂量组(1.65、4.96、14.86 g·kg^(-1)),每组6只。灌胃给药,每天1次,连续给药干预16周。测定IR相关指标:血清空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG)值,计算IR指数;建立HPLC法测定大鼠肝组织中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)含量;采用ELISA法测定大鼠肝组织中的FFA含量;采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量;采用HE染色法观察肝脏组织病理变化。结果(1)模型复制结束后,与正常组比较,模型组大鼠的FINS、FPG水平及IR指数显著升高(P<0.01);肝脏组织中ATP、ADP、AMP、FFA含量均无明显变化(P>0.05)。(2)给药干预结束后,与正常组比较,模型组大鼠的FINS、FPG水平及IR指数显著升高(P<0.01),肝脏组织中ATP、ADP、AMP含量均显著下降(P<0.01),FFA含量显著升高(P<0.01),血清TC、TG水平均明显升高(P<0.05);肝细胞排列紊乱,出现脂肪变性,并存在大量脂滴。与模型组比较,各给药组大鼠的FINS水平及IR指数均明显降低(P<0.05,P<0.01),罗格列酮组大鼠的FPG水平明显降低(P<0.05);各给药组大鼠肝脏组织中ADP、AMP含量均明显升高(P<0.05、P<0.01),葛根芩连汤低、中、高剂量组大鼠肝脏组织中ATP含量明显升高(P<0.05、P<0.01);罗格列酮组及葛根芩连汤低、高剂量组大鼠肝脏组织中FFA含量均显著降低(P<0.01);葛根芩连汤低、高剂量组大鼠血清TC水平明显降低(P<0.05,P<0.01),罗格列酮组及葛根芩连汤低剂量组大鼠血清TG水平明显降低(P<0.05,P<0.01);各给药组大鼠的肝细胞脂肪变性有不同程度减轻,且脂滴减少,病理损伤得到改善。结论葛根芩连汤可能通过调节能量代谢并降低FFA水平,从而改善肝脏脂质代谢紊乱,恢复脂质与能量平衡,从而起到改善IR的作用。

大承气汤配伍治疗急性胰腺炎的实验研究

目的:寻找大承气汤治疗急性胰腺炎的最佳药味配伍与药味重要性。方法:构建大鼠急性胰腺炎模型,利用均匀设计法得到大承气汤的10个配伍,检测血清Ca2+、血清淀粉酶、白介素-6、白介素-10、淋巴细胞功能关联抗原1a、胰脂肪酶、肺脏指数,进行因子分析,寻找其中起支配作用的因子。对药味以检测指标进行偏最小二乘回归分析,寻找大承气汤治疗急性胰腺炎的最佳药味及配伍。结果:因子分析发现,所测指标可分为炎症因子和脏器因子两类。在大承气汤中,厚朴为主要药味,大黄次之,其最佳配伍为大黄:厚朴=8.85:11.80(g生药·kg-1)。结论:大承气汤治疗急性胰腺炎应重用厚朴和大黄。

吴茱萸碱的现代药理研究进展

吴茱萸碱(evodiamine, Evo)是吴茱萸中重要的生物碱成分,其主要药理作用为抗肿瘤、抗炎镇痛、抑菌、调节内分泌、降血脂、调节平滑肌细胞等。吴茱萸碱可通过调控信号通路和引发细胞周期阻滞而达到抗肿瘤作用,包括JAK2/STAT3信号通路、Wnt/β-catenin信号通路、PI3K/Akt和mTOR等信号通路,同时吴茱萸碱可以将肿瘤细胞阻滞于G0/G1期和G2/M期。这些研究为靶向治疗肿瘤提供了可行性方案,为治疗其他相关性疾病提供参考。

