液相色谱-串联质谱法在药物代谢研究中应用最新进展

液相色谱-质谱联用技术因其具有高分离能力、高灵敏度、应用范围广和较强的专属性等特点,已成为一种重要的现代分离分析技术。串联质谱法比单极质谱具有更高的灵敏度和选择性,可以得到更多的结构信息。本文首先介绍了液相色谱-串联质谱法中串联质谱基本原理、常见质谱质量分析器及其特点、串联质谱的连接方式和数据采集方法等。然后将其在药物代谢研究中的主要应用作简要介绍,主要包括利用串联质谱测定药物的代谢动力学参数,利用几种串联质谱应用方式对药物代谢物的结构进行鉴定,概括了每种方式的优劣,总结了串联质谱在药物代谢物结构鉴定中的应用策略,并对其在药物代谢未来的应用进行了展望。

金枳黄利胆排石片质量标准研究

目的:建立金枳黄利胆排石片的质量标准。方法:采用TLC法对大黄、枳实、香附进行定性分析,采用HPLC法测定黄芩中的黄芩苷含量。结果:TLC图谱斑点清洗,阴性液无干扰,黄芩苷0.3184～1.5920πμg(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率为98.16%,RSD为1.5%(n=5)。结论:该方法专属性强,灵敏度高,重复性好,可用于金枳黄利胆排石片的质量控制。

抗2型糖尿病新药利拉利汀

利拉利汀是继西他列汀、沙格列汀后的二肽基肽酶-4抑制剂,与饮食和运动结合用于改善2型糖尿病患者的血糖控制能力。现有临床研究表明,利拉利汀是一个口服有效、可能有市场前景的药物。文中对利拉利汀的作用机制、药效学、药代动力学、药物相互作用、临床评价和安全性等进行综述。

LC-MS-MS法研究琥乙红霉素颗粒的生物等效性

目的：建立人血浆中琥乙红霉素和红霉素的LC-MS-MS测定法，并评价琥乙红霉素颗粒的人体生物等效性。方法：20例男性健康志愿者随机交叉单剂口服0．5g琥乙红霉素颗粒和琥乙红霉素胶囊。以罗红霉素为内标，用LC-MS-MS法测定琥乙红霉素血药浓度。用DAS2．1药动学程序处理血药浓度数据。结果：琥乙红霉素的线性范围为2～2500μg·L^-1，提取回收率为73．1％～91．1％；红霉素的线性范围为2～4000μg·L^-1，提取回收率为71．4％～91．7％。琥乙红霉素受试制剂和参比制剂的药动学参数为：Cmax为（591±144）和（576±133）μg·L^-1，Tmax为（0．80±0．39）和（0．81±0．40）h，t1/2为（1．49±0．72）和（1．15±0．57）h，AUC0-t为（1085±304）和（1074±301）μg·L^-1·h；红霉素的药动学参数为：Cmax为（1150±290）和（1158±318）μg·L^-1，Tmax为（0．83±0．38）和（0．84±0．38）h，t1/2为（2．68±0．51）和（2．58±0．75）h，AUC0-t为（2821±454）和（2887±545）μg·L^-1·h。以AUC0-t计算，琥乙红霉素和红霉素的相对生物利用度分别为（106．1±12．8）％和（99．6±11．9）％。结论：本方法灵敏、准确、简便，适用于临床药动学研究；两制剂生物等效。

HPLC-MS法测定人血浆中的阿奇霉素及其人体药动学研究

目的：建立高效液相-质谱法（HPLC-MS）测定人血浆中阿奇霉素的浓度,用于研究阿奇霉素片的人体药动学。方法：采用HPLC-MS法测定18名健康志愿者单剂量口服阿奇霉素片受试和参比制剂各500 mg后的血药浓度,计算药动学参数,以判定生物等效性。结果：阿奇霉素的线性范围为10~1 000μg.L^-1,日内、日间精密度均〈10%。受试制剂和参比制剂的Cm ax分别为（594.9±195.7）和（586.3±186.5）μg.L^-1;Tm ax为（2.02±0.91）和（1.70±0.80）h;T1/2为（29.20±8.38）和（27.28±7.62）h;AUC0~t为（4 736±1 317）和（4 567±1 129）μg.h.L-1。受试制剂的相对生物利用度为（104.0±14.6）%。结论：本研究建立的方法快速灵敏,适用于阿奇霉素人体药动学研究,统计学结果表明2种制剂具有生物等效性。

