发光法分析莪术油等中药对肝、胃癌细胞增殖活性抑制作用的实验研究

目的:探讨抗癌中药莪术油、华蟾素、龙葵碱与肝癌细胞株SMMC7721、胃癌细胞株NKM45增殖活性的抑制作用。方法:应用生物发光法(BLA法)测定莪术油、华蟾素和龙葵碱与SMMC7721、NKM45作用后的ATP含量,并与5-氟脲嘧啶(5-FU)的作用进行比较,分析莪术油对NKM45生长曲线的影响。结果:莪术油等三种中药与SMMC7721、NKM45作用后的ATP含量明显下降(P<0.05～P<0.01);与5-FU作用后的ATP含量比较,无明显差异(P>0.05)。莪术油对NKM45的存活率有明显的抑制作用。结论:莪术油等中药能够抑制SMMC7721、NKM45细胞的增殖活性。BLA法可广泛应用于抗肿瘤药物的筛选。

两种检测方法对地塞米松诱导小鼠淋巴细胞凋亡的观察

目的探讨地塞米松体外诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡的实验方法,为进一步研究淋巴细胞凋亡对机体免疫调节作用机理及其临床应用提供实验依据。方法取昆明小鼠,分离其脾脏淋巴细胞制成单细胞悬液,实验组加入地塞米松(DEX)使终浓度为10-5mol/L,培养24 h后,采用瑞氏染色法光镜下观察凋亡细胞形态,用凝胶电泳法观察其DNA ladder;同时设立不加DEX的对照组及新鲜淋巴细胞对照组。结果光镜观察,淋巴细胞在DEX作用下,可见典型的凋亡形态特征变化,主要表现为细胞核边聚、浓缩,以“齿轮状”细胞改变多见;DNA凝胶电泳图谱呈现典型的凋亡DNA ladder,两种方法结果相符。而未加DEX对照组凋亡细胞明显偏少,新鲜淋巴细胞对照组未见凋亡改变。结论体外条件下用DEX可高效诱导小鼠脾淋巴细胞凋亡,用瑞氏染色法及DNA凝胶电泳法能准确、快速鉴定凋亡淋巴细胞。

槲皮素对人肝癌细胞耐药株SMMC7721/VCR逆转作用的实验研究

目的探讨槲皮素（Que）对人肝癌细胞耐长春新碱（VCR）耐药株（SMMC7721／VCR）逆转作用的影响。方法应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析Que对人肝癌细胞敏感株（SMMC7721／S）、耐药株（SMMC7721／VCR）的抑制作用；Que与VCR联合作用时，SMMC7721／S对VCR的增敏作用及对SMMC7721／VCR耐药性的逆转作用。结果SMMC7721／S、SMMC7721／VCR对VCR的IC50值分别为（1．16±0．06）mg／L和（13．28±0．35）mg／L。SMMC7721／VCR对VCR耐药倍数为11．45倍。Que对两细胞株的生长有明显的抑制作用。25．0～50．0μmol／L终浓度的Que在体外能够明显提高SMMC7721／VCR对VCR的敏感性。结论Que能够部分逆转SMMC7721／VCR细胞的耐药性。它可作为有效的多药耐药逆转剂，与其它化疗药物联合应用于肿瘤的化学治疗。

支气管哮喘患者血清sIL-2R、IL-4水平检测及其意义

目的 观察支气管哮喘患者血清可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R)、白细胞介素 4 (IL 4 )水平。方法 用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测 18例轻、中度哮喘患者和 18例健康对照组血清sIL 2R、IL 4水平 ,并进行相关性研究。结果 哮喘患者血清sIL 2R( 30 3.95± 5 1.82U/ml)及IL 4 ( 14 1.11± 133.93pg/ml)水平明显高于正常对照组 ( 2 10 .6 4± 4 8.6 0U/ml和 6 0 .0 6± 2 1.6 7pg/ml;P <0 .0 1和P <0 .0 5 ) ,两者呈正相关趋势 (r =0 .883)。 结论 sIL 2R ,IL 4升高是哮喘过敏性炎症的表现 ,T淋巴细胞激活及其释放的IL 4在哮喘发病中起重要作用。

用白细胞粘附抑制法鉴定HBV-TF特异免疫活性

选用白细胞粘附抑制试验来鉴定乙肝特异性转移因子(HBV-TF)免疫活性。实验结果表明:经HBV-TF致敏的淋巴细胞与乙肝抗原(HBV-Ag)孵育后,显示出明显的粘附抑制活性,而非特异性转移因子(TFn)致敏淋巴细胞与乙肝抗原孵育、HBV-TF致敏淋巴细胞与甲肝抗原(HAV-Ag)孵育或HBV-TF致敏淋巴细胞与1640液(代替抗原液)孵育时均不能表现出这种抑制作用,说明HBV-TF具有抗原特异性免疫活性。实验证明,本法是体外鉴定HBV-TF免疫活性简便易行的方法。

