14个南丰柑桔品种及品系间的ISSR遗传多样性分析

柑桔是江西省南丰县生物资源中十分有特色的种质资源。本研究利用ISSR分子标记对南丰柑桔品种的遗传多样性进行研究。从100个ISSR引物中筛选出17个多态引物,对14份柑桔样品进行ISSR-PCR分析。结果显示,共扩增出162条DNA条带,其中多态性条带为134条,占82.71%,其片段大小在200～2000bp之间。UPGMA聚类分析结果表明,以遗传相似系数为0.67为分界线,可以将14份供试柑桔样品分成三类:第一类包含以ss-28为代表的7个柑桔品种;第二类包含以杨小2,6为代表的3个柑桔品种第三类包括以早系97-1为代表的4个柑桔品种。本研究结果对于南丰蜜桔的辅助育种或品种(株系)苗木鉴别具有重要的参考价值。

鮰爱德华氏菌灭活疫苗对黄颡鱼免疫效果

为建立一种环境友好型防治黄颡鱼鮰爱德华氏菌病的方法,利用从患病黄颡鱼脑部组织分离出的致病菌株JXHS制备黄颡鱼鮰爱德华氏菌的灭活疫苗。以平均体重为15~20g的健康黄颡鱼为实验对象,免疫组腹腔注射0.2mL浓度为3.0×109 CFU·mL-1的免疫原,对照组注射等量0.65%灭菌生理盐水,分别在注射7、14、21、28d后随机从两组各取30尾实验鱼,尾静脉采血,检测免疫鱼的血清凝集抗体效价、白细胞吞噬活性(PP)、吞噬指数(PI)、溶菌酶(LSZ)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)等免疫指标的变化。结果表明:鮰爱德华氏菌灭活疫苗对黄颡鱼具有较强的免疫原性,与对照组相比,血清凝集抗体效价在免疫14、21和28d显著升高;PP、PI和LSZ在所有采样时间点均显著上升;LSZ在免疫7、14、21和28d均显著上升;AKP在免疫14、21和28d活力显著上升;ACP在免疫7、14和21d活力显著上升。血清凝集抗体效价、PP、PI、LSZ和AKP均在21d达到峰值,而ACP在免疫7d后达到峰值。免疫30d后鮰爱德华氏菌攻毒结果表明,鮰爱德华氏菌灭活疫苗对黄颡鱼有较高的免疫保护作用,免疫保护率达到70.2%。由此可见,利用从病鱼体内分离的鮰爱德华氏菌菌株制备的灭活疫苗可提高黄颡鱼的免疫力并有效抵御鮰爱德华氏菌的攻击。

注射草鱼出血病疫苗对草鱼3种血清蛋白指标的影响

注射草鱼出血病疫苗已被生产实践证明是防治草鱼出血病的有效手段。分别用南海所(NH组)、珠江所(ZJ组)及汕头所(ST组)研制的3种草鱼出血病疫苗对草鱼背部肌肉进行免疫注射,并采用双抗体夹心法,测定接种后7、14、28、60及90 d鱼体血清中免疫球蛋白M(IgM)、补体3(C3)及溶菌酶浓度,以未经注射的草鱼作为对照组。结果显示,3个免疫组的鱼体血清IgM浓度峰值皆出现于注射后28 d,以ZJ组为最高;3组鱼体血清C3浓度与溶菌酶活力峰值皆出现于接种后7 d,并显著高于对照组。结果表明,注射3种草鱼出血病疫苗,可以在一定时间内提高鱼体血清中的特异性与非特异性免疫学指标,从而增强鱼体的免疫保护力。

