池蝶蚌IκBα和c-Rel的结构特征及在LPS刺激下的表达分析

为研究淡水贝类NF-κB/Rel信号通路中核因子κB(Nuclear factor-κappaB,NF-κB)和NF-κB抑制因子(Inhibitors of NF-κB,IκB)的功能,对池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)IκBα和c-Rel(以下简称HsIκBα和Hsc-Rel)的序列结构、表达特征及Hs IκBα和Hsc-Rel之间的相互关系进行了分析。结果表明,Hs IκBα的c DNA全长为1783 bp,其开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为1083 bp,编码360个氨基酸。Hsc-Rel的cDNA为2414 bp,ORF为2298 bp,编码765个氨基酸。通过构建HsIκBα-ORF-GST和Hsc-Rel-RHD-HIS重组质粒、原核诱导表达和纯化,进行GST-pull down,通过SDS-PAGE和Western Blot检测研究,发现HsIκBα和Hsc-Rel-RHD存在直接的相互作用。通过对池蝶蚌进行脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激后,分别在7个时间点(0、6h、12h、24h、36h、48h和72h)对10个组织中HsIκBα和Hsc-Rel的mRNA表达差异性进行分析,结果显示:HsIκBα和Hsc-Rel的mRNA在所有组织都有表达,且在肝胰腺组织表达最高,在血细胞表达最低。在6h时,HsIκBα在8个组织中和Hsc-Rel在7个组织中的表达水平都出现下调;在12h时,HsIκBα在10个组织中的表达量都上调,并且都达到了峰值。Hsc-Rel只有血细胞、心脏、肝胰腺和肠出现上调;在24h时,HsIκBα在10个组织中的表达值呈现下调,Hsc-Rel却都出现上调(肾组织除外),其中血细胞、斧足、肠的表达值达到峰值;在36—72h,HsIκBα和HscRel的部分组织的表达值逐渐恢复到基础水平,以上结果表明,HsIκBα和Hsc-Rel的表达量随着LPS的诱导而产生明显变化,说明其参与免疫应答反应,且可能存在应答LPS的NF-κB通路。

池蝶蚌HsPif基因的克隆及表达分析

为了探究池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)酸性基质蛋白Pif基因的基本功能,研究通过RACE-PCR技术首次在池蝶蚌中获得了Pif基因的cDNA全长序列,命名为HsPif,其全长为3457 bp, 5′端非翻译区(5′UTR)为485 bp,3′端非翻译区(3′UTR)为363 bp,开放阅读框(ORF)3072 bp,共编码1023个氨基酸,生物信息学分析结果显示HsPif蛋白含有一个von-Willebrand因子A型结构域和三个几丁质结合结构域;氨基酸组成成分结果表明天冬氨酸含量最高,组氨酸含量最低;HsPif蛋白亲水指数为–0.566,为亲水蛋白。构建系统进化树分析显示Pif基因保守性较高,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)Pif相似度最高,且与其他贝类在同一个大支上。组织荧光定量PCR结果表明:HsPif基因主要在外套膜中表达;分子原位杂交显示杂交反应主要在外套膜上皮细胞发生。进行植核手术后进行qPCR检测HsPif基因的表达量变化,实验结果表明, HsPif基因可能与珍珠层的分泌有关,有助于进一步了解珍珠形成的机制,为珍珠养殖提供参考。

