清热解毒加减方联合抗生素在慢性子宫内膜炎致不孕症患者中的应用效果

目的探讨清热解毒加减方改善慢性子宫内膜炎(CE)致不孕症患者妊娠结局的作用。方法选取2020年10月至2021年10月于江西省妇幼保健院门诊就诊的265例CE致不孕症患者作为研究对象,根据治疗方式分为研究组(93例)和对照组(172例)。研究组采用清热解毒加减方联合抗生素治疗,对照组采用常规抗生素治疗。比较两组患者的一般情况(年龄、不孕类型、不孕年限、体质量指数、种植日内膜厚度和移植胚胎数等),以及治疗结束后宫腔镜复查情况、组织病理学检查结果和妊娠结局(胚胎种植率、临床妊娠率和不良妊娠率)。结果研究组的白细胞分化抗原(CD)138和CD38转阴率、胚胎种植率、临床妊娠率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组的不良妊娠率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论清热解毒加减方联合抗生素治疗能够改善CE患者的宫腔环境和妊娠结局,其效果较单独使用抗生素更佳。

子宫内膜间充质干细胞在子宫内膜异位症相关性不孕症中的研究进展

子宫内膜异位症相关性不孕症,占继发性不孕的20%~30%,不仅改变了患者子宫和腹腔生理结构,也严重降低了子宫内膜容受性。子宫内膜间充质干细胞是近年来内异症相关性不孕症研究的热点,其能够通过细胞接触、炎症反应、内分泌异常和激素抵抗等多个途径影响卵泡发育、精卵结合、胚胎运输和植入等过程,从而损害生育能力进而引发不孕。随着子宫内膜间充质干细胞研究的逐步加深,更少的伦理考虑、高增殖、多能性、低免疫原性等特点引起了广泛的关注,未来有望应用于内异症相关性不孕症的诊断及干细胞治疗。

子宫肌瘤患者MED12高频突变对细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的:研究MED12高频突变体对细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及周期的影响,探究MED12突变对于体外细胞功能的作用。方法:外源性转染MED12重组野生型和突变质粒至HEK293T细胞。Western blot法检测MED12蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞法检测细胞凋亡水平。结果:CCK-8法检测发现,与野生型MED12比较,突变型(G44D)能提高HEK293T细胞的增殖能力,差异有统计学意义(P<0.01),但迁移、侵袭能力、凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MED12突变体通过提高细胞增殖,进而促进子宫肌瘤的发病。

14-3-3蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达及意义

目的:研究14-3-3蛋白各亚型mRNA及蛋白在卵巢子宫内膜异位囊肿(ECO)的表达,探讨14-3-3蛋白与ECO发生发展的关系。方法:取ECO患者的异位子宫内膜组织(实验组)和正常子宫内膜组织(对照组)标本各30例。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组中14-3-3蛋白各亚型mRNA的表达;对两组表达差异的亚型,采用Western blot法检测其蛋白表达。结果:14-3-3蛋白7种亚型在ECO异位子宫内膜组织和正常子宫内膜组织均有表达。ECO异位子宫内膜组织中14-3-3σ亚型mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05),14-3-3ε、ζ亚型mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论:ECO异位内膜组织中14-3-3σ表达显著下调,14-3-3ε和14-3-3ζ表达显著上调,提示这3种蛋白亚型均可能与ECO的发生发展有关。

14-3-3ζ蛋白在人类疾病中的研究

14-3-3ζ属于14-3-3蛋白家族,它主要通过与不同的配体蛋白相互结合,参与多种细胞信号通路的调节,调控包括细胞生长、增殖、迁徙、凋亡在内的多种生物学过程,影响人类疾病的发生和发展。本文就近年来有关14-3-3ζ在人类疾病发生发展过程中的作用作一简要综述。