江西兴国九山生姜挥发油成分的GC-MS分析

目的:用气相色谱-质谱法(GC-MS)对江西兴国九山生姜的挥发油进行化学成分分析。方法:采用水蒸气蒸馏法获得九山生姜挥发油,并用气相色谱-质谱联用仪进行化学成分的分离鉴定,用面积归一化法测定其百分含量。结果:从挥发油中共鉴定出108个化合物,主要成分以烯烃类、醛类、醇类、羧酸类、酯类为主。结论:本研究首次报道了九山生姜挥发油成分,为开发利用兴国九山生姜及其制剂质量控制提供依据。

UHPLC-Q-TOF-MS/MS分析青钱柳嫩叶渗漉提取液化学成分

为分析青钱柳嫩叶的化学成分,本研究采取高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(UHPLC-Q-TOFMS/MS)对青钱柳嫩叶渗漉提取液的化学成分进行快速定性分析。在正、负离子模式下全扫描和对母离子电子轰击,根据各化合物的精确分子量及元素组成、主要碎片信息、保留时间以及结合青钱柳相关文献和数据库检索,从青钱柳中共鉴定出94种化合物,包括29种黄酮类、16种三萜类、25种有机酸类、24种其他类化合物。分析结果显示,青钱柳渗漉提取液中含有黄酮、有机酸、三萜、香豆素、氨基酸类等多种化合物,且苹果酸、橙皮素、松脂素、6,7-二羟基香豆素、6-甲基香豆素、5,7-二甲氧基香豆素为首次在青钱柳中发现,本研究结果可为进一步明确青钱柳药效物质基础奠定了基础,为开发青钱柳相关产品提供了理论依据。

参附注射液治疗心脑血管疾病相关物质基础及作用机制研究进展

参附注射液(Shenfu injection,SFI)的主要有效成分为人参皂苷和乌头类生物碱,具有回阳救逆、益气固脱之功效,广泛用于心脑血管疾病的治疗。慢性炎症是心脑血管疾病发生的关键因素。SFI作为治疗心脑血管疾病的常用中药制剂,具有改善脏器灌注、保护心肌和脑缺血时组织损伤、改善血流动力学、舒张血管等作用,而且具有确切的抗炎效应。该文基于抗炎角度,对SFI治疗心脑血管疾病相关物质基础及作用机制进行综述,可为SFI的临床应用提供参考。

二仙汤对环磷酰胺致少精子症模型小鼠生殖功能的影响

目的:探讨二仙汤对环磷酰胺致少精子症模型小鼠生殖功能的影响。方法:雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、二仙汤低/中/高剂量组等5组,每组16只小鼠。二仙汤低/中/高剂量组按体重每天分别灌胃3、6、12 g/kg的二仙汤,正常组和模型组则按体重灌胃相应体积生理盐水,连续30 d。从给药第21天起模型组、二仙汤低、中、高剂量组则同时腹腔注射环磷酰胺(80 mg/kg),正常组则腹腔注射生理盐水,连续5 d。在末次灌胃24 h后处死小鼠,取双侧附睾制备精子悬液,以随机盲测方式观察精子的数量和活力;取小鼠双侧睾丸,做睾丸组织切片,观察睾丸形态以及组织匀浆,以生化方法检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷光氨肽(GSH)的浓度。结果:与正常组相比,模型组小鼠的附睾精子浓度[(9.31±1.32)×10~6/ml vs(3.32±1.13)×10~6/ml]与活力明显下降[(44.75±8.12)%vs(25.95±11.41)%],SOD[(37.27±0.99)U/mg prot vs(14.23±1.99)U/mg prot]、GSH[(101.55±8.74)μmol/L vs(58.77±8.93)μmol/L]浓度降低(P<0.01),MDA含量升高,组织切片显示管腔内精子的数量减少,生精细胞排列比较稀疏。而二仙汤具有明显改善作用,低、中、高剂量的二仙汤都能提高附睾精子浓度[(8.34±2.59)×10~6/ml;(8.59±1.10)×10~6/ml;(8.41±1.47)×10~6/ml]、活力[(36.04±12.33)%;(38.87±13.13)%;(41.90±8.09)%]以及SOD[(22.99±1.11)U/mg prot;(20.82±1.81)U/mg prot;(21.33±1.66)U/mg prot]、GSH[(104.74±2.47)μmol/L;(98.61±12.98)μmol/L;(108.89±5.85)μmol/L]含量,降低MDA含量等。结论:中药复方二仙汤能改善环磷酰胺致精子浓度减少和活力降低等病证,其作用机制可能与提高抗氧化能力,减少氧化应激损伤有关。