氢溴酸右美沙芬口腔崩解片的生物等效性研究

目的：研究氢溴酸右美沙芬口腔崩解片和氢溴酸右美沙芬片的生物等效性。方法：采用两制剂双周期双交叉前后自身对照试验设计,20名健康男性志愿者分别口服单剂量氢溴酸右美沙芬口腔崩解片和氢溴酸右美沙芬片各60 mg（受试制剂和参比制剂）,用高效液相色谱（HPLC）-荧光检测法测定血浆中氧去甲右美沙芬的浓度,采用DAS2.0程序对药动学参数进行方差分析和双单侧t检验。结果：受试制剂和参比制剂在受试者体内的药动学参数分别为：t1/2（3.690±1.383）和（3.849±1.662）h,Cmax（989.200±232.444）和（950.149±208.194）ng.mL^-1,Tmax（1.850±0.462）和（1.950±0.426）h,AUC0-t（5 308.177±1 245.531）和（5 302.158±1 217.175）ng.h.mL^-1。以AUC0-t计算,与参比制剂相比受试制剂中氧去甲右美沙芬的平均相对生物利用度为（100.7±13.9）%。结论：统计结果表明,两种制剂在人体内具有生物等效性。

高效液相色谱法测定人血浆中扎托布洛芬的浓度

目的建立高效液相色谱法测定人血浆中扎托布洛芬浓度的方法。方法采用沉淀法,将待测血浆样品经乙腈沉淀后,以双氯芬酸钠为内标,用高效液相色谱法进行检测。采用Platisil ODS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:0.05 mol.L-1磷酸二氢钠(三乙胺调pH=5.1)-乙腈(58∶42);流速:1.2 mL.min-1;检测波长:330 nm。结果本方法扎托布洛芬标准曲线范围为0.05～30.00μg.mL-1(n=7),r>0.99,最低定量浓度0.05μg.mL-1。日内和日间RSD均<7.9%。提取回收率为74.13%～78.64%,内标提取回收率为80.32%～86.13%。结论该方法简便、快速,灵敏度高,专属性强,适用于人血浆中扎托布洛芬浓度的测定。

阿魏酸钠片在健康人体中的生物等效性研究

目的:研究阿魏酸钠在健康人体的药动学和生物等效性。方法:采用双交叉随机自身对照试验设计,20例健康男性志愿者分别单剂口服两种阿魏酸钠片(参比制剂和受试制剂)100 mg,应用高效液相-紫外检测法测定血浆中阿魏酸钠的浓度,血药浓度-时间数据经DAS 2.1软件处理后得药动学数据,并进行等效性检验。结果:参比制剂与受试制剂的主要药动学参数分别为Cmax(1 230.3±124.1)和(1 272.6±125.5)μg.L-1,Tmax(25.0±5.9)和(25.3±5.5)m in,t1/2(50.1±19.8)和(46.1±12.6)m in,AUC0-t(72 831.6±11 107.5)和(75 679.8±10 193.4)μg.L-1.m in,AUC0-∞(74 826.4±11 259.6)和(78 149.8±10 709.0)μg.L-1.m in,受试制剂对参比制剂的平均相对生物利用度为(104.9±7.9)%。主要药动学参数进行方差分析和双单侧t检验,Tmax采用非参数检验,结果显示差异无统计学意义。结论:两种阿魏酸钠片具有生物等效性。

