1株5型副猪格拉菌的分离鉴定及生物学特性研究

副猪格拉菌是猪的一种重要病原菌,给世界养猪业带来较大的危害和经济损失。开展副猪格拉菌的分离鉴定及特性分析研究工作,有助于为临床诊断治疗及预防提供依据。该试验对临床发病的仔猪病料进行细菌分离培养鉴定,采用革兰氏染色、生化鉴定、PCR扩增、测序比对、遗传进化分析、基因分型等方法对分离菌株进行鉴定分析,同时对其进行药敏试验及致病性研究。结果显示,分离得到副猪格拉菌,同源性分析结果显示该菌株与副猪格拉菌不同参考菌株之间的相似性介于92.3%~95.6%,基因分型显示分离株为基因型5型。分离菌株对多西环素、阿莫西林敏感,对新霉素、泰乐菌素、复方新诺明和头孢噻吩耐药。小鼠致病性试验显示其具有致病性。本试验相关结果为副猪格拉菌临床防控及治疗提供理论依据。

新流腺三联灭活疫苗对禽流感病毒和禽腺病毒流行株攻毒的免疫保护试验

为了验证鸡新城疫、禽流感(H9亚型)、禽腺病毒病(Ⅰ群,4型)三联灭活疫苗对H9亚型禽流感、禽腺病毒(Ⅰ群,4型)流行毒株的免疫保护效果,采用三联灭活疫苗免疫3周龄SPF鸡,免疫后21 d采血测定禽流感H9亚型HI抗体效价,同时分别用H9亚型禽流感病毒YT株、HD株、CX株和DL株以及禽腺病毒(Ⅰ群,4型)QD株、NJ株、HA株和CZ株进行攻毒,观察疫苗对H9亚型禽流感及禽腺病毒(Ⅰ群,4型)流行毒株的免疫保护效果。结果显示,免疫组禽流感H9亚型HI抗体效价几何平均值为1∶676~1∶832,对照组试验鸡HI抗体均<1∶2;用H9亚型禽流感病毒YT株、HD株、CX株和DL株攻毒,对照组鸡9/10~10/10发病,免疫组鸡均9/10以上保护;用禽腺病毒(Ⅰ群,4型)QD株、NJ株、HA株和CZ株攻毒,对照组鸡9/10~10/10发病,免疫组鸡均10/10保护。表明新流腺三联灭活疫苗对2020-2022年分离的H9亚型禽流感病毒及禽腺病毒(Ⅰ群,4型)流行毒株感染具有良好的免疫保护效果。

兽用生物制品使用过程中的常见问题及注意事项

畜禽传染性疾病目前仍是制约畜牧业快速发展的主要因素之一,而免疫接种仍是预防传染性疾病的有效手段,只有保证免疫接种的成功效果,增强动物的抵抗力,才能有效抵御畜禽传染性疾病的流行。其中,正确使用疫苗是保证畜禽免疫接种成功的重要手段之一,疫苗的免疫效果受到疫苗质量、储运条件、稀释方法、免疫途径、动物健康状况等诸多因素影响,任何一个环节处理不当都会导致免疫效果下降,甚至造成免疫失败,有时还会因免疫操作不当,诱发疫病,造成疫病的流行。

非洲猪瘟背景下蛋鸡规模化养殖场生物安全操作启示

随着国内家禽规模化养殖的不断扩大及深入,家禽规模化养殖体量占据养殖的比例也不断攀升,生物安全制度和操作水平也有了很大的进步和提升。自2018年8月份国内暴发非洲猪瘟疫情后,尤其是国内一些现代化、标准化、规模化养猪场也陆续发生疫情,我们对于目前国内规模化蛋鸡养殖场的生物安全防护现状不得不去重新思考和审视。

基因Ⅶ型新城疫病毒的免疫及生物学基础

基因Ⅶ型新城疫已成为我国禽业养殖中的主要新城疫类别,在商品肉鸡和蛋鸡养殖临床中成为防治重点,本文从基因Ⅶ型新城疫病毒的分子生物学基础上进行分析,结合生产实践,为养殖一线制定切实可行的防治措施提供比较有价值的参考。

