前列腺癌细胞的原代和传代培养的研究

目的探讨前列腺癌细胞的培养方法,以便建立前列腺癌细胞系,为前列腺癌的基础研究提供实验模型。方法前列腺腺癌组织来源于我院两例患者的手术标本,分别采用组织块培养法、消化培养法和裸鼠肿瘤移植动物模型法对癌组织细胞进行体外分离培养。培养细胞按恶性肿瘤连续细胞系建系标准进行各项指标检测。结果组织块培养法有一例已稳定传为13代,消化培养法有一例已稳定传为23代,裸鼠肿瘤移植动物模型法未见癌肿生长。结论组织块培养法和消化培养法均为前列腺癌细胞培养的可行方法。

中国人种前列腺癌细胞体外培养建系研究初探

目的 :培养建立中国人种前列腺癌细胞系 ,为了解中国人种前列腺癌细胞生长特性、进一步开展前列腺癌基因诊断和药物筛选建立方便的实验手段和模型打下基础。方法 :取手术切除的前列腺癌组织进行体外细胞培养。结果 :培养 2 4h后癌细胞成对数增殖 ,一周后癌细胞贴壁并稳定生长。结论 :此株细胞具有细胞异型明显、核浆比例倒置、多个核仁、PSA强阳性等前列腺癌细胞特性 ,它的建立对开展前列腺癌的基础及诊断。

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血区血管新生及神经前体细胞增殖的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSC)移植促进大鼠脑缺血后神经功能恢复的可能机制。方法:用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注动物模型,分缺血对照组和移植治疗组(经颈动脉移植体外培养异体MSC)。采用免疫组织化学染色及原位杂交技术观察缺血区脑组织的新生血管、细胞增殖及巢蛋白表达的变化。结果:(1)移植组比对照组缺血区皮层微血管密度(MVD)明显增高,血管内皮生长因子(VEGF)mRNA阳性信号明显增强。(2)缺血区顶叶皮层、尾壳核、室管膜、室管膜下区均可见大量Nestin阳性细胞及BrdU阳性细胞,各时间段移植组两种阳性细胞数均比对照组显著增多。结论:MSC可能通过改善缺血区血运及促进缺血区神经前体细胞再生达到修复缺血区损伤组织,从而改善脑缺血大鼠神经功能。

阿魏酸钠对缺血预处理后大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用(英文)

背景:缺血性脑损伤后,如何减少神经细胞的死亡促进神经功能的恢复?脑缺血预处理在一定程度上可减轻再次缺血导致的缺血性脑损伤。阿魏酸钠亦被证实能减少脑缺血后的神经元凋亡的发生。而阿魏酸钠是否能增强脑缺血预处理的神经保护作用?目的:探讨阿魏酸钠联合缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:江西医学院第二附属医院神经外科,江西医学院生理教研室,江西医学院泌尿外科研究所。材料:实验于2001-05/2002-04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室完成。雄性Wistar大鼠85只,体质量250～300g。方法:大鼠随机分为四组:①非缺血对照组(10只):仅结扎双侧椎动脉而不夹闭双侧颈总动脉。②缺血对照组(25只):结扎双侧椎动脉48h,夹闭颈总动脉10min。③缺血预处理组(25只):结扎双侧椎动脉48h,夹闭颈总动脉2min后24h再次夹闭颈总动脉10min。④阿魏酸钠联合缺血预处理组(25只):缺血预处理后,再次夹闭颈总动脉前30min,尾静脉注射阿魏酸钠(200mg/kg)。非缺血对照组分为再灌注后2,7d二个亚组(各5只);缺血对照组、缺血预处理组及阿魏酸钠联合缺血预处理组又分为再灌注后6,12,24h,2,7d五个亚组(各5只)。各组在相应时点将大鼠断头取脑,于视交叉后2.2mm切取冠状脑片,观察阿魏酸钠联合缺血预处理在脑缺血再灌注时对皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数的影响。主要观察指标:皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数。结果:实验大鼠85只均进入结果分析。①大脑皮层及海马CA1神经元计数:缺血7d时,缺血预处理组和阿魏酸钠+缺血预处理组高于缺血对照组(268±8.5,244±12.5,135±5.6,P<0.01)。②大脑皮层及海马CA1区TUNEL阳性细胞计数:阿魏酸钠+缺血预处理组低于缺血预处理组和缺血对照组(12h:1.2±0.8,15.5±2.1,39.8±3.9;24h:1.8±1.6,39.3±11.8,191.3±19.1;2d:2.8±1.2,68.3±13.6,328.4±24.0,P<0.01);缺血预处理组低于缺血对照组(P<0.01)。结论:缺血预处理可减少缺血区神经元凋亡细胞数,阿魏酸钠联合缺血预处理可以进一步加强此效应,对脑缺血再灌注损伤起保护作用。

