江西省2438例急性呼吸道感染儿童中人偏肺病毒感染分析

目的了解2010-2016年江西省2438例急性呼吸道感染儿童中人偏肺病毒感染情况和病毒基因型特征。方法于2010年4月至2016年12月采集江西地区呼吸道感染儿童鼻咽拭子或支气管灌洗液标本;采用RT-PCR方法对人偏肺病毒进行核酸检测,对人偏肺病毒核酸阳性样本进行F基因扩增和测序,采用DNAStar和MEGA6.0软件对所得基因序列进行分析。结果2010-2016年共采集2438例急性呼吸道感染儿童呼吸道标本。其中54例患儿标本人偏肺病毒核酸阳性,阳性率为2.21%,5岁以下儿童占总病例数90.74%。不同月份间人偏肺病毒检出率差异具有统计学意义,主要流行月份在12月和1-3月;阳性率在男女性别分布差异无统计学意义,共测序获得28株人偏肺病毒的F基因序列,系统进化分析显示,江西地区流行的人偏肺病毒有A2,B1,B2基因型,其中以A2基因型为主。结论人偏肺病毒是引起江西省儿童急性呼吸道病毒感染的重要病原体之一,冬春季高发,A2为优势流行的基因型。

江西地区儿童感染的乙型肝炎病毒“a”抗原变异分析

目的:初步分析江西省乙型肝炎疫苗免疫儿童感染的乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)"a"抗原决定簇的变异。方法:收集在江西省儿童医院就医的13 117名乙肝疫苗免疫儿童(7.39±3.66岁)血清标本,酶联免疫吸附方法检测HBV-M,抽提HBV表面抗原(HBsAg)阳性血清标本中的HBV DNA,扩增HBV S基因,PCR产物测序并与标准序列对比,分析"a"抗原决定簇的变异与血清型;利用在线Genotyping软件对儿童感染的HBV进行分型。同时用荧光定量PCR检测血清HBV DNA含量。结果:从13 117份血清样品中,检测出HBsAg阳性标本230份(1.75%),扩增HBV S基因并成功测序118份。检测出24份标本有"a"抗原决定簇变异(变异率20.34%),"a"抗原决定簇两茎环间的变异率和男女儿童感染的HBV"a"抗原决定簇的变异率无显著性差异。Q129H、G145A突变后,血清HBV DNA水平较未变异株降低(P<0.05)其他各组则无显著变化。118份测序标本利用Genotyping比对后,112份属于B型,其中adw血清型105份,ayw血清型7份;6份属于C型,均为adr血清型。结论:在江西省乙肝疫苗免疫儿童人群检测出"a"抗原决定簇变异的HBV感染,未发现有明显优势的变异株类型。HBV"a"抗原决定簇区突变对血清HBV DNA含量有一定的影响。

江西省鼠类携带汉坦病毒基因特征研究

目的了解江西省鼠类汉坦病毒感染情况,分析汉坦病毒基因型别和基因特征。方法于2011年春秋季,在江西省高安市、安义县、新建县、上饶县、上高县、浮梁县室内外以夹夜法捕鼠取其肺,冷冻切片后采用直接免疫荧光法检测鼠肺中汉坦病毒抗原,提取阳性鼠肺标本RNA,采用特异性分型引物进行RT-PCR扩增,确定病毒型别;扩增汉坦病毒全S片段及部分M片段进行序列测定和基因分析。结果共捕获鼠类616只,41份免疫荧光阳性,鼠类汉坦病毒携带率为6.66%;对32份免疫荧光阳性鼠肺标本进行RT-PCR检测,其中10份为汉城型(SEOV型),13份为汉滩型(HTNV型),有9份标本未能分型;对7份标本序列测定和基因分析,结果显示4株HTNV型,3株病毒属SEOV型。结论江西地区鼠类携带汉坦病毒的型别主要为HTNV型和SEOV型,可能存在新亚型的汉坦病毒。

一起人腺病毒55型引起的儿童发热暴发疫情病原学鉴定

目的对江西省某地一起儿童不明原因发热暴发疫情的病原进行鉴定。方法采集患儿咽拭子标本,提取样本总核酸,采用TaqMan微流体芯片技术对所有标本进行42种呼吸道病原检测,对检出腺病毒阳性的标本,进行腺病毒六邻体基因(Hexon)片段测序和病毒分离,对分离毒株基因组进行测序,运用CLC Genomics Workbench和Mega7.0等生物学软件对测定序列进行处理分析。结果共采集3例不明原因发热患儿咽拭子标本3份,经TaqMan微流体芯片技术检出3份腺病毒阳性。获得3条长708bp的Hexon基因片段序列,序列之间同源性为100%,序列分析发现其与人腺病毒55型同源性最高;共分离到2株腺病毒命名为2020YQ523、2020YQ524;对病毒分离株2020YQ523进行了腺病毒基因组序列测定,获得长34443bp的基因序列,根据腺病毒全基因序列构建的系统进化树显示该病毒分布在腺病毒55分支。结论该起儿童发热暴发疫情由人腺病毒55型感染引起。

儿童感染的乙型肝炎病毒S基因的分子特征

目的初步调查儿童感染的乙型肝炎病毒表面抗原的基因特征。方法收集10名HBV感染的儿童血清标本,抽提血清中的HBV DNA,采用PCR扩增HBV S基因并测序,利用Genotyping软件对PCR产物序列进行分型,并分析HBV S基因的突变情况。结果 10份血清标本中,扩增出HBV S基因并成功测序6份,其余4份扩增阴性不满足测序要求。6份PCR产物所测序列标本经Genotyping比对后,均属于B型,与NCBI收录的参考序列AF100309同源性最高;5例是adw,1例是ayw。HBV S基因中编码"a"抗原决定簇的核苷酸序列突变点分别为G529A、T531C、C534A、T562A、T581A、A589C。编码"a"抗原决定簇的氨基酸序列突变点分别为I126T、P127T、S143T、G145A。核苷酸突变点G529A、T562A不引起编码"a"抗原决定簇的氨基酸序列突变,为无义突变。而其他4点突变均可引起编码"a"抗原决定簇相应氨基酸序列发生改变。结论所调查儿童主要感染B基因型HBV;其感染的HBV S抗原"a"决定簇的氨基酸序列出现I126T、P127T、S143T、G145A的突变,可能是逃避乙肝疫苗诱导的免疫保护的一种机制。

汉坦病毒江西分离株全基因组序列分析

目的了解江西省汉坦病毒新分离株Jiangxi XinjianRn-07-2011的全基因组特征。方法设计特异性引物,分段扩增毒株的S、M、L全基因,对扩增产物进行序列测定,运用DNAStar、Mega 3.1软件对序列进行拼接和分析。结果全S、M、L基因分别含1 772个、3 651个、6 530个核苷酸,分别编码429个、1 133个、2 151个氨基酸,经序列比对和系统进化分析,该病毒属汉城型汉坦病毒（SEOV）,S4亚型。S、M、L 3个基因与SEOV型病毒比较,核苷酸序列同源性分别为88.1%～98.0%、84.0%～96.1%、94.4%～95.9%;氨基酸序列同源性较高,分别为98.2%～100%、98.7%～99.5%、98.2～99.4%。结论测定了江西省新分离株Jiangxi XinjianRn-07-2011的全基因组序列,发现新分离株为SEOV,S4亚型。