传染性法氏囊病病毒新型变异株VP2蛋白原核表达及免疫效果评价

【目的】构建传染性法氏囊病病毒新型变异株(vaIBDV)VP2蛋白原核表达质粒,并明确VP2蛋白的免疫原性,为vaIBDV亚单位疫苗的开发提供技术支持。【方法】从IBDV新型变异株(BZ)中扩增VP2基因片段,亚克隆至pET-28a(+)载体上构建重组原核表达质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG诱导表达后通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定,并以vaIBDV阳性血清进行琼扩效价测定;经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后,制备乳化疫苗并免疫21日龄SPF鸡,通过安全性检验、抗体效价测定及攻毒保护评价进一步验证融合蛋白VP2的免疫原性。【结果】在25℃下以IPTG进行诱导表达,获得的融合蛋白VP2主要呈可溶性表达,大小约40 kD,且表达上清液中的融合蛋白VP2能与vaIBDV阳性血清发生特异性反应,其琼扩效价可达1∶32;经Ni-NTA亲和层析纯化及适当浓缩后,融合蛋白VP2的琼扩效价高达1∶256。以融合蛋白VP2为抗原制备的亚单位疫苗稳定性好,安全性高,无免疫引起的不良反应,剖检也未发现接种部位有明显损伤、局部炎症或疫苗吸收不良等现象。免疫21 d后鸡血清琼扩效价平均值达1∶76.8,而血清抗体效价均在1∶20000以上,表明以融合蛋白VP2制备的疫苗可刺激机体产生强烈的体液免疫反应,抗体阳性率达100%;使用IBDV BZ株攻毒后7 d剖检观察鸡法氏囊病变情况,结果显示免疫组鸡只均未发病,其法氏囊也无明显萎缩现象,即免疫保护率达100%。【结论】通过原核表达系统能成功实现vaIBDV VP2蛋白的可溶性表达,且获得的融合蛋白VP2免疫原性良好,能对vaIBDV提供100%的免疫保护效果,为开发vaIBDV亚单位疫苗提供了技术支持。

猪链球菌2型实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

试验根据猪链球菌2型荚膜多糖（CPS）抗原设计 CPS2J 基因特异性引物,建立猪链球菌2型实时荧光定量 PCR 检测方法。结果显示,该方法的标准曲线为 y=-3.073x＋36.87,r=0.995,熔解曲线只有单一的特异峰。敏感性试验显示,该方法可以检测出模板最低浓度为1.0×10^1拷贝/μL,是普通 PCR 的10倍；特异性试验显示,对猪链球菌2型具有良好的特异性,能够区分其他血清型猪链球菌和其他细菌；重复性试验变异系数为0.37%-0.63%,均低于2.5%。临床检测显示该方法的敏感性明显高于常规 PCR 方法和细菌分离的方法。以上结果表明,本研究建立的方法敏感性高、特异性强、重复性好,有利于对猪链球菌2型的快速检测。

鸡滑液支原体的分离鉴定与多位点序列分型

为研究国内鸡滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)的流行情况,2016-2021年间从山东、四川、河北等9省份共计分离到54株MS,通过多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)方法对分离株进行基因分型,同时结合国内外的分离株信息,进一步分析了不同菌株间的进化关系。结果表明,54株MS分离株可分为9种ST型,分别是34、44、93、95、96、102、103、148、153,主要流行的ST型为ST34和ST93;按照进化关系可分为A-I共9类,其中最主要的流行株为A类和E类。通过对国内外MS流行株进行遗传进化分析,可依据地域将其分为亚洲株、欧洲株、北美株和其他株,其中中国分离株有独特的地域进化分支。本研究结果丰富了国内的MS流行病学数据,对防控与净化MS具有重要意义。

鸡心包积水综合征疫苗研究进展

心包积水综合征是由I亚群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)引起的一种新型鸡传染病。本病发病急,传播速度快,造成雏鸡的高死亡率,给养鸡业造成严重的经济损失。该病于1987年在巴基斯坦靠近卡拉奇的安卡拉首先被报道,我国最早于2013年有发病报道,2014年后在河南、山东、江苏等地流行。针对本病目前无特效疗法,疫苗免疫是防控本病的较好方法。在巴基斯坦等心包积水综合征早先流行比较严重的国家和地区,研制的自家疫苗对预防本病有一定效果,但是也存在保护效果不稳定、继发感染等风险;全病毒灭活疫苗安全性高,稳定性好,但成本较高。此外,活疫苗也展现出较好的防控效果,但存在毒力返强等问题,重组亚单位疫苗则因其安全、高效在未来具有良好的开发和应用前景。论文就鸡心包积水综合征疫苗的研究进展加以总结,以期为更好的防控本病提供参考。