自体骨髓细胞移植对大鼠局灶性脑缺血区新生血管形成的作用(英文)

背景:骨髓细胞移植是一种简单而有效的促进新生血管生长的治疗手段。同样新生血管的形成和血液循环的再建立,对于脑缺血区域受损而未死亡神经元的修复以及为植入的组织与细胞的成活和分化提供必要的环境条件均具有重要意义。而自体骨髓细胞移植是否会促进脑缺血区新生血管的形成进行血运重建目前尚不清楚。目的:探讨经颈动脉移植自体骨髓细胞对脑缺血区新生血管形成的影响。设计:以实验动物为研究对象,随机对照的验证性研究。单位:一所大学医院的神经外科和泌尿外科研究所。材料:实验于2002-09/2003-04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室,江西医学院泌尿外科研究所完成。选择雄性SD大鼠10只,体质量250～300g,清洁级。干预:复制局灶性脑缺血大鼠模型,经颈动脉注入自体骨髓细胞。动物随机分为实验组5只,经颈动脉注入自体骨髓细胞,对照组5只注入生理盐水。通过免疫组织化学染色方法进行微血管计数,观察脑缺血区血管增生状况。主要观察指标:微血管密度。F8因子免疫组化染色。结果:自体骨髓细胞移植后大鼠在皮质缺血区的微血管密度为(159.15±40.4)血管数/mm2,明显较对照组大鼠(81.70±32.18)血管数/mm2多,差异有显著性意义(P<0.05)。骨髓细胞移植组皮质缺血区可见很多散在的单个内皮细胞。

人脑神经干细胞对不同储存方式及分离培养和诱导分化条件的要求(英文)

背景:近年来发现神经干细胞可于体外增殖并分化为神经细胞,是用来修复替代损伤神经组织的较为理想的来源,但是神经干细胞的培养中如何提高它的增殖能力,诱导分化成需要的表现型,尚处于研究探讨阶段。目的:探讨细胞冻存和非冻存方法分离培养人脑神经干细胞及诱导其向成熟神经细胞分化的培养条件。设计:以细胞为观察对象,单一样本研究。单位:江西医学院泌尿外科研究所,江西医学院第二附属医院神经外科。材料:实验于2003-12/2004-06在江西医学院泌尿外科研究所完成。取16周龄新鲜人胚脑组织。方法:用胰蛋白酶消化法从人胚脑中分离单个细胞,细胞冻存1个月后复苏或/和新鲜细胞用无血清培养基进行体外培养,碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子刺激细胞生长,用血清诱导其分化;采用免疫荧光细胞化学染色方法检测培养的细胞神经巢蛋白抗原和分化后成熟神经细胞抗原神经元特异性烯醇化酶的表达。观察碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子及血清对分离培养的人脑神经干细胞增殖与分化的影响。主要观察指标:①冻存与新鲜细胞后续培养的生长状况。②细胞形态变化。③神经干细胞标志物神经巢蛋白及成熟神经细胞标志神经元特异性烯醇化酶的鉴定。结果:①从胚龄16周的新鲜人胚脑中成功分离出神经干细胞。人胚脑原代细胞为圆形亮球状,培养3d后可见细胞开始聚集成神经球,部分呈悬浮生长,2周后神经球增大,部分细胞增大数倍,具有极强折光性,可见分裂增殖。经传代后细胞仍保持原有特征,细胞形态不变。克隆细胞在有血清培养基中培养,24h后可见大部分细胞贴壁生长,细胞从神经球游出分散,形态不规则;48h后多数细胞分化为大量形态不一的、分散成片的多突起星状细胞和神经元样细胞,突起相互交织成网。②分离出的神经干细胞在体外培养条件下传代培养,并表达神经干细胞标志巢蛋白;含血清培养基培养48h分化后的细胞主要表达成熟神经细胞标志神经元特异性烯醇化酶。③冻存复苏的细胞95%以上为活细胞,与新鲜细胞比较,细胞生长状况无明显差别。结论:用无血清培养条件下结合碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子的作用,使干细胞体外得到了分离培养、增殖和纯化,证实其方法可行,同时冻存和新鲜细胞的比较,说明可用冻存方法保存人胚脑细胞,复苏后使用。