MGRN1对小鼠睾丸支持细胞自噬的影响

目的:研究MGRN1对小鼠睾丸支持细胞自噬的影响。方法:体外培养小鼠睾丸支持细胞株(TM4细胞)利用RNAi下调TM4细胞中MGRN1的表达,然后利用Western印迹(WB)检测自噬相关蛋白(LC3-II/I、ATG-5和ATG-7)的表达,免疫荧光及电镜检测MGRN1下调后TM4细胞的自噬小体。结果:MGRN1下调后,WB发现TM4细胞中自噬相关蛋白(LC3-II/I、ATG-5和ATG-7)表达增加,荧光显微镜可观察到TM4细胞中自噬小体增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),电镜可观察到TM4细胞中自噬小体增加。结论:MGRN1影响睾丸支持细胞的自噬,具体分子机制有待进一步研究。

14-3-3ζ蛋白介导的阿魏酸对子宫腺肌病异位间质细胞的作用机制

目的研究阿魏酸是否通过调控子宫腺肌病异位子宫内膜间质细胞中14-3-3ζ蛋白的表达水平而达到治疗子宫腺肌病的目的。方法从子宫腺肌病患者中提取的原代异位子宫内膜间质细胞进行培养、鉴定,利用14-3-3ζ过表达腺病毒载体,感染上述分离的子宫腺肌病异位内膜间质细胞;随机分为7组:(1)正常对照组;(2)生理盐水组;(3)阿魏酸组;(4)阴性载体组(Adeno-CMV-e GFP);(5)阳性载体组(Adeno-CMV-YWHAZ);(6)阿魏酸+阴性载体组(FA+Adeno-CMV-e GFP);(7)阿魏酸+阳性载体组(FA+Adeno-CMV-YWHAZ)。使用Western blot检测14-3-3ζ蛋白的表达;CCK8法检测细胞存活率;Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 Western blot结果表明,与正常对照组相比:生理盐水组和阴性载体组中14-3-3ζ蛋白表达水平差异无统计学意义;而阿魏酸组较正常对照组及生理盐水组显著下调(P<0.01);与正常对照组比较,阿魏酸组细胞存活率下降,迁移和侵袭能力减弱(P<0.01);与阿魏酸+阴性载体组比较,阿魏酸+阳性载体组细胞存活率显著上升,迁移和侵袭能力增强,差异有统计学意义(P<0.01)。结论阿魏酸能够减弱原代异位子宫内膜间质细胞的生存能力,降低细胞的迁移和侵袭能力。且阿魏酸减少细胞存活、抑制细胞的迁移和侵袭是通过下调14-3-3ζ蛋白表达介导的。

可溶性c-Met对鼻咽癌细胞的增殖影响探讨

目的探讨肝细胞生长因子受体(c-Met)可溶性形式(soluble c-Met,sMet)对低分化鼻咽癌上皮细胞系CNE-2Z的生物学效应。方法HGF、sMet等分别处理培养的人鼻咽癌CNE-2Z细胞,采用MTT比色法观察各组处理24、48和72 h后对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响;Western Blot检测以上各组的Akt信号的磷酸化水平的改变。结果HGF组一直都维持对CNE-2Z细胞较高的促增殖效应,而在sMet竞争结合HGF后,促增殖效应明显受抑;加入LY294002(Akt信号通路的抑制剂)对HGF促增殖能力具有同样的抑制效果。HGF能激活Akt信号通路,促使Akt信号分子的磷酸化,sMet竞争结合HGF后,Akt的磷酸化水平与HGF组相比显著下降。结论在体外培养的人鼻咽癌CNE-2Z细胞模型中,证实sMet可以阻断HGF对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的促进作用,其可能机制与AKT信号通路有关。

甲基化-CpG-结合蛋白家族在肿瘤等疾病中的研究

甲基化-CpG-结合蛋白（methyl-CpG-bindingprotein 2,MeCP2）最早由R.R.Meehan等[1]提出,它是一种含特异性序列的DNA结合蛋白。随后,在哺乳动物中发现有一组蛋白每个都包含与MeCP2中甲基化-CpG-结合序列（methyl-CpG-bindingdomain，MBD）相同的基本结构，并将这组蛋白统称为甲基化-CpG-结合蛋白家族（methyl-CpG-bindingproteins，MBDs）。

