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应用CRISPR/Cas9系统在G401细胞株中敲除p21基因
被引量:
1
1
作者
赵秀娟
陈万标
+6 位作者
张沛涛
张娜
楚晓文
白向阳
杨冰
吴旭东
王玺
《天津医药》
CAS
2016年第10期1190-1194,共5页
目的运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在人恶性横纹肌样瘤细胞株G401中敲除p21基因。方法通过反转录定量PCR(RT-q PCR)及Western blot检测各瘤细胞株中p21的表达,针对p21基因作用的功能域,设计了靶向人p21基因第3个外显子的向导RNA(sg RNA)...
目的运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在人恶性横纹肌样瘤细胞株G401中敲除p21基因。方法通过反转录定量PCR(RT-q PCR)及Western blot检测各瘤细胞株中p21的表达,针对p21基因作用的功能域,设计了靶向人p21基因第3个外显子的向导RNA(sg RNA),克隆入lenti CRISPR v2载体。将测序及酶切鉴定正确的重组质粒在293T工具细胞中制备慢病毒颗粒并感染G401细胞,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,显微镜下挑取单克隆细胞团并继续培养获得G401单克隆细胞株。提取单克隆细胞株RNA及蛋白,利用RT-q PCR及Western blot方法检测细胞株中p21的敲除效果。结果 p21在人横纹肌样瘤细胞中高表达。成功构建靶向p21基因的lenti CRISPRv2-sg RNA重组慢病毒质粒。与对照组相比,筛选得到的G401亚克隆细胞系中p21蛋白表达缺失。结论针对难转染的G401细胞,应用CRISPR/Cas9系统成功构建了p21基因敲除的稳定株,为后续深入研究p21在人恶性横纹肌样瘤中的作用机制奠定了基础。
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关键词
横纹肌瘤
P21
基因敲除
CRISPR/Cas9
慢病毒
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职称材料
题名
应用CRISPR/Cas9系统在G401细胞株中敲除p21基因
被引量:
1
1
作者
赵秀娟
陈万标
张沛涛
张娜
楚晓文
白向阳
杨冰
吴旭东
王玺
机构
天津医科大学基础医学院细胞
生物
学系
天津医科大学
生物
医学工程与
技术
学院
河北省保定市莲池区凌云街
江阴迪林生物电子技术有限公司
出处
《天津医药》
CAS
2016年第10期1190-1194,共5页
基金
天津市高等学校科技发展基金计划项目(093-201301)
天津市自然科学基金青年项目(16JCQNJC10300
+1 种基金
16JCQNJC12100)
国家自然科学基金资助项目(81500170)
文摘
目的运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在人恶性横纹肌样瘤细胞株G401中敲除p21基因。方法通过反转录定量PCR(RT-q PCR)及Western blot检测各瘤细胞株中p21的表达,针对p21基因作用的功能域,设计了靶向人p21基因第3个外显子的向导RNA(sg RNA),克隆入lenti CRISPR v2载体。将测序及酶切鉴定正确的重组质粒在293T工具细胞中制备慢病毒颗粒并感染G401细胞,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,显微镜下挑取单克隆细胞团并继续培养获得G401单克隆细胞株。提取单克隆细胞株RNA及蛋白,利用RT-q PCR及Western blot方法检测细胞株中p21的敲除效果。结果 p21在人横纹肌样瘤细胞中高表达。成功构建靶向p21基因的lenti CRISPRv2-sg RNA重组慢病毒质粒。与对照组相比,筛选得到的G401亚克隆细胞系中p21蛋白表达缺失。结论针对难转染的G401细胞,应用CRISPR/Cas9系统成功构建了p21基因敲除的稳定株,为后续深入研究p21在人恶性横纹肌样瘤中的作用机制奠定了基础。
关键词
横纹肌瘤
P21
基因敲除
CRISPR/Cas9
慢病毒
Keywords
rhabdomyoma
p21
gene knockout
CRISPR/Cas9
lentivirus
分类号
R73 [医药卫生—肿瘤]
R349.64 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用CRISPR/Cas9系统在G401细胞株中敲除p21基因
赵秀娟
陈万标
张沛涛
张娜
楚晓文
白向阳
杨冰
吴旭东
王玺
《天津医药》
CAS
2016
1
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