人表皮干细胞的体外分离与培养

目的探索人表皮干细胞(ep iderm a l stem ce lls,ESC s)的分离方法和培养体系。方法用Ⅳ型胶原纯化、富集ESC s,将黏附细胞(实验组)和未黏附细胞(对照组)分别接种在Ⅳ型胶原基质(实验组为A1,对照组为A2)和3T 3细胞滋养层(实验照组为B1,对照组为B2),培养体系为:低糖无钙DM EM培养基(添加10%胎牛血清、表皮生长因子10μg/L、氯化钙0.05 mm o l/L、氢化可的松0.8 m g/L),观察细胞能否呈克隆状生长,用流式细胞仪和免疫细胞化学染色,对ECSs周期和表型进行分析。结果实验组细胞呈克隆状生长,G0/G1期细胞和α6briCD71d im细胞百分率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),实验组角蛋白19免疫细胞化学染色呈阳性,对照组呈阴性。结论人ESC s可通过Ⅳ型胶原快速黏附分选,并可在适当的培养体系里扩增。

利用胶原海绵膜构建人工真皮的研究

目的 :探讨利用胶原海绵膜构建人工真皮的可行性 .方法 :从大鼠鼠尾肌腱中提取胶原 .胶原和 6 -硫酸软骨素冷冻干燥 ,重度脱水及戊二醛交联后制得胶原海绵膜 .将其行扫描电镜观察 ;并埋藏在Balb/c小鼠皮下 ,术后定期取出观察组织学变化 .将成纤维细胞种植于该支架上 .结果 :构建的支架孔径均匀 ,孔径在 5 0～ 10 0um .具有良好的组织相容性 ,并逐渐降解 .成纤维细胞于其上生长良好 .结论 :该支架适合成纤维细胞生长 ,可作为组织工程皮肤的支架 .

人肺腺癌多药耐药细胞系的建立

目的 :体外建立人肺腺癌多药耐药细胞系。方法 :以泰素为诱导药 ,人肺腺癌细胞系SPC -A1为诱导对象 ,逐步增加泰素浓度冲击 ,以一定浓度的泰素维持培养共计 2 4周后 ,光镜观察细胞形态 ,用MTS方法进行细胞耐药检测。结果 :SPC A1/TAX形态不规则 ,对阿霉素、长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5 氟脲嘧啶、泰素 (紫杉醇 )六种抗癌药物有不同程度的耐药性。结论 :建立了相对稳定多药耐药细胞系SPC A1/TAX 。

NF-κB信号转导通路对细胞周期的调控

核转录因子NF-κB是哺乳动物Rel蛋白家族成员,属DNA结合蛋白,具有结合某些基因启动子κB序列并启动靶基因转录的功能。静息状态下,NF-κB二聚体在胞浆内没有活性,当细胞受刺激后,它在NF-κB信号转导通路的上游激酶级联作用下被激活,并易位到细胞核内,增强靶基因表达。NF-κB是细胞分裂和生存的关键调节因子,参与调控细胞周期、细胞增殖和细胞分化。现就NF-κB对细胞周期的影响作一综述,着重阐述NF-κB通过细胞周期蛋白和CDK／CKI作用G1／S期检测点、G2／M期检测点,调控细胞周期进程。

人类p73基因TAp73αcDNA片段克隆及鉴定

目的 构建真核表达重组质粒pcDNA3 1+ /TAp73αcDNA ,克隆包含人类 p73基因TAp73α转录本蛋白编码区的cDNA片段。方法 采用RT PCR方法获取TAp73αcDNA目的片段 ,构建pcDNA3 1+ /TAp73αcDNA重组质粒 ,用构建的重组质粒转化大肠杆菌JM 10 9,通过酶切和测序进行相应的鉴定。 结果 包含人类 p73基因TAp73α转录本蛋白编码区的cDNA片段被成功插入真核表达载体 pcDNA3 1+ 质粒的多克隆位点 ,经鉴定与理论设计完全一致。结论 包含人类 p73基因TAp73α转录本蛋白编码区的cDNA片段已被成功克隆。