基于UPLC-Q-TOF/MS的黄连解毒汤抗动脉粥样硬化大鼠血浆代谢组学研究

目的基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术探讨黄连解毒汤对动脉粥样硬化大鼠血浆中内源性标志物的影响,旨在寻找差异的潜在生物标志物群,以阐释黄连解毒汤抗动脉粥样硬化的分子机制。方法将雄性SD大鼠随机分成正常对照组、模型组及黄连解毒汤低、中、高剂量组(1.5、3、6 g·kg^-1)。采用高脂饲料+定期注射维生素D3复制动脉粥样硬化模型,造模8周;从第3周开始每天灌胃给药1次,连续给药5周。造模结束后应用UPLC-Q-TOF/MS进行血浆样品的分离和数据采集,通过偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)分析黄连解毒汤对内源性代谢物的影响;对己鉴定结构的代谢标志物通过Metabo Analyst 4.0进行代谢通路分析。结果筛选和鉴定出35个潜在生物标志物。与模型组比较,黄连解毒汤可显著上调乙内酰脲-5-丙酸、3-羟基-N6,N6,N6-三甲基-L赖氨酸、5-L-谷氨酰基-牛磺酸、3-脱氧肉毒碱、3-羟基-9Z-十八碳烯酰肉毒碱、苏氨酰亮氨酸等20个生物标志物(P <0.05,P <0.01),下调原卟啉IX、17-羟基二十二碳六烯酸、19,20-二羟基-二十二碳五烯酸、肉桂酰甘氨酸、褪黑素等10个生物标志物(P <0.05,P <0.01)。主要影响色氨酸代谢、牛磺酸和亚牛磺酸代谢、组氨酸代谢、赖氨酸降解、卟啉与叶绿素代谢等5条代谢通路;原卟啉IX、乙内酰脲-5-丙酸、3-羟基-N6,N6,N6-三甲基-L赖氨酸、5-L-谷氨酰基-牛磺酸和褪黑素等代谢物是与代谢通路密切相关的关键潜在生物标志物。结论黄连解毒汤对高脂饮食诱导的动脉粥样硬化的治疗作用可能与其改善血浆中内源性代谢物水平,恢复体内正常代谢活动有关。

五味子甲素对结肠炎大鼠氧化应激水平的调控作用

目的探讨五味子甲素对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠组织氧化应激水平的调控作用。方法用三硝基苯磺酸(Trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)/乙醇混合液灌肠复制结肠炎SD大鼠模型,大鼠随机均分为正常对照组、模型组、阳性对照组及五味子甲素低剂量(20 mg·kg^-1)、中剂量(40 mg·kg^-1)、高剂量组(80 mg·kg^-1),每组10只。灌胃给药,正常组与模型组同期分别给予等体积蒸馏水,阳性对照组给予150 mg·kg^-1美沙拉嗪(5-ASA),连续治疗7 d后取大鼠结肠并评测其结肠重量、结肠长度、肠重指数、病理切片以及选择最佳剂量组的结肠组织检测SOD,GSH-PX,NO等氧化应激指标。结果经治疗后,与模型组比较,五味子甲素中剂量组治疗效果最佳,肠重减轻、长度增加、肠重指数明显下降,炎症因子明显减少,GSH-PX,SOD,eNOS,iNOS和T-AOC的水平明显升高(P<0.01 or P<0.05),而NO及MPO水平显著降低(P<0.01 or P<0.05)。结论五味子甲素可能通过降低结肠组织中性粒细胞数量和NO含量以及升高SOD和GSH-PX的表达量缓解机体的氧化应激水平治疗实验性大鼠结肠炎。