草鱼幼鱼肝胰脏抗氧化系统对MC-LR胁迫的响应

为了研究微囊藻毒素(MC-LR)对草鱼(Ctenopharygodon idella)幼鱼肝胰脏抗氧化防御系统的影响,本研究通过腹腔注射的方法(剂量为25、100μg MC-LR·kg-1,分别称为低剂量和高剂量),对草鱼幼鱼进行染毒,于胁迫24、48 h和72 h后分离其肝胰脏,随后采用分光光度法检测了草鱼幼鱼肝胰脏中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;同时采用荧光定量PCR方法分析了SOD、CAT、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和谷胱甘肽还原酶(GR)基因相对表达量的变化。结果显示:高剂量MC-LR诱导24 h和48 h后,草鱼幼鱼肝胰脏SOD活性显著增加(P<0.05),而SOD在低剂量组中活性没有显著变化(P>0.05);低剂量MC-LR对CAT活性没有显著影响(P>0.05),而高剂量MC-LR诱导24 h后可使草鱼幼鱼肝胰脏CAT活性显著增加(P<0.05),随后其活性又下降,但差异不显著(P>0.05)。在MC-LR胁迫过程中,SOD、CAT、GPx基因表达在两个剂量组中均显著低于对照组(P<0.05),而GR基因在低剂量MC-LR胁迫24 h后相对表达量显著上调(P<0.05),尽管在72 h相对表达量上调,但差异不显著(P>0.05),而高剂量组中GR基因在胁迫24 h和48 h后,其表达量被抑制,但不存在显著差异(P>0.05)。进行抗氧化酶活性和基因表达相关性分析发现,SOD和CAT酶活性与SOD和CAT基因表达不相关。上述研究表明MC-LR对草鱼幼鱼肝胰脏抗氧化系统产生了明显的胁迫效应,但MC-LR对机体抗氧化酶活性与基因编码调控之间的相互作用机制还有待更深入的研究。

黄颡鱼“裂头病”病原二重PCR检测方法的建立及应用

"裂头病"是黄颡鱼养殖业的主要病害之一,其病原为鮰爱德华氏菌或迟钝爱德华氏菌。以GenBank所收录鮰爱德华氏菌与迟钝爱德华氏菌16S rRNA基因为模板,优化设计两对特异性引物,经多重PCR反应体系优化及特异性与敏感性检测,建立了检测鮰爱德华氏菌和迟钝爱德华氏菌的二重PCR检测方法。结果显示,阳性对照样品的琼脂糖凝胶电泳条带同时检测到鮰爱德华氏菌和迟钝爱德华氏菌,扩增产物大小分别为470 bp及268 bp,灵敏度为1.38 ng/μL。此法用于检测江西南昌地区多个养殖场所患"裂头病"黄颡鱼脑部DNA,11份患病黄颡鱼的脑部组织均检出鮰爱德华氏菌,表明该地区黄颡鱼所患"裂头病"的病原菌为鮰爱德华氏菌,此结果与常规细菌分离鉴定的检测结果一致。所建二重PCR检测法敏感度高,特异性强,检测成本低,对黄颡鱼"裂头病"的快速诊断与流行病学调查有较好的应用价值。

MC-LR急性胁迫对草鱼脾脏、头肾显微结构及BAFF和APRIL基因表达的影响

为探讨微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)对鱼类的免疫毒性,采用急性毒性实验方法,分别对草鱼经腹腔注射不同剂量的MC-LR并于24、48、72 h和96 h后取免疫器官脾脏和头肾进行组织显微结构分析。结果显示,随着MC-LR剂量的增加和时间的延长,脾脏组织呈现出细胞空泡化并伴随着黑色素巨噬细胞先增多后减少的现象,尤其在75μg MC-LR·kg^(-1)BW和100μg MC-LR·kg^(-1)BW剂量组染毒48 h后,黑色素巨噬细胞中心体积显著增大;头肾组织显微结构变化主要表现为血窦、血管扩张,在75μg MC-LR·kg^(-1)BW和100μg MC-LR·kg^(-1)BW剂量组中的草鱼染毒72 h和96 h后,淋巴组织松散、排列混乱,淋巴细胞空泡化甚至细胞裂解。此外,采用荧光定量PCR分析了草鱼经不同剂量MC-LR处理96 h后脾脏和头肾中BAFF和APRIL基因表达的变化。结果显示BAFF和APRIL的表达均被不同程度地抑制,其中脾脏组织中BAFF基因在75μg MC-LR·kg^(-1)BW剂量组中被显著抑制(P<0.05),头肾组织BAFF基因在75、100μg MC-LR·kg^(-1)BW剂量组中均被显著抑制(P<0.05),而APRIL除了在25μg MC-LR·kg^(-1)BW剂量组的脾脏组织中表达下调不显著外,在其他处理组均被显著抑制(P<0.05)。以上研究结果表明,MC-LR可导致草鱼免疫器官一系列的病理变化,并有时间和剂量效应,此外,MC-LR还可抑制B淋巴细胞分裂相关基因的表达。