莪术油、华蟾素和5-氟脲嘧啶对肝癌细胞化学发光的影响

目的探讨抗癌中药莪术油、华蟾素及化疗药物5-氟脲嘧啶(5-FU)对肝癌细胞化学发光(Chemilumines-cence,CL)的影响。方法应用鲁米诺(Luminol)增强的CL法检测人肝癌细胞株(SMMC7721)与莪术油、华蟾素、5-FU作用48h后的肝癌细胞CL,分析瘤细胞存活率与肝癌细胞CL强度的相关性。结果与对照组比较,莪术油组、华蟾素组、5-FU组峰值均明显下降(P均<0.01),峰时延长(P<0.01,P<0.05)。瘤细胞存活率与肝癌细胞CL强度呈正相关(r=0.853,P<0.01)。结论莪术油、华蟾素及5-FU能够明显抑制肝癌细胞CL。研究肿瘤细胞的CL,可为筛选敏感的抗瘤药物提供实验依据。

口服转移因子对化疗损伤小鼠免疫功能的恢复

目的 :研究猪脾转移因子 (TF)口服途径给药对化疗损伤小鼠免疫功能恢复的作用。方法 :用环磷酰胺 (CP) 75mg/kg连续 8d给予小鼠皮下注射 ,造成免疫功能低下模型 ,同时配以口服TF 1mg/d进行治疗 (设立CP对照组 ,TF注射对照组及正常对照组 ) ,在治疗后第 8d ,分别称各组小鼠体重及脾脏 ,计算脾重指数 ,并进行外周血中性白细胞计数和用MTT法测定鼠脾淋巴细胞转化刺激指数。结果 :TF口服组体重、脾重指数 ,中性白细胞和淋巴细胞转化刺激指数多项观察指标均明显高于CP对照组 (P <0 .0 1或P <0 .0 5 ) ,与TF注射对照组比较 ,作用效果相近 (P >0 .0 5 )。结论 :口服TF能促进化疗引起的小鼠免疫功能低下的恢复 ,为其应用于临床治疗免疫功能降低性疾病提供实验依据。

改进的瑞氏染色法对人与小鼠淋巴细胞自发凋亡形态的鉴定及其意义

目的以人和小鼠淋巴细胞为研究对象，建立一种在光学显微镜下快速而特异识别凋亡淋巴细胞的染色方法，为淋巴细胞凋亡的研究提供一种简便易行的实验方法。方法收集人或小鼠淋巴细胞制成细胞涂片，晾干，滴加瑞氏染液染1min，再于瑞氏染液上滴加等量的PBS，混匀，染1～2min，水洗晾干后用中性树胶封片，镜检。实验设立实验组（经体外培养的淋巴细胞）和对照组（未经体外培养的新鲜淋巴细胞），动态观察体外淋巴细胞自发凋亡情况。结果人和小鼠淋巴细胞形态基本相似，实验组可见不同程度的细胞凋亡，光镜下细胞呈典型凋亡特征改变：凋亡早期细胞形态不规则，体积变大，然后核染色质边聚、浓缩、细胞核固缩呈半球形、环形、月牙形等，继而细胞裂解成细胞质膜包绕的核碎片，即形成凋亡小体，凋亡细胞体积缩小，而对照组的凋亡细胞偶见。与人淋巴细胞相比较，小鼠淋巴细胞更易发生凋亡。结论本法将瑞氏染色法进行改进，省去了甲醇固定细胞步骤及调整了染色条件等，对淋巴细胞进行染色，在光学显微镜下识别凋亡细胞，具有特异性高，染色方法简便、快速，成本低廉等优点，易于在实验研究和临床推广应用。

南昌地区淋球菌对抗生素的耐药性及质粒谱分析

目的了解南昌地区淋病患者感染的淋球菌对抗生素的耐药状况,探讨质粒在介导淋球菌耐药中的作用。方法采用纸片法分析69株淋球菌对头孢噻肟,头孢曲松、头孢他啶、青霉素、壮观霉素、环丙沙星的敏感性;头孢硝基噻吩显色法测定β-内酰胺酶;碱裂解法提取淋球菌菌株质粒,琼脂糖凝胶电泳法分析质粒谱型。结果对青霉素、环丙沙星、壮观霉素耐药的菌株分别为39株(39/69,56.52%)、67株(67/69,97.10%)、1株(1/69,1.45%),头孢噻肟,头孢曲松,头孢他啶未发现耐药株。β-内酰胺酶阳性菌株为35株(35/69,50.72%)。检出质粒菌株37株(37/69,53.62%),质粒谱型共5型,以39.5 Kb和39.5 Kb+42.5 Kb型为主。结论青霉素、环丙沙星的耐药率较高,在本地区已不适宜作为治疗淋病的药物,头孢噻肟,头孢曲松,头孢他啶的敏感性较高,可作为本地区治疗淋病的首选药物,壮观霉素已出现耐药株应引起重视。质粒的介导在淋球菌耐药性的形成中起着重要的作用。