生物样品中天麻素测定方法及药代动力学研究进展

天麻素是从兰科植物天麻的块茎中提取分离而得,现已人工合成。天麻素药理作用广泛,如镇痛、镇静安眠、促智、保护神经元、降血压、抗惊厥、抗癫痫、抗氧化、抗衰老、改善微循环等,且安全、无明显毒副作用,其相关制剂在临床上亦被广泛用于心脑血管及神经精神系统疾病,如头痛、冠心病、高血压、后循环缺血性眩晕、突发性耳聋、癫痫、神经衰弱及脑卒中等。考虑到天麻素临床治疗上述疾病常与其他药物或治疗方法联用,故其体内过程及其药代动力学性质不容忽视。目前,有关天麻素综述多集中于药理作用和临床应用方面,而其药代动力学综述鲜见报道。随着天麻素药代动力学研究日渐深入,本研究将从其样品前处理、测定方法、药物ADME过程及影响体内过程的因素等方面较系统全面地对天麻素近年来的药代动力学研究作一综述,以期对天麻素制剂工艺及临床联合配伍应用有所裨益。

清肺化痰汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道炎症和黏液分泌的调控作用研究

目的:探讨清肺化痰汤对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)大鼠模型气道炎症和黏液分泌的调控机制研究。方法:建立COPD大鼠模型。50只大鼠随机分为对照组、COPD模型组和清肺化痰汤低、中、高剂量组。Real-time RT-PCR法检测肺组织MUC5AC mRNA的表达,免疫组织化学法检测肺组织MUC5AC蛋白表达,ELISA检测肺泡灌洗液中MUC5AC的表达,ELISA检测肺组织TNF-α和IL-1β的表达,Western Blot检测肺组织中NF-κB的表达。结果:(1)COPD模型组大鼠肺组织中MUC5AC mRNA明显升高,和正常对照组比较有统计学差异(P<0.05),清肺化痰汤治疗后MUC5AC mRNA的表达水平下降,呈剂量依赖性,和模型组相比较,中剂量组和高剂量组差异有统计学意义;(2)免疫组化结果显示,对照组呈弱阳性表达,COPD模型组可见大量的MUC5AC表达,清肺化痰汤各组治疗后MUC5AC的表达明显下降;(3)ELISA结果显示COPD模型组大鼠肺泡灌洗液中MUC5AC蛋白量明显高于正常对照组(P<0.05);清肺化痰汤各组治疗后,肺泡灌洗液中MUC5AC蛋白量明显低于COPD模型组(P<0.05);(4)ELISA结果显示COPD模型组大鼠肺组织中TNF-α和IL-1β蛋白量明显高于对照组(P<0.05);清肺化痰汤各组治疗后,大鼠肺组织中TNF-α和IL-1β蛋白量明显低于COPD模型组(P<0.05),呈剂量依赖性;(5)Western Blot结果显示COPD模型组大鼠肺组织中NF-κB表达明显高于对照组(P<0.05);清肺化痰汤各组治疗后,大鼠肺组织中NF-κB的表达水平低于COPD模型组(P<0.05),呈剂量依赖性。结论:清肺化痰汤通过抑制NF-κB信号通路调节TNF-α、IL-1β炎症因子的表达,从而抑制气道上皮MUC5AC的表达。