骨髓间充质干细胞移植后大鼠脑缺血区微血管密度及VEGFmRNA表达的动态变化

目的探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植促进大鼠脑缺血后神经功能恢复的可能机制。方法采用线栓法复制大鼠脑缺血2小时再灌注动物模型,实验动物分缺血对照组和移植治疗组,再灌注24小时后移植治疗组经颈动脉移植体外培养异体骨髓间充质干细胞。于移植后1周、2周、4周、12周分批处死实验动物,采用免疫组织化学染色及原位杂交技术观察缺血区脑组织的新生血管及VEGFmRNA表达的动态变化。结果①大鼠脑缺血后1周时缺血区皮层即可见大量的微血管增生,2周时达到高峰,4周、12周时有所下降。1周、2周、4周、12周时移植组比对照组缺血区皮层微血管密度(MVD)明显增高,P<0.05;②大鼠脑缺血后1周及2周时缺血区脑组织中均可见大量的VEGFmRNA阳性细胞,阳性信号主要分布于皮层及血管周围的神经细胞,缺血后4周及12周对照组VEGFmRNA阳性信号很弱,而移植组VEGFmRNA阳性信号仍较强。结论MSCs可能通过促进微血管增生改善缺血区血运修复缺血区损伤组织,从而改善脑缺血大鼠神经功能。

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注损伤肾组织细胞增殖的影响

目的探讨外源性的骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)对缺血再灌注肾损伤的肾组织细胞增殖的影响。方法取SD雄性大鼠胫、股骨骨髓,percoll密度梯度分离法分离骨髓MSCs。32只雌性SD大鼠复制缺血再灌注肾损伤的模型,随机分为两个组:移植组和对照组。移植组经下腔静脉移植骨髓MSCs,对照组给予等量生理盐水,分别于1天、2天、3天、4天处死大鼠,两组大鼠每天均经腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶(bromodeoxyuridine,BrdU)。留取肾组织采用免疫组织化学染色方法检测BrdU阳性细胞在肾组织内的分布情况。结果在缺血再灌注后的第二天,移植组和对照组都有表达BrdU阳性细胞,并随时间延长BrdU阳性细胞个数逐渐增多,但移植组BrdU阳性细胞明显高于对照组,两者有统计学意义(P值<0.05)。结论移植的外源性骨髓MSCs能够促进损伤肾脏的细胞增殖,参与肾损伤的修复。

人前列腺干细胞的分离培养

目的 探讨人前列腺干细胞的分离方法并初步鉴定其特性。方法 以器官捐献者的正常前列腺为研究对象 ,利用免疫磁珠细胞分离和胶原快速粘附方法 ,从前列腺基底细胞中分离前列腺干细胞 ,研究其克隆形成和分化特性。结果 从正常人前列腺内分离得到的细胞 ,能快速粘附胶原 ,克隆形成率明显高于未粘附的前列腺基底细胞 ,而且形成的克隆维持时间较长。结论 人前列腺基底细胞中存在极少量的具有高度增殖能力的一群细胞 ,它们具有干细胞的特征 ,但有待于进一步研究鉴定。

联合脏器移植的临床疗效观察

目的总结胰-肾和肝-肾联合移植术的临床经验。方法1例糖尿病合并尿毒症的患者行经门静脉-小肠引流的胰-肾联合移植术;1例肝炎后肝硬化合并尿毒症的病人施行肝-肾联合移植术。术后均采用普乐可复、霉酚酸酯和激素的三联免疫抑制剂治疗,观察其临床疗效。结果2例患者术后转氨酶、尿素氮和肌酐恢复正常。胰-肾联合移植患者术后停用外源性胰岛素,血糖、C肽恢复正常。随访12～18个月移植物功能良好。结论联合脏器移植是治疗多器官功能衰竭的有效手段,能提高患者的生活质量,恢复正常的生活和工作。

射频治疗前列腺增生症的护理

前列腺增生症是以排尿困难为主要临床症状的男性老年人常见病,它是威胁男性老年人身体健康和生活质量的一个重要因素。目前还没有一种能达到满意疗效的药物,手术治疗有较多的并发症,特别是合并有心肺功能不全等疾病的老年患者不愿或不宜行手术治疗。我院1992年11～12月采用Thermex—Ⅱ型射频热疗仪治疗前列腺增生症110例取得较好效果,现将护理体会介绍如下:

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注肾损伤的保护作用

目的探讨外源性骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对缺血再灌注肾损伤的可能保护作用。方法取SD雄性大鼠骨髓,梯度离心法分离MSCs,采用4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记。32只雌性SD大鼠建立缺血再灌注肾损伤模型后随机分为移植组和对照组,移植组于缺血45min后经下腔静脉注入用DAPI标记的MSCs,对照组注入等量生理盐水。术后每天经腹腔注射5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU),并分别于术后1、2、3、4d处死大鼠,留取血标本,观察血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平。留取肾组织,荧光显微镜及免疫组化染色方法观察移植MSCs在肾组织中的分布及肾细胞增殖状况,并采用蓖麻血凝素(RCA)对迁移入肾脏的MSCs分化状况进行鉴定。结果术后第1、2天,移植组大鼠血清BUN水平(31.93±1.49、19.58±1.58mmol/L)明显低于对照组(41.03±2.14、26.45±1.74mmol/L,P<0.05);第3、4天2组间BUN水平差异无统计学意义(P>0.05);第1、2、3天移植组大鼠血清Cr水平(77.47±4.77、57.45±2.41、44.93±3.97μmol/L)均显著低于对照组(102.37±3.59、67.50±2.92、53.25±2.73μmol/L),差异有统计学意义(P<0.05)。细胞增殖状况:术后第1天偶见BrdU阳性细胞,第2天2组大鼠肾组织中均可见较多BrdU阳性细胞,并随时间延长阳性细胞逐渐增多,且移植组阳性细胞数(33.71±8.50、57.60±4.88、116.29±6.99)明显多于对照组(19.67±5.20、26.88±5.89、71.71±8.44),差异有统计学意义(P<0.05)。移植组术后第3天肾组织内可见DAPI标记细胞,第4天DAPI标记细胞明显增多,且多数标记细胞能结合RCA。结论移植的外源性骨髓MSCs能够迁移、定居于缺血再灌注损伤后的肾组织中并分化为肾小管上皮细胞;MSCs移植可促进损伤肾组织的细胞再生,对缺血再灌注肾损伤具有一定的保护作用。

骨髓基质细胞移植对大鼠局灶性脑缺血区血运重建的作用

作为较理想的细胞移植治疗的种子细胞来源,骨髓基质细胞(BMSC)日益受到重视.有研究证实给大鼠心肌缺血区进行自体骨髓细胞移植能促进新生血管的形成[1].本研究初步观察了经颈动脉移植的BMSC在脑缺血区中的分布及对缺血区新生血管形成的影响.

缺血预处理后Fas蛋白表达与迟发性神经元凋亡的关系初步探讨

目的动态观察缺血预处理后大鼠大脑皮层和海马CA1区神经元凋亡与Fas蛋白表达变化情况,初步探讨缺血预处理后Fas蛋白表达与迟发性神经元凋亡的关系。方法四血管阻断法复制全脑缺血模型,动物随机分为非缺血对照组、预处理对照组、缺血预处理组和缺血组。采用尼氏和TUNEL染色法观察皮层及海马CA1区神经元存活数和凋亡细胞数,免疫组化方法检测Fas蛋白在缺血预处理后表达变化情况。结果缺血组缺血6h在皮质及海马CA1区Fas阳性表达细胞计数升高,12h达高峰;缺血预处理组缺血12h阳性细胞计数升高,24h达高峰。缺血组缺血6h出现凋亡细胞,48h凋亡细胞数达到高峰;缺血预处理组凋亡细胞数较缺血组明显减少。缺血组缺血7d神经元数明显减少,12周时神经元大量减少;缺血预处理组缺血7d时神经元数无明显变化,但12周时神经元同样大量减少。结论全脑缺血可能通过诱导Fas蛋白的表达增多,启动细胞凋亡,导致缺血后神经元凋亡的发生;缺血预处理虽可延缓缺血后神经元的凋亡,但无法提供真正的长时期的神经元保护作用,其有限的保护作用可能是通过延缓Fas蛋白的表达而减缓了神经元凋亡的进程。

氯化镧对脑缺血后神经细胞凋亡的保护作用

脑缺血再灌注引起的细胞死亡有坏死和凋亡两种形式,在短暂脑缺血再灌注损伤的缺血半暗带区,细胞主要以凋亡的形式死亡.为探索有效的神经细胞保护剂,本实验观察了稀土化合物氯化镧(LaCl3)对脑缺血后神经细胞凋亡的影响.