新城疫的合理免疫及常见疫苗使用误区

新城疫是由新城疫病毒引起的危害多种家禽特别是陆生禽类的最主要的传染病之一,疫苗免疫接种是目前国内预防该病的主要防疫手段。试验研究及临床实践结果表明,使用与流行株基因型匹配的疫苗株,并采用新城疫活疫苗配合灭活疫苗的免疫方式,可起到体液免疫及细胞免疫的双重作用,其中黏膜免疫在预防新城疫中也发挥重要作用。笔者在长期基层养殖技术服务中发现,很多养殖场在新城疫疫苗的使用方案、方法及免疫程序等方面存在一些误区,严重干扰了疫苗发挥作用,从而造成临床新城疫的发病。

肉鸡盈利新概念

肉鸡养殖过程中如何获得更高的经济效益是养殖户的终极目标，也是兽医工作者努力奋斗的方向。根据肉鸡疾病发展迅速且不易控制的特点而知养好肉鸡关键在于预防，大量临床实践证明只要是鸡群发病。就会增加治疗成本和死淘率损失等成本支出，从而减少经济收益。因此实践养殖中想要获得满意的经济效益．就必须从饲养管理入手预防疾病的发生和发展。怎样做才能获取更高的经济效益呢？笔者通过大量的实践经验和临床分析建议从以下几点人手：1勤擦洗水槽饮水是肉鸡养殖中的关键一步，

当前引起鸡产蛋率下降的病因分析

1发病及流行特点 该病是2010年末开始发生至今,具有一定的区域性流行性,病情发展迅速,迄今为止河北、河南、江苏、山西、山东、东北等省份的大中小型鸡场均有报道,

商品蛋鸡滑液囊支原体的流行与防治

鸡滑液囊支原体病是由鸡滑液囊支原体（Mycoplasma Synoviae,MS）引起鸡的一种以关节渗出性的滑液囊膜炎及腱鞘滑膜炎为特征的急性或慢性传染病。鸡感染后引起传染性滑膜炎和粘液囊炎的发生,可导致明显跛行,引起呼吸道疾病,产蛋率及孵化率降低,并导致生长迟缓及饲料转化率降低,胴体降级使屠体废弃率升高等。目前该病呈世界性分布,给全球养禽业带来较大经济损失。

猪链球菌2型分离鉴定及其对小鼠的致病性分析

为了解猪链球菌2型菌株对昆明小鼠的致病性,并建立其感染昆明小鼠模型,本试验分别取2头疑似患链球菌病的病死猪脑组织、血液分别涂布于含5%胎牛血清的TSA固体培养基中进行细菌分离;并对分离获得的细菌进行形态观察、PCR鉴定、药物敏感性试验、小鼠致病性试验及组织病理切片观察。结果显示,分离菌为革兰氏阳性短链球菌,经PCR鉴定为猪链球菌2型,命名为LY株;药敏试验证实LY株对青霉素、红霉素、氯霉素、苯唑西林、环丙沙星、诺氟沙星敏感,对四环素、多粘菌素B、克林霉素不敏感;LY株对小鼠致死剂量为2.2×10^(9) cfu/只;组织病理切片观察发现小鼠肺脏、脾脏及心肌均出现不同程度的病变。本研究明确了山东省猪链球2型毒株的毒力,为疫苗候选菌株的筛选提供了理论依据。

鸭疫里默氏杆菌病疫苗研究进展

鸭疫里默氏杆菌病是危害水禽养殖健康发展的主要疫病,本文从疫苗的应用类型及免疫机理两方面对该病疫苗近年来相关研究进行了综述。

猪等孢球虫病的诊治

猪等孢球虫（Isospora suis,I.suis）是引起仔猪腹泻的病原之一。猪等孢球虫虫体主要寄生于仔猪的小肠上皮细胞,尤以空肠和回肠最为多见,主要引起仔猪消化功能障碍,其中哺乳期和新近断奶的仔猪最为易感。在集约化生产养殖过程中,由于饲养密度高、存栏量大、温度适宜等原因,等孢球虫的感染呈上升趋势。