腺苷A3受体在中枢神经系统痛觉传导通路及浅筋膜的表达分布

目的:明确腺苷A3受体在针刺镇痛中的作用,探讨腺苷A3受体在中枢神经系统痛觉传导通路及浅筋膜的表达分布。方法:免疫组织化学法及Western Blot法分析腺苷A3受体在大鼠L4-S1脊髓神经节段、脑干、丘脑、大脑皮层及后三里、腹股沟中点处、腹膜浅筋膜的表达分布;鼠尾光照测痛仪观察针刺大鼠后三里对热辐射痛的镇痛作用,腹腔注射IB-MECA及Reversine对针刺镇痛的影响。结果:免疫组织化学法及Western Blot法分析显示,腺苷A3受体在痛觉传导通路中的脊髓、脑干、丘脑、大脑皮层均有分布,且在脊髓表达最高,依次是丘脑,大脑皮层,脑干。腺苷A3受体在后三里、腹股沟中点处、腹膜浅筋膜亦有分布,Western Blot法分析腹膜表达高于腹股沟和后三里,但免疫组织化学法分析各组光密度这一趋势并不明显。针刺后三里穴位进针后5、10、15、20、25、30 min甩尾潜伏期明显延长,具有时间依赖性,且在进针15～20 min镇痛效果最佳。腺苷A3受体激动剂IB-MECA可加强针刺效应,而腺苷A3受体拮抗剂Reversine可减弱该效应。结论:腺苷A3受体在中枢神经系统痛觉传导通路及浅筋膜均有丰富表达,参与针刺镇痛生理过程。

i TRAQ联合NanoLC-LTQ-Orbitrap技术分析二仙汤干预去卵巢骨质疏松大鼠的骨组织差异表达蛋白

目的筛选以二仙汤干预去卵巢骨质疏松大鼠后的差异表达蛋白质,探讨二仙汤防治骨质疏松的分子作用机制。方法雌性SD大鼠,按体质量随机分为3组,即假手术组、模型组、二仙汤组,其中假手术组和模型组灌胃生理盐水,二仙汤组按生药量12 g·kg^(-1)灌胃,每日1次,连续给药90 d。取大鼠股骨,运用同位素相对和绝对定量(Isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)联合纳升高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱(NanoLC-LTQ-Orbitrap)高分辨质谱技术的定量蛋白质组学方法检测骨蛋白,采用ProteinDiscovery软件进行分析和鉴定差异蛋白质,通过生物信息学分析差异表达的蛋白质功能。结果质谱分析共鉴定出862个差异蛋白,其中二仙汤组与模型组相比较,共发现82个与假手术组趋势一致的差异蛋白,上调蛋白45个,下调蛋白37个。生物信息学分析发现,差异表达的蛋白大多数属于水解酶、核酸结合类蛋白、受体类蛋白等。结论细胞色素b-245轻链、促分裂原活化蛋白激酶-1、Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物-1等相关差异蛋白质可能是二仙汤防治骨质疏松症的作用靶点。

调控BCL-6信号干预Tfh细胞分化:治疗炎症性肠病新策略

自滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,Tfh细胞)发现以来,大量证据表明与炎症性肠病的发病有关.Tfh细胞及其亚群分泌不同细胞因子皆可在炎症性肠病的发病过程中扮演重要角色,为靶向治疗炎症性肠病提供重要思路.BCL-6信号作为Tfh细胞分化途径上的关键性转录因子,可调控Tfh细胞的增殖、分化.在BCL-6信号缺乏时无法产生Tfh细胞,且BCL-6信号也可通过正性调控、负性调控以及表观遗传学等多种途径有效调控Tfh细胞的分化.在BCL-6信号调控异常时可导致Tfh的分化异常导致炎症性肠病的发生.因此可以通过干预BCL-6信号来调控Tfh细胞分化来作为治疗炎症性肠病新的有效靶点.