池蝶蚌急性高温和菌刺激胁迫应答HSP70 B2-like的表达特征

为探究热激蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)对池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)在应对不利环境胁迫时的作用,研究结合转录组测序和RACE-PCR获得池蝶蚌HSP70家族一个成员(暂命名:HSP70 B2-like)cDNA全长序列(2209 bp),同源分析显示,该基因编码的蛋白含有HSP70家族的签名序列,C末端存在细胞质特异性调控信号EEMD。与其他物种的HSP70具有很高的相似性。进化树分析表明,获得序列与褶纹冠蚌HSP70亲缘关系最近,并和其他软体动物HSP70 B2亚家族聚为同一进化支。实时荧光定量PCR结果表明,池蝶蚌HSP70 B2-like在检测的多个组织中均有表达,且闭壳肌中表达量最高。经热刺激(37℃)后,池蝶蚌闭壳肌、肝胰腺、外套膜和肾中的HSP70 B2-like mRNA表达快速上调,6 h达到峰值(P<0.01),随后逐渐下降。池蝶蚌鳃和血细胞中的HSP70 B2-like mRNA表达量则是先降后升再回落。但血细胞、外套膜和肾中的HSP70 B2-like在48 h再次出现表达上调。注射嗜水气单胞菌后,HSP70 B2-like在肝胰腺、血细胞和闭壳肌的表达量均显著上升,6 h开始上调(P<0.05),持续到24 h,到48 h回落。而鳃中的HSP70 B2-like基因的表达则是先降后升再回落。研究结果表明,池蝶蚌HSP70 B2-like是一个应激蛋白基因,可能在机体耐受高温胁迫和抗病原菌浸染时发挥重要作用。

不同养殖密度虹鳟幼鱼生长和肌肉转录组比较分析

为探明养殖密度对虹鳟幼鱼生长性能的影响,对高密度(6.99 kg/m^(3))、中密度(4.66 kg/m^(3))、低密度(2.33 kg/m^(3))养殖条件下虹鳟生长和肌肉转录组进行比较分析。试验结果显示:养殖32 d后,低密度组终末体质量等指标均高于中、高密度组;每个样品转录组有效数据均达5.99 Gb,比对效率91.67%~92.77%,共发掘5501个新基因,其中4121个得到注释,1380个未得到注释;低密度组与高密度组、低密度组与中密度组、中密度组与高密度组比较分别获得了2760、654、2316个差异表达基因,其生物学过程和细胞组分均富集在DNA整合、DNA介导的转位和褶皱,分子功能主要富集在细胞骨架的结构组成(低密度组与高密度组、中密度组与高密度组差异表达基因)和DNA结合、氧化还原酶活性作用于成对供体结合或重组(低密度组与中密度组差异表达基因),且分别有920、196、743个差异表达基因定位到相应的212、112、189个特定代谢途径;通过人工筛选获得了19条与生长和应激相关的基因序列。试验结果表明,养殖密度对虹鳟幼鱼生长及相关基因的表达产生显著影响。

池蝶蚌HsCTL的分子特征及表达分析

C-型凝集素(C-type lectin,CTL)是存在动、植物及微生物中一类Ca2+依赖性的糖蛋白,能够识别和结合病原微生物表面的多糖物质,在机体免疫防御中起重要作用。为了解淡水育珠贝池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii) CTL的分子特征及潜在作用,结合转录组高通量测序和末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)从池蝶蚌中鉴定了一条与其他物种CTL同源的c DNA序列,命名为HsCTL。该序列全长为1716 bp,包括5'端非编码区92 bp,3'端非编码区898 bp,开放阅读框长726 bp,编码241个氨基酸,预测蛋白质相对分子量为28 ku。其氨基酸序列存在一个由23个氨基酸残基组成的信号肽和一个糖配体识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD),CRD结构域中仅包含1个QPD (Gln-Pro-Asp)基序。序列同源性及进化分析表明,HsCTL与斑节对虾(Penaeus monodon) CTL同源性最高,达36%,而与目前Gen Bank公开的其他贝类CTLs的同源性为9.7%～18.1%。构建的系统进化树显示,HsCTL与斑节对虾和中国明对虾(Fenneropenaeus chinensiss)的同系物聚为一支,与三角帆蚌(Hyriopsis cumingii) perlucin和九孔鲍(Haliotis diversicolor) CTL聚为相邻支。通过实时荧光定量RTPCR检测发现,HsCTL的mRNA广泛分布于池蝶蚌各个组织,其中在血细胞表达量最高,外套膜和肝胰腺次之。且进一步发现,注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后,HsCTL的mRNA表达量在血细胞和肝胰腺组织中显著增加。以上结果表明,HsCTL在池蝶蚌抵抗病原微生物的免疫防御反应中可能起到重要作用,结果为进一步研究HsCTL参与池蝶蚌先天免疫的分子机制打下基础。