MGRN1对小鼠睾丸精原干细胞线粒体自噬的影响

目的:研究MGRN1对小鼠睾丸精原干细胞(SSCs)线粒体自噬的影响。方法:体外培养小鼠睾丸精原干细胞,分为3组,对照组(空载体组)、MGRN1组(利用RNAi下调SSCs中MGRN1的表达)、MGRN1+FCCP组(在MGRN1下调后的SSCs中加FCCP诱导线粒体自噬);利用Western印迹检测3组线粒体功能相关蛋白(Cytochromo c、COX IV)及线粒体自噬相关蛋白LC3、P62、CK2表达及FUNDC1磷酸化水平。电镜观察各组SSCs的线粒体及线粒体自噬小体。结果:免疫印迹显示,MGRN1组及MGRN1+FCCP组与对照组相比,Cytochromo c、COX IV、LC3、P62表达明显下降,FUNDC1磷酸化水平增加,促FUNDC1磷酸化的蛋白CK2表达增加(P<0.05)。而MGRN1+FCCP组和MGRN1组相比,MGRN1、Cytochrome c、COX IV、LC3、P62、CK2表达及FUNDC1磷酸化无明显差异(P>0.05)。电镜显示:与对照组相比MGRN1组及MGRN1+FCCP组中,SSCs的线粒体损伤增加,线粒体自噬小体减少。结论:MGRN1下调后,体外培养的小鼠SSCs中线粒体受损、线粒体自噬受抑制、加FCCP也无法诱导出线粒体自噬增加,即MGRN1影响小鼠睾丸线粒体自噬,可能与CK2影响FUNDC1的磷酸化有关,具体分子机制有待进一步研究。

子宫腺肌病原代内膜间质细胞培养及功能学鉴定

目的分离提纯培养子宫腺肌病(AM)内膜间质细胞(ESc),检测其细胞功能的差异,为进一步的细胞及分子水平研究奠定基础。方法选取2013年1月至2016年12月份在本院治疗的正常子宫内膜和子宫腺肌病手术病例,在严格无菌条件下,收集临床确诊的AM患者在位子宫内膜组织12例、异位子宫内膜组织41例及正常对照内膜组织13例,分别分离培养ESc,并通过免疫组织化学法对分离提纯培养的细胞进行鉴定。分别检测三种细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等细胞功能。结果正常人ESc 13例,AM患者在位12例、异位ESc原代分离41例均成功,成功率为100.00%。与正常在位ESc相比,在位、异位ESc在普通光镜下,形态观察无明显差异,但是细胞功能方面,在位ESc生长曲线显示增殖率明显升高;异位ESc的迁移、侵袭率水平升高,差异有统计学意义(P<0.01),三种细胞凋亡无明显差异。结论采用间质细胞原代培养方法可以成功培养AM ESc,并保持较高的细胞培养成功率。在位ESc增殖率最高,异位ESc的迁移、侵袭率水平升高,细胞凋亡均无明显差异。

关于3个多囊卵巢综合征SNPs的meta分析

目的:综合评价3个单核苷酸多态性位点(SNPs)rs12478601、rs13405728、rs13429458与多囊卵巢综合征(PCOS)发病的相关性。方法:计算机检索Pub Med、CBM、CNKI、VIP、万方数据库2017年11月以前发表的3个单核苷酸多态性位点(SNPs)rs12478601、rs13405728、rs13429458与PCOS发病相关性的病例-对照研究。评价文献质量,采用Rev Man5.3软件进行meta分析。结果:共纳入10组独立病例-对照研究。Meta结果显示,亚洲人群纯合子模型中病例组的SNP-458(A)(OR=0.5,95%CI为0.42~0.61,P<0.00001)、SNP-728(A)(OR=0.49,95%CI为0.38~0.62,P<0.00001)、SNP-601(C)(OR=0.53,95%CI为0.46~0.62,P<0.00001)明显高于对照组,差异有统计学意义。亚洲人群显性模型分析结果示,病例组SNP-458(A)(OR=0.69,95%CI为0.64~0.74,P<0.00001)、SNP-728(A)(OR=0.66,95%CI为0.60~0.71,P<0.00001)、SNP-601(C)(OR=0.69,95%CI为0.60~0.79,P<0.00001)高于对照组,差异有统计学意义。欧美人群纯合子模型中,病例组与对照组比较SNP-458(A)(OR=0.58,95%CI为0.24~1.41,P=0.23)、SNP-728(A)(OR=0.99,95%CI为0.69~1.43,P=0.96)、SNP-601(C)(OR=0.91,95%CI为0.76,1.09,P=0.30)差异无统计学意义。结论:亚洲人群中SNP-728的等位基因A、SNP-458的等位基因A和SNP-601的等位基因C可能增加PCOS的患病风险,欧美人群中3个位点可能与其致病性无关。