寒热并用在溃疡性结肠炎临床运用中的策略分析

溃疡性结肠炎实为本虚标实之病,然常表现出寒热错杂、虚实相兼的病机特点。治宜遵“标本兼顾”原则,酌情运用寒热并用法。从溃疡性结肠炎的中医病因病机、中医辨证分型、寒热药物并用等方面进行总结,从清上温下、温通并行、平调阴阳3个方面分析其在该病治疗中的运用策略,提示寒热并用是溃疡性结肠炎常见的适宜治疗手段,只要辨证准确即可取得良好疗效。

银黄滴丸制剂提取物抗口腔溃疡的药效学研究

目的:探讨银黄滴丸制剂提取物对金黄色葡萄球菌所致家兔口腔溃疡和化学物质灼伤所致家兔口腔溃疡的药效。方法:分别用金黄色葡萄球菌感染和化学物质苯酚灼伤制备家兔口腔溃模型,溃疡面积大小用内窥镜观察。当模型动物口腔溃疡形成后,对家兔进行银黄滴丸制剂提取物低、中、高三个剂量(分别为78.4,156.8,313.6mg/kg)灌胃治疗,并以栀子金花丸相应剂量(420.43mg/kg)作为阳性对照组,另设空白对照给与相应生理盐水。感染家兔引起口腔溃疡连续灌胃给药3天,化学灼伤家兔连续灌胃给药6天,给药前后用内窥镜拍摄溃疡状态,并制作病理切片。采用单因素方差分析比较治疗组与模型组口腔溃疡面积。结果:银黄滴丸制剂提取物可以促进这两种方法引起的口腔溃疡恢复。与模型组比较,阳性药组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的治愈率均有显著性差异(P<0.05)。结论:银黄滴丸制剂提取物对金黄色葡萄球菌所致家兔口腔溃疡和化学物质灼伤所致家兔口腔溃疡有一定程度的治疗作用。

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养和分化能力鉴定

目的:分离培养大鼠骨髓细胞3代,考察其形态学、标志物及分化功能等生物特性,确定稳定分化能力的大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养方法。方法:取3月龄雌性大鼠,无菌条件下取胫骨、股骨骨髓,采用全骨髓贴壁培养法,以轻度细胞振荡筛选,培养细胞至第3代,显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表面标志物的表达,并通过碱性磷酸酶和矿化结节实验观察细胞的骨向分化能力,油红O染色及半定量实验观察细胞脂向分化的能力。结果与结论:全骨髓贴壁法刚分离的细胞,胞体透亮,大小不一,与周围的红细胞等血系细胞相互混杂,经轻度细胞振荡筛选,传代至第三代,细胞呈均匀分布的纺锤形平均生长,呈典型的漩涡状生长。流式细胞仪检测显示,CD90、CD29阳性表达率分别为96.4%…和78.5%…,而CD45、CD11b/c阳性比率分别为2.0%…和…1.9%。具有诱导碱性磷酸酶水平增加,出现矿化结节和诱导脂质累积的能力。表明全骨髓贴壁法培养的第3代骨髓细胞是具有骨向和脂向分化能力的骨髓间充质干细胞,可用作骨组织修复的种子细胞。

四神丸对慢性结肠炎大鼠结肠组织相关因子表达的影响

目的:探究四神丸对慢性复发型结肠炎大鼠结肠组织超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化酶(MPO)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(i-NOS)表达的影响。方法:参考文献复制慢性复发型SD大鼠结肠炎模型,将60只大鼠随机平均分为正常组、模型组、四神丸高、中、低剂量组和美沙拉嗪对照组。观察大鼠一般情况,进行结肠肉眼下及镜下损伤评分,分别采用考马斯亮蓝法检测总蛋白量、化学比色法检测SOD、MPO、MDA、T-AOC、NO和i-NOS的表达量。结果:与模型组对比,四神丸各组大鼠结肠重量明显减轻,结肠重量指数明显下降,结肠长度增长,同时结肠肉眼下及镜下损伤评分均明显降低,而SOD和T-AOC的活性均显著升高,但MPO、MDA、NO和i-NOS的活性却显著降低。结论:四神丸可能通过恢复结肠黏膜氧化代谢平衡而达到改善或减轻慢性复发型UC大鼠的目的,但是否通过i-NOS/NO途径仍需进一步研究。