即食蛙肉脯加工工艺

目前我国的养殖蛙类主要有牛蛙、美国青蛙和特许养殖的青蛙、虎纹蛙、棘胸蛙等，市场上的蛙类食品以活蛙和冷冻蛀肉为主，即食蛙类食品的种类很少。蛙类柔软嫩爽、味美而富有营养，是一种高蛋白、低脂肪、低胆固醇的营养食品。但现有的蛙类产品的食用比较单一，多是新鲜蛙类烹制，也有将蛙类以冷藏、冷冻等保鲜方式加工成蛙肉储备和销售，其加工类产品相对其他畜禽类产品单一。

基于磁珠的核酸快速提取和纯化

采用纳米磁珠法对细菌基因组DNA、总RNA和质粒DNA进行提取纯化,并与试剂盒法和Trizol法提取效果进行比较,以期获得核酸最佳提取方法。结果发现,与试剂盒法和Trizol法相比,磁珠法在细菌基因组DNA和RNA提取、PCR产物检测及纯化中效率更高;而在PCR产物回收和质粒DNA的提取中,效率低于试剂盒法,质粒酶切效果与试剂盒法无差异。结果表明,纳米磁珠法相比试剂盒法和Trizol法在核酸提取纯化效果上更佳。

嗜水气单胞菌刺激对中华绒螯蟹免疫的影响

以中华绒螯蟹为试验对象,采用常规石蜡切片和苏木精—伊红染色及实时荧光定量PCR技术分析嗜水气单胞菌刺激对其免疫组织结构及基因表达的影响。试验结果显示,与对照组相比,随着细菌刺激时间的延长,中华绒螯蟹鳃丝厚度和血细胞数量均表现为先降低后增厚增多趋势,肝小管管腔比面积、结构和细胞数量发生显著变化;脂多糖和β-1,3-葡聚糖结合蛋白表达量6 h时显著降低(P<0.05),而在12 h时极显著增加(P<0.01);Toll通路重要组件Tube表达量在3、6 h时均显著降低(P<0.05),12 h显著增加(P<0.05);Toll通路重要组件Dorsal基因表达量在3 h时显著增加(P<0.05);整合素基因表达量在感染3、6 h均显著增加(P<0.05),12 h时表现为极显著增加(P<0.01);酚氧化酶原激活酶、细胞黏附蛋白、谷胱甘肽硫转移酶基因表达量在感染12 h内均呈逐渐下降趋势;谷胱甘肽过氧化物酶基因表达量在感染6 h达到最低值,而后上调;超氧化物歧化酶基因表达量在感染6 h显著降低(P<0.05)。试验结果表明,嗜水气单胞菌刺激显著影响中华绒螯蟹鳃、肝胰腺组织结构和免疫相关基因的表达。

一种池蝶蚌多糖的分离纯化、表征特性及体外抗氧化活性

首次从淡水育珠贝类池蝶蚌中得到多糖组分,探讨了相关提取工艺、理化特性以及体外抗氧化活性。Sevag工艺重复5次游离蛋白清除效果最佳,粗多糖经sevag纯化得率达到20.8%;通过离子交换树脂(DEAE-52)及葡聚糖凝胶柱层析(Sephacryl S-300)分离纯化得到池蝶蚌多糖(HSP-1),纯度达到97.5%;测定HSP-1的部分理化特性,测得其分子量为2 204Da,其单糖组成由64.8%的葡萄糖、17.4%的阿拉伯糖以及17.8%的葡糖醛酸组成;抗氧化活性测定结果表明,HSP-1对于DPPH、超氧自由基、羟自由基的最大清除率分别是62.16%,58.65%和45.21%。根据结果 HSP-1具有明显的抗氧化能力。