CXCR 7在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

检测趋化因子受体7(chemokine receptor 7,CXCR 7)在正常宫颈组织、CIN宫颈组织及宫颈鳞癌宫颈组织中的mRNA及蛋白水平的表达情况。采取江西省妇幼保健院2016年6月-2017年12月新鲜宫颈组织标本103例,应用Western blot与RT-PCR技术,检测CXCR 7蛋白及mRNA在18例正常宫颈组织、18例宫颈鳞状上皮内瘤变组织、35例Ⅰ期宫颈鳞癌组织及32例ⅡB、ⅢB期宫颈鳞癌组织中的表达情况,并分析CXCR 7与宫颈鳞癌临床病理特征,如患者年龄、肌层浸润、肿瘤大小、FIGO分期之间的关系。结果表明,CXCR 7可能参与了宫颈鳞癌的增殖、生长、分化、侵袭等恶性行为,在对宫颈鳞癌早发现、早治疗及预后方面的研究中,CXCR 7可能提供了新的思路。

极体测序技术在Van der Woude综合征患者胚胎植入前遗传学检测中的应用

目的探讨极体测序技术在Van der Woude综合征患者胚胎植入前单基因遗传病检测中的应用价值。方法对1例因IRF6基因新发变异导致的Van der Woude综合征女性患者,应用极体测序技术进行胚胎植入前遗传学检测。6枚卵经卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)受精后,分别顺序活检第一极体、第二极体和囊胚滋养外胚层细胞。活检细胞经全基因组扩增后,利用PCR联合Sanger测序的方法检测极体和胚胎的致病变异携带状态,推断对应胚胎的致病性。为预防因囊胚培养失败造成无可移植胚胎的情况,在囊胚形成前对1枚致病性低的优质胚胎进行玻璃化冷冻。此外,通过在夫妇双方以及特定基因型的极体和胚胎样本中对变异位点及其上下游1M区域内的175个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点进行靶向捕获高通量测序,连锁分析构建单体型。选择致病性低的胚胎移植,成功妊娠后进行产前诊断以及跟踪随访。结果成功获得第一极体和第二极体各6枚,其中11枚极体的变异位点检测成功。6枚胚胎中,1枚预测致病性低的胚胎在患者知情同意后于第4日(day 4,D4)玻璃化冷冻;1枚胚胎成功发育至囊胚,但致病性高;4枚胚胎囊胚培养失败。连锁分析成功构建出与致病变异紧密连锁的SNP单体型,胚胎单体型分析与Sanger测序结果吻合。移植致病性低的D4期冷冻胚胎,成功妊娠后,患者夫妇拒绝有创产前诊断。出生后新生儿随访未发现唇腭裂,脐血基因检测不携带致病变异。结论本研究利用卵母细胞极体测序的检测方法,为1例因IRF6基因新发变异导致的Van der Woude综合征女性患者进行胚胎植入前单基因遗传病检测,成功阻断了该病向子代传递。

