血管紧张素Ⅱ正向调节高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞TLR4信号及炎性因子表达

目的观察血管紧张素Ⅱ（AnglI）对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞Toll样受体4（TLR4）信号通路与炎性因子表达的影响，论证AngⅡ对高糖环境下肾小球系膜细胞天然免疫炎性反应的正向调节作用。方法细胞同步化后分组：正常对照（5．6mmol／L葡萄糖）组、高糖（25mmol／L葡萄糖）组、AnglI（10-7mmol／L）组、高糖（25mmol／L葡萄糖）＋AnglI（10-7mmol／L）组和AngⅡ（10-7mmol／L）＋血管紧张素1型受体（ATlR）阻断剂厄贝沙坦（10-5mmol／L）组和AngII（10-7mmol／L）＋厄贝沙坦（10-5mmol／L）＋TLR4阻断剂（10mg／L）组。分别于不同时间收集细胞，12h时采用实时定量PCR检测TLR4及其转接子髓分化因子88（MyD88）的表达，24h时免疫荧光检测TLR4蛋白表达，24h时Western印迹法检测TLR4、MyD88及核因子KB（NF—KB）蛋白的表达，同时收集24h时细胞上清液用ELISA法检测白细胞介素6（IL-6）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的水平。结果与正常对照组相比，高糖和AngⅡ组作用12h时TLR4、MyD88mRNA表达显著上调（P〈0．01），24h时TLR4、MyD88以及NF—KB蛋白表达显著上调（P〈0．01），同时炎性细胞因子IL-6、MCP-1水平亦显著上调（P〈0．01）；与高糖或AngII组相比，AngⅡ和高糖共同作用肾小球系膜细胞后TLR4、MyD88和NF—KB蛋白以及IL-6、MCP-1的水平进一步上调（P〈0．01）；ATlR、TLR4阻断剂可显著下调AnglI诱导的高糖环境下系膜细胞TLR4、MyD88表达及IL．6、MCP-1水平（P〈0．01）。结论高糖和高肾素导致大鼠肾小球系膜细胞炎性因子表达增加均与TLR4．MyD88信号通路的激活相关，TLR4信号通路在糖尿病系膜细胞天然免疫炎性反应机制中发挥关键效应。AngⅡ对高糖环境下大鼠。肾小球系膜细胞炎性因子释放起正向调节作用。