Cu^(2+)胁迫对中华绒螯蟹毒性作用及免疫相关基因表达的影响

以中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)为实验对象,运用毒理学方法和实时荧光定量PCR技术分析Cu^(2+)胁迫对中华绒螯蟹的毒性作用及免疫相关基因表达的影响。结果发现,试验72 h,低浓度组(0.1 mg/L和对照组)中无明显死亡现象,而高浓度组(0.5 mg/L和1.0 mg/L)中全部死亡,说明高浓度Cu^(2+)胁迫对中华绒螯蟹具有明显的毒性作用;进一步分析发现,Cu^(2+)(浓度为0.1 mg/L)胁迫对中华绒螯蟹免疫相关基因脂多糖和β-1,3-葡聚糖结合蛋白(LGBP)、Tube、Dorsal、酚氧化酶原激活酶(PPAF)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)、细胞粘附蛋白(PXN)表达也产生显著影响,LGBP基因mRNA表达量在胁迫36 h时显著高于对照组(P<0.05);PPAF基因mRNA表达量在胁迫12 h和48 h显著高于对照组(P<0.05);Tube基因mRNA在胁迫48 h时显著高于对照组(P<0.05),而72 h时显著低于对照组(P<0.05);Dorsal基因mRNA表达量在胁迫48 h时显著高于对照组(P<0.05);GPx基因mRNA表达量在胁迫36 h显著高于对照组(P<0.05),而72 h时显著低于对照组(P<0.05);GST基因mRNA表达量在胁迫36 h和48 h显著高于对照组(P<0.05);PXN基因mRNA表达量在胁迫12 h时显著高于对照组(P<0.05),而72 h时显著低于对照组(P<0.05)。结果表明,重金属Cu^(2+)胁迫对中华绒螯蟹具有明显的毒性作用,且显著影响其免疫模式识别蛋白相关基因(LGBP)、免疫信号传导相关基因(Dorsal、Tube)及免疫效应相关基因(PPAF、GPx、GST、PXN)的表达。

温度对池蝶蚌雌雄同体和性逆转的影响

为探究温度对池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)性腺发育的影响,研究连续两年对池蝶蚌性腺进行雌雄同体现象筛选及跟踪观察,并采用5个温度诱导池蝶蚌生殖滤泡分化。通过对不同时期的池蝶蚌的性腺进行qRTPCR检测,同时利用原位杂交技术对性别决定关键基因Dmrt1进行细胞定位。结果显示:在自然条件下,6月龄池蝶蚌出现了雌雄同体现象,28月龄的雌雄同体蚌到30月龄左右会出现不同性别的分化(77.8%分化为雄蚌,16.7%维持雌雄同体现象,5.5%分化为雌蚌)。在不同温度刺激下,14月龄池蝶蚌出现了雌雄同体和性逆转现象。32℃刺激,14月龄雄蚌出现12.5%雌雄同体;27℃刺激,14月龄雄蚌和27月龄雄蚌分别出现37.5%和12.5%性逆转;23℃刺激,14月龄雌蚌出现14.29%性逆转;19℃刺激,14月龄雌蚌出现25%性逆转。qRT-PCR结果显示:Dmrt1在胚胎及6、27月龄表达显著高于其他时期,32℃刺激,在27月龄雄蚌中的表达显著高于其他温度,19℃刺激,在14、27月龄雌蚌中的表达显著高于其他温度;Fem1b、Fem1c的时空表达趋势基本一致,与Tra2a大体一致,在5、32月龄与Sox9相互抑制;19℃、23℃和27℃刺激,Fem1b、Tra2a和Sox9三个基因在14月龄雄蚌中表达显著高于其他温度,且23℃刺激,Sox9在27月龄雄蚌中表达也显著高于其他温度;Foxl2在27℃下的27月龄雌蚌中表达显著高于其他温度。Tra2a、Fem1b、Fem1c、Sox9和Dmrt1五个基因在不同月龄的雌雄同体蚌内表达有显著差异,Foxl2在雌蚌和雌雄同体蚌内表达显著高于同期雄蚌。原位杂交技术结果显示,Dmrt1 mRNA阳性信号主要定位在精原细胞、初级精母细胞和成熟卵母细胞中。综上所述,温度影响池蝶蚌生殖滤泡的分化,27℃及以上的高温容易诱导雄蚌向雌蚌逆转或产生雌雄同体现象,23℃及以下的低温容易诱导雌蚌向雄蚌逆转;并且温度很可能是通过调控Dmrt1等性别相关基因的表达量,从而调节生殖滤泡分化的。