Gd_2(CO_3)_3∶Eu@SiO_2@APTES磁性-荧光双功能核壳微球的制备与性能

采用尿素均相沉淀法和St觟ber法制备了氨基化Si O2修饰的Gd2（CO3）3∶Eu顺磁性-荧光双功能微球。用扫描电镜（SEM）、红外光谱（IR）、X-射线粉末衍射（XRD）等测试手段对微球的结构和颗粒特征进行了分析。结果表明：微球为核壳结构,其Gd2（CO3）3∶Eu核平均直径为150 nm左右,Si O2壳层的厚度大约为30 nm,分散性良好。磁性测试显示微球拥有良好的顺磁性,荧光光谱表明,在396 nm紫外光激发下,微球在613 nm发射较强荧光,属于Eu3＋的特征发射,同时微球能成功标记NCIH460肺癌细胞,MTT毒性测试表明该法制备的双功能微球在100～400μg·m L-1的浓度范围内无毒,表明其在生物应用方面的潜在应用价值。

黄颡鱼PGRP-L基因克隆及其对爱德华氏菌的反应(英文)

为了研究肽聚糖识别蛋白家族(Peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)在黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)先天免疫应答中发挥的作用,根据NCBI中斑马鱼(Danio rerio)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)PGRP-L的基因信息,采用简并引物和RACE方法从黄颡鱼肝脏中克隆得到了一个长型PGRP(Pf PGRP-L)基因.Pf PGRP-L基因的全长c DNA序列大小为1617 bp,其中5′和3′非翻译区的长度分别为135和72 bp,开放阅读框为1410 bp,编码469个氨基酸.同源性和系统进化分析表明,黄颡鱼PGRP-L与虹鳟的同源性为60%,与脊椎动物的PGLYRP2或PGRP-L聚在一起.半定量RT-PCR分析发现Pf PGRP-L基因在黄颡鱼鳃、胸腺、肝脏、脾脏、肠道、肾脏、头肾、心脏、血液和肌肉组织中均有分布,但在肠道和脾脏中的表达量较为丰富,而在肌肉和血液中表达则很少.用爱德华氏菌刺激后,Pf PGRP-L在肝脏、脾脏、肠道及头肾中的表达明显上调.结果表明,Pf PGRP-L在黄颡鱼抵抗病原菌中具有重要作用.

爱德华氏菌灭活疫苗对黄颡鱼免疫相关基因表达及过氧化氢酶、超氧化歧化酶和补体C3活性的影响

为评价爱德华氏菌灭活疫苗对黄颡鱼的免疫效果,分析了灭活爱德华氏菌疫苗对黄颡鱼非特异性免疫应答相关的免疫基因表达和酶活性的影响。结果显示,黄颡鱼鳃组织中抗菌肽基因和肝组织中长型肽聚糖识别蛋白基因在免疫7、14、21、28d后的表达均显著上调,肠道中抗菌肽基因和脾脏组织中长型肽聚糖识别蛋白基因的表达在免疫7、14、21d亦显著上升。血清中过氧化氢酶、超氧化歧化酶和补体C3活性出现不同程度的提高,其中,黄颡鱼过氧化氢酶活力在免疫14、21d后显著高于对照组,超氧化歧化酶活力在免疫14、21、28d后显著高于对照组,在21d达到峰值,补体C3在免疫7、14、21、28d后均显著上升(P<0.05),在免疫7d后血清中补体C3的含量达到高峰。试验结果表明,爱德华氏菌灭活疫苗可显著提高黄颡鱼免疫基因抗菌肽和长型肽聚糖识别蛋白的表达以及酶的活性,进一步揭示爱德华氏菌灭活疫苗可提高黄颡鱼的非特异性免疫能力。

荧光/顺磁性双功能CS/GdPO_4∶Tb微球的制备及性质

用喷雾干燥法将GdPO4∶Tb纳米棒包裹在壳聚糖(CS)微球中,成功地制备了一种新颖的CS/GdPO4∶Tb复合物微球。利用X射线衍射仪(XRD)、傅立叶红外光谱仪(FT-IR)、场发射扫描电子显微镜(SEM)、透射电镜(TEM)等检测手段表征了产物的形貌和结构特征。分析表明,CS/GdPO4∶Tb微球呈鸟巢状,表面粗糙,其粒径约为5μm,其形貌与相同条件下得到的纯壳聚糖微球显著不同,这主要是由于GdPO4∶Tb纳米棒的骨架作用。磁性和荧光光谱的研究表明,该复合物同时具有良好的荧光性能和顺磁性,使其在生物医学领域具有潜在应用能力。