单精子测序技术在一个脊髓性肌肉萎缩症家系胚胎植入前遗传学检测中的应用

目的探讨单精子测序技术在脊髓性肌肉萎缩症(SMA)家系胚胎植入前单基因遗传病检测(PGT-M)中的应用价值。方法选取2020年6月于江西省妇幼保健院就诊的一个生育过2例SMA患儿(均已夭折)的家系作为研究对象,利用机械制动法分离11份单精子样本并进行全基因组扩增,采用荧光定量PCR与Sanger测序法对扩增产物进行SMN1基因变异检测。选取女方、女方父母和男方的基因组DNA,以及1份携带和2份未携带SMN1基因变异的单精子扩增产物,在变异位点上下游2 Mb区域内选取100个单核苷酸多态性位点,设计引物进行靶向捕获高通量测序,通过连锁分析确定男女双方与SMN1基因致病变异连锁的染色体单体型。经卵胞浆内单精子显微注射技术受精获取囊胚,活检滋养外胚层细胞,经全基因组扩增后行高通量测序检测胚胎的单体型,判断胚胎的致病性。对野生型胚胎进行染色体非整倍体检测,选择SMN1基因型为正常的整倍体胚胎进行移植。于孕18周行羊水穿刺产前诊断,确认胎儿的基因型。新生儿出生后进行跟踪随访。结果基因检测发现夫妇双方均携带SMN1基因第7、8外显子缺失杂合变异,其中女方携带的变异遗传自其父亲,男方为新发变异。利用单精子测序技术成功构建出男方单体型。PGT检测发现5枚胚胎携带SMN1基因杂合变异,4枚为野生型,其中3枚为整倍体。移植1枚野生型整倍体胚胎,妊娠中期羊水检测证实胎儿未携带SMN1基因第7、8外显子缺失变异。新生儿足月出生,随访9个月未见异常。结论应用单精子测序技术为1对夫妻双方均携带SMN1基因第7、8外显子杂合缺失变异且男方为新发变异的夫妇构建出男方致病变异的连锁单体型,并为该夫妇提供PGT检测,成功避免了SMA患儿的出生。

一例N-乙酰谷氨酸合成酶缺乏症家系的基因分析与产前诊断

目的探讨1例N-乙酰谷氨酸合成酶缺乏症家系的遗传学病因,并为该家系再次生育提供遗传咨询和产前诊断。方法应用Trio全外显子组测序寻找N-乙酰谷氨酸合成酶缺乏症家系的致病原因。根据美国医学遗传学与基因组学学会(American College of Medical Genetics and Genomics,ACMGG)推荐的基因变异临床意义分类标准对检出的变异进行分类,评估其致病风险。该家系再次生育时,应用Sanger测序针对检出的变异进行产前诊断。结果Trio全外显子组测序结果显示:患儿NAGS基因存在c.68delG和c.796G>C复合杂合变异,其父母分别携带c.796G>C和c.68delG杂合变异。上述变异均未见文献报道,根据ACMGG变异判读指南,c.68delG为"疑似致病"变异(PVS1+PM2),c.796G>C为"临床意义不明确"变异(PM2+BP4)。Sanger测序验证了Trio全外显子组测序的检测结果,并在羊水细胞中仅检测出c.796G>C杂合变异。该胎儿出生后6个月随访,未发现明显异常。结论NAGS基因c.68delG和c.796G>C复合杂合变异可能为该家系中患儿的致病原因,基因检测结果为家系的遗传咨询和产前诊断提供了依据。

卵巢成熟性畸胎瘤鳞癌变31例临床分析

目的探讨卵巢成熟性畸胎瘤鳞癌变的临床特点、诊断、治疗及预后。方法对江西省妇幼保健院肿瘤科2008年1月至2019年12月收治的31例卵巢成熟性畸胎瘤鳞癌变患者的病历资料进行回顾性分析。结果31例患者的中位年龄为57岁,临床症状以下腹部胀痛为主,血清鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)平均值20.2μg/L,影像学表现缺乏特征性。平均肿瘤直径(13.0±5.4)cm。治疗均采用肿瘤细胞减灭术联合化疗。31例患者总的中位无进展生存时间为18个月,2年累计无瘤生存率为48.4%。比较了多个可能影响预后的因素,国际妇产科联盟(FIGO)分期是影响预后的主要因素(P=0.045),紫杉醇+铂类联合化疗总生存率优于BEP方案(依托泊苷+顺铂+博来霉素),但差异无统计学意义。结论卵巢成熟性畸胎瘤鳞癌变是一种罕见的恶性肿瘤,临床表现及影像学均缺乏特异性,目前仍缺乏足够的资料为这种恶性肿瘤的治疗提供普遍的指导方针。