基于转录组分析不同温度下池蝶蚌性别相关基因的表达

采用Pacbio三代和Illumina二代测序技术对不同温度(15℃,20℃,25℃,30℃,33℃)条件下养殖的30月龄池蝶蚌性腺组织进行转录组分析。通过差异分析获得各个温度下雌雄对比组的差异基因,数量分别为6311,3013,6673,6798和5685个。其中在20℃和33℃下差异基因数量最少。差异表达基KEGG富集显示,25℃条件下出现卵母细胞的有丝分裂,细胞周期和notch信号通路等雌性相关活动。对五个温度处理组之间的差异表达基因进行组间比较,发现含有802个共同表达差异的基因,其中鉴定到wnt4,rspo1,fem1和tra1等4个性别决定相关基因。在qRT-PCR和转录组数据中,各温度下wnt4,rspo1的表达水平雌性均显著(P<0.01)高于雄性;而fem1,tra1相反。根据wnt4,rspo1,fem1和tra1在不同温度下的相对表达情况和差异基因的KEGG富集结果表明,25℃以上更利于雌性发育,其发育机制还有待深入研究。

池蝶蚌HsTRAF6基因的克隆鉴定及表达分析

肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor associated factor 6,TRAF6)对于介导Toll样受体(TLR)/白细胞介素1受体(IL-1R)信号传导以及随后的NF-κB和AP-1的激活至关重要。在本研究中,已经克隆并鉴定了池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)TRAF6(以下简称HsTRAF6),cDNA全长为3945 bp,ORF框1965 bp,编码654个氨基酸,该区域包含保守的特征结构域,包括1个RING结构域、2个TRAF型锌指结构域、1个典型的卷曲螺旋(coiled coil;TRAF-N)和MATH(TRAF-C)结构域。系统发育分析显示,池蝶蚌与其他贝类等软体动物聚在一支。此外,qRT-PCR分析显示HsTRAF6在组织中广泛分布,在鳃和肝胰腺中表达最丰富;脂多糖和嗜水气单胞菌免疫刺激后,分别在7个时间点(0,6,12,24,36,48,72 h)对10个组织中HsTRAF6的mRNA表达差异性进行分析,各组织间表达变化存在差异,但均有显著变化。

不同养殖密度西伯利亚杂交鲟幼鱼转录组分析

【目的】阐明养殖密度对西伯利亚杂交鲟(西伯利亚鲟Acipenser baerii♀×施氏鲟Acipenser schrenckii♂)生长性能的影响机制,获得最适宜的养殖密度,为该品种健康养殖提供理论数据。【方法】选取规格一致、健康无病的初始体质量为(7.89±1.45)g的西伯利亚杂交鲟幼鱼,设置低密度组(LD,0.465 kg/m2)、中密度组(MD,0.694 kg/m2)和高密度组(HD,0.930 kg/m2)3个不同的养殖密度进行为期90 d的生产试验,每个密度设置3个重复,每个重复组取1肌肉组织共9个样品进行RNA-seq测序和生物信息学分析。【结果】共得到60.70 Gb Clean Data,各样品的Clean Data均达到6.30 Gb,Q20和Q30碱基百分比在97.45%和93.42%以上;将小体鲟(Acipenser ruthenus)的基因组作为参考基因组进行比对,比对效率在72.64%~74.38%,发掘15549个新基因;将新基因进行注释发现,12636个新基因得到注释,2913个新基因未得到注释;进一步对3个密度组两两比较进行差异表达基因分析,共得到611个非冗余差异表达基因(DEGs),其中LD vs HD和LD vs MD比较组有33个共同DEGs,LD vs HD和MD vs HD比较组有40个共同DEGs,LD vs MD和MD vs HD比较组有31个共同DEGs,只有1个DEG是3个比较组共有;GO功能富集分析发现,这些DEGs主要富集在GTPase活性的增加、肌球蛋白复合物、肌动蛋白结合、ATP结合以及锌离子结合等二级节点中。在此基础上,通过人工筛选与生长应激相关的二级节点,获得了27条与生长应激相关的差异基因,其中包括调控生长轴GH/IGF的生长激素受体(GHR)和胰岛素样生长因子1和2(IGF-1、IGF-2)。选取9条表达差异倍数大的基因进行qRT-PCR验证发现,其mRNA表达趋势均与转录组分析中的表达趋势一致。【结论】不同养殖密度条件下,西伯利亚杂交鲟幼鱼生长、应激等相关基因的表达模式发生显著变化。