黄颡鱼长型肽聚糖识别蛋白(pfPGRP-L)原核表达和多克隆抗体的制备

为进一步研究肽聚糖识别蛋白(peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)在先天性免疫应答中的生物学功能,在前期克隆黄颡鱼长型肽聚糖识别蛋白(pfPGRP-L)c DNA全长的基础上,根据pfPGRP-L基因中高亲水性区域序列设计特异性引物扩增出编码序列,将该基因片段克隆到p GEX-4T-1质粒,构建重组表达载体。SDS-PAGE电泳检测该目的蛋白大小约为51 ku,与理论值大小符合,回收蛋白并纯化,与弗氏佐剂等量混合后注射新西兰大白兔制备多克隆抗体,用ELISA和Western blotting分别检测该抗体,结果显示:抗体效价可达1∶256 000,且有特异性条带,表明pfPGRP-L的多克隆抗体制备成功。此外,Western blotting检测黄颡鱼不同组织pfPGRP-L蛋白的表达,发现在鳃、胸腺、肝脏、肾脏、头肾、脾脏、血液和肠道等不同组织中都有目的条带,而在脾脏和肠道中表达更强。为pfPGRP-L的抗菌作用和功能研究奠定基础。

Gd_(2)O_(3):Eu@mSiO_(2)核壳双功能纳米棒的制备及性质

通过水热法和正硅酸乙酯水解法制备了一种新颖的Gd2O3:Eu@mSiO2核壳双功能(荧光和介孔)纳米棒。用扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)、X射线粉末衍射(XRD)、红外光谱(FTIR)等多种测试手段对样品的形貌、物相结构进行分析表征。结果表明,该核壳结构纳米材料以Gd2O3:Eu纳米棒(长~400 nm,直径~100 nm)为核,介孔SiO2为壳,尺寸均匀,分散性良好。荧光光谱表明,在紫外光激发下,核壳纳米棒发射强烈的橙红色荧光。同时该核壳纳米棒能成功标记NCI-H460肺癌细胞。以布洛芬(IBU)为药物模型研究核壳纳米棒的药物负载和释放行为,结果表明,Gd2O3:Eu@mSiO2核壳纳米棒对IBU的负载量可达10.25%,而且其具有明显的缓释效果。IBU负载的样品(IBU-Gd2O3:Eu3+@mSiO2)在紫外光照射下仍呈现Eu3+的橙红色发光,且Eu3+在载药系统中的发光强度随IBU释放量的变化而变化,因此通过发光强度的变化可以跟踪和监测药物及其释放情况。

氟马西尼注射液过敏性、溶血性和局部刺激性实验研究

目的评价氟马西尼注射液的安全性。方法采用豚鼠全身用药的过敏试验、被动皮肤过敏试验、溶血试验、局部血管刺激性试验、肌肉刺激性试验考察氟马西尼注射液的安全性。结果氟马西尼注射液全身用药的过敏试验,被动皮肤过敏试验,溶血试验、局部血管刺激性试验及肌肉刺激性试验均符合要求。结论氟马西尼注射液的动物实验结果表明其安全可靠。

草鱼自噬相关基因Beclin1的克隆及其在MC-LR胁迫下的表达特征

为评估微囊藻毒素-LR (MC-LR)对鱼类自噬的影响,根据转录组测序结果得到的EST序列,采用RACE技术获得了草鱼(Ctenopharygodon idella)自噬基因Beclin1 (CiBeclin1)的cDNA全长序列。该基因序列全长1590 bp,包括1344 bp的开放阅读框,编码447个氨基酸,分子量为51.2 kD,理论等电点为4.88。CiBeclin1包含1个BH3和1个ECD结构域。CiBeclin1氨基酸序列与其他物种的相似性为88%—98%,构建的进化树显示CiBeclin1与稀有鲫(Gobiocypris rarus)的Beclin1亲缘关系最近。实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测结果表明, CiBeclin1在肝、肾、脾等10种不同组织中均广泛表达,但在肝脏组织中的相对表达量最丰富,显著高于相对表达量最低的头肾组织(P<0.05)。在不同剂量(25和100μg MC-LR/kg BW) MC-LR胁迫24h、48h、72h和96h后,草鱼肝脏中CiBeclin1表达量均显著低于对照组的表达水平,研究结果表明, MC-LR能抑制草鱼CiBeclin1的表达,但MC-LR是否在该剂量下诱导了草鱼的自噬还有待于进一步研究。

麻蝇胞浆全蛋白质提取与纯化研究

使用醇提、水提、盐提、碱提获得麻蝇胞浆全蛋白,电泳结果蛋白条带清晰,蛋白含量较高,蛋白质大小位于10～82kD。该方法适合于麻蝇胞浆蛋白质组学研究中纯化总蛋白质,通过家蝇幼虫蛋白质提取过程的研究,为其它昆虫或动物蛋白提取提供了一个可行的实验依据。