鸡TRAF6和TIFA蛋白的序列分析与相互作用验证

旨在对鸡肿瘤坏死因子受体相关因子6 (tumor necrosis factor(TNF) receptor-associated factor 6, TRAF6)和肿瘤坏死因子受体相关因子相互作用的具有叉形头相关结构域蛋白(TNF receptor associated factor (TRAF)-interacting protein with a forkhead-associated(FHA) domain, TIFA)进行序列分析,并进行蛋白质相互作用验证。本研究首先以鸡胚成纤维细胞提取的总RNA反转录产物为模板扩增鸡 TRAF 6和 TIFA 基因的CDS区,分别构建重组真核表达载体pCMV-HA- TRAF 6和pEGFP-C1- TIFA;运用生物信息学软件ProtParam、SOPMA、SWISS-MODEL、MegAlign和PSORTⅡ分别对鸡TRAF6和TIFA蛋白理化性质、二级和三级结构、氨基酸同源性、功能结构域保守性和亚细胞定位进行分析。将重组真核表达载体共转染细胞,通过荧光共定位和免疫共沉淀(Co-IP)试验验证鸡TRAF6和TIFA蛋白之间的相互作用。结果,成功扩增鸡 TRAF 6和 TIFA 基因,并构建其重组真核表达载体pCMV-HA- TRAF 6和pEGFP-C1- TIFA 。序列分析结果显示,鸡 TRAF 6和 TIFA 基因CDS区分别为1 638和564 bp,共编码545和187个氨基酸,分子量约为62 和22 ku。蛋白质二级和三级结构分析结果表明,鸡TRAF6和TIFA蛋白均以无规则卷曲和α螺旋为主。氨基酸同源性分析结果发现,鸡与人和其他哺乳动物TRAF6和TIFA蛋白的同源性分别为76.4%~80.3%和49.7%~53.3%,而与非洲爪蟾的同源性分别为69.4%和49.7%,并且鸡TRAF6和TIFA蛋白的功能结构域存在多个氨基酸位点变异。亚细胞定位预测结果表明,鸡TRAF6和TIFA蛋白主要定位在细胞核。荧光共定位和Co-IP试验结果显示,鸡TRAF6和TIFA蛋白在细胞核中具有共定位,并且存在相互作用。本研究结果显示,鸡与人和其他哺乳动物以及非洲爪蟾TRAF6和 TIFA 蛋白的同源性及功能结构域保守性均较低,但鸡TRAF6和TIFA蛋白能在细胞核中发生相互作用,这可为进一步研究鸡TRAF6和TIFA蛋白相互作用调控鸡相关病毒复制的作用机制奠定基础。

猪繁殖与呼吸综合征发病猪群猪链球菌的分离与2型链球菌的鉴定

应用常规方法和PCR技术,对2006—2010年安徽不同地区猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒检测为阳性的病料(肺脏)进行链球菌的分离及2型链球菌的鉴定。结果显示,136份病料中分离鉴定出19株链球菌,分离率为14.0%。利用链球菌2型特异性引物对19株分离菌进行PCR鉴定,结果显示,5株分离菌扩增出675 bp的特异性条带,表明安徽省猪高热病的发生与猪繁殖与呼吸综合征引起的继发或混合感染链球菌密切相关。

当前国内原料乳掺假状况及原因分析与对策

原料乳掺假严重阻碍了乳品工业的健康发展,本文围绕当前原料乳掺假的状况、原因及相关对策进行了论述。

一例鸡传染性支气管炎的诊断

本文对一例鸡传染性法氏囊疑似病例的进行实验室诊断,通过鸡胚接种、琼扩试验以及回归易感动物试验等实验室检验技术,最终将此病例诊断为传染性支气管炎(肾型)。通过这个病例,对鸡传染性法氏囊病与传染性支气管炎(肾型)的剖检变化进行鉴别诊断,找出二者的根本区别,对临床诊断具有指导意义。