池蝶蚌STAT基因的克隆及功能分析

为了探究池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)信号转导及转录激活因子STAT基因的初步功能,通过RACEPCR技术首次在池蝶蚌中获得STAT的c DNA全长序列(Gen Bank ID:KY123702),命名为Hs STAT,Hs STAT全长为2752 bp,5′-非编码区(5′UTR)为121bp,3′-非编码区3′UTR为264 bp,开放阅读框(ORF)为2367 bp,编码788个氨基酸;生物信息学分析发现该蛋白结构域主要由STAT_int、STAT_alpha、STAT_bind、SH2四个经典保守性功能域组成;缬氨酸最多占12.9%。色氨酸使用频率为100%。二级结构中α螺旋最多占46.83%、β折叠最少占8.5%。Hs STAT蛋白亲水性指数为–0.531,是亲水性蛋白。预测到棕榈酰化修饰位点1个,小泛素相关修饰序列3个,磷酸化修饰位点22个。系统进化树分析显示,Hs STAT与光滑双脐螺STAT5B和盘鲍STAT5聚在一支;亚细胞定位结果显示Hs STAT定位于血细胞的细胞质中;荧光原位杂交结果显示Hs STAT主要在细胞核。q PCR结果显示Hs STAT在所有的组织中均有表达,其在组织中的表达量在肝胰腺中最高,在血细胞中最低。细胞增殖实验显实验组增殖率为119%,高于对照组。实验已克隆到Hs STAT的全长序列,Hs STAT可能为STAT5亚型,具有促进SMCC-7721细胞增殖的功能,推测具有池蝶蚌细胞的信号转导功能参与池蝶蚌的先天免疫。

基于转录组的池蝶蚌系统发育及其遗传分析

池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)和三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)的亲缘关系一直存在争议,为了更深入地对淡水珠蚌进行系统发育分析,研究对池蝶蚌及其3个近缘物种三角帆蚌、褶纹冠蚌(Cristaria plicata)和背角无齿蚌(Anodonta woodiana)的转录组进行了比较分析。对它们共有单拷贝同源基因进行多序列联配后计算这4种淡水珠蚌之间的遗传距离,结果表明池蝶蚌和三角帆蚌的遗传距离只有0.00746(小于1%),而其他淡水珠蚌之间的遗传距离几乎是它的10倍(平均大于6%)。系统发育分析表明,小方蚌亚科与无齿蚌亚科大约在5144万年前发生分歧,而池蝶蚌和三角帆蚌发生分化的时间大约在424万年前。进一步的遗传差异分析鉴定了池蝶蚌转录组中的特有基因,其中KEGG通路富集的结果表明这些基因主要富集在免疫细胞膜分子和蛋白消化吸收等通路上。同时, GO注释结果表明有很多特有基因与池蝶蚌的优良性状相关,如与发育相关的生长发育、系统发育和动物器官发育等生物学过程,及与免疫相关的免疫系统过程、抗原处理和呈递等生物学过程。以上结果表明,池蝶蚌和三角帆蚌具有更近的亲缘关系,它们可能是同一物种的不同亚种或不同种群,这对淡水珠蚌种质资源的保护和遗传育种具有重要参考意义。此外,相比于三角帆蚌,池蝶蚌可能具有一些与生长发育及免疫相关的特有基因,这为探究相关的分子机制提供了线索。

池蝶蚌IRAK4基因的克隆及功能

在优质淡水珍珠育珠贝池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)中获得白细胞介素受体相关激酶IRAK4基因cDNA全长序列,命名为HsIRAK4,其全长为2617 bp,5’端非翻译区(5′UTR)为146 bp,3′端非翻译区(3′UTR)为797 bp,ORF框1674 bp,编码557个氨基酸,包含2个保守结构域,即N端的死亡结构域(Death,DD)和激酶结构域(KD)。系统进化树分析显示,HsIRAK4与青蛤的同源性最高,与软体动物聚在一支,和鱼类、灵长类不在一支。采用Real time-quantitative PCR技术检测脂多糖LPS诱导后的HsIRAK4及其在TLR信号通路中的上游因子HsMyD88的mRNA表达水平,结果显示,HsMyD88和HsIRAK4在所有组织都有表达,并且HsMyD88和HsIRAK4都在肝胰腺、鳃、肾和肠等免疫相关组织中高表达,二者在LPS刺激后不同组织达到峰值的时间明显存在差异,说明HsMyD88和HsIRAK4很有可能参与贝类动物的免疫防御。池蝶蚌GST-Pulldown结果显示,HsMyD88的Death结构域分别能和HsIRAK4-Death和HsIRAK4-ORF发生相互作用。

即食麻辣味牛蛙皮加工工艺

牛蛙原产于北美,是世界上最著名的大型食用蛙类,也是目前我国的主要养殖蛙类。现有的蛙类产品的食用比较单一,多是新鲜蛙烹制,也有将蛙类冷藏、冷冻等保鲜方式加工成蛙肉储备和销售,其加工类产品相对其他畜禽类产品单一。特别是蛙皮作为加工副产品,一般是作为废弃物处理。

即食卤味牛蛙加工工艺

牛蛙肉质柔软嫩爽，味美而富有营养，是一种高蛋白质、低脂肪、低胆固醇的营养食品。但由于蛙肉易腐败，加工难度较大，保质期较短，所以介绍蛙类加工方法不多。现有的蛙类产品的食用比较单一，多是新鲜蛙类烹制，也有将蛙类冷藏、冷冻等保鲜方式加工成蛙肉储备和销售，其加工类产品相对其他畜禽类产品单一。即食卤味牛蛙不仅味道鲜美、肉质细嫩、口感好，因煮制恰当，食用时容易分割，方便食用者户外或旅行中食用。本文所述的卤味牛蛙加工工艺生产成本低、工艺简单，适合于工业化生产。通过加工转换，提高牛蛙产品的附加值，以此形成牛蛙战略产业链，这样才会兴起牛蛙产业。

荷包红鲤、彭泽鲫和萍乡红鲫肌间骨的比较分析

将荷包红鲤、彭泽鲫和萍乡红鲫放入锅中煮沸,取出肌间骨各部位,比较分析肌间骨数目、形态、类型和分布规律。结果显示:荷包红鲤的肌间骨数目为70~99(x=88)根,彭泽鲫肌间骨数目为78~92(■=85)根,萍乡红鲫的肌间骨数目为62~89(■=77)根;荷包红鲤和彭泽鲫肌间骨数目不存在显著性差异,荷包红鲤和萍乡红鲫肌间骨数目存在显著性差异(P<0.01),彭泽鲫和萍乡红鲫肌间骨数目也存在显著性差异(P<0.01);3种鱼肌间骨均存在髓弓小骨和脉弓小骨,但未见椎体小骨。肌间骨的类型均为简单型(“I”型、“卜”型、“Y”型)、中间型(一端多叉型、两端两叉型)和复杂型(两端多叉型、树枝型),简单型数目最多;3种鱼身体两侧的肌间骨数量不完全一致,不同部位肌间骨类型分布存在差异,左右两侧的肌间骨分布不同,但无显著差异。试验结果可为进一步研究其肌间骨时空发育规律,培育少或无肌间骨的鲤、鲫新品系提供基础资料。