盐酸维拉佐酮的药理作用和临床研究

据世界卫生组织预测,全球抑郁症患者约3亿人,是继心血管疾病之后,第2位导致残疾的疾病[1]。我国普通人群中内源性抑郁症的终身患病率大约为15%,女性患病率为10%～25%,男性为5%～12%,约75%的患者终生有复发的风险[2-3]。重度抑郁症（major depressive disorder,MDD）又称严重抑郁障碍,是导致残疾及缩短生命的十大类疾病之一,也是引起自杀的常见原因[4]。在欧美国家,

酒石酸美托洛尔片在健康人体中的生物等效性研究

目的:研究国产与进口酒石酸美托洛尔片的生物等效性。方法:采用双交叉随机自身对照试验设计,20名健康男性志愿者分别单剂口服2种酒石酸美托洛尔片(参比制剂和受试制剂)100 mg,应用高效液相-荧光检测法测定血浆中美托洛尔的浓度,经DAS 2.1软件处理后得药动学数据,并进行等效性检验。结果:参比制剂与受试制剂的主要药动学参数分别为C_(max)(457.2±112.6)和(480.9±107.6)ng·mL^(-1),T_(max)(1.43±0.34)和(1.25±0.44)h,t_(1/2)(3.20±0.97)和(3.48±1.36)h,AUC_(0-24h)(2 241±864)和(2 169±873)ng·h·mL^(-1),AUC_(0-∞)(2199±889)和(2264±870)ng·h·mL^(-1),受试制剂对参比制剂的平均相对生物利用度为(104.6±16.9)%。将主要药动学参数经方差分析和双单侧t检验,T_(max)采用非参数检验,结果显示,差异无统计学意义。结论:2种酒石酸美托洛尔片具有生物等效性。

替硝唑片在健康人体的生物等效性

目的比较2种替硝唑片的人体相对生物利用度,并进行生物等效性评价。方法按照两制剂两周期随机交叉设计,选择20名健康志愿者单剂量口服受试制剂或参比制剂各2片,用HPLC-UV法测定其血药浓度,DAS软件处理血药浓度数据和计算参数,并进行统计学分析。结果替硝唑受试和参比制剂AUC0→60分别为(441±54)和(449±43)μg·h·mL-1,AUC0→∞分别为(487±61)和(488±49)μg·h·mL-1;Cmax分别为(19.45±3.39)和(20.28±2.85)μg.mL-1;tmax分别为(2.90±1.54)和(2.53±1.69)h,两者无明显差异。替硝唑片的相对生物利用度为(98.3±7.7)%。结论 2种制剂具有生物等效性。

复方甘草酸苷胶囊的生物等效性研究

目的建立人血浆中甘草酸苷的代谢产物——甘草次酸的高效液相色谱-质谱测定法,并评价2种制剂的人体生物等效性。方法 18例男性健康受试者随机分成2组,分别交叉口服复方甘草酸苷胶囊4粒（含甘草酸苷100mg）和复方甘草酸苷片4片（含甘草酸苷100 mg）后,采用HPLC-MS法测定人血浆中甘草次酸的浓度。结果血浆中甘草次酸的最低定量限为5 ng·mL^-1,在5500 ng·mL^-1与峰面积线性关系良好。提取回收率为70.2%82.2%。受试制剂与参比制剂的各主要药动学参数：t1/2分别为（11.25±3.02）和（11.61±2.55）h,Cmax为（376.0±77.1）和（356.8±69.6）ng·mL^-1,tmax为（11.56±2.43）和（10.22±2.98）h,AUC0-t为（5 742±1 689）和（5 882±1 645）ng·h·mL^-1。结论本方法灵敏、准确、简便,适用于临床药动学及生物等效性研究;两种制剂具有生物等效性。

国产与进口赖诺普利片在健康人体的药代动力学和生物等效性

目的评价国产与进口赖诺普利片(降血脂药)在健康人体的药代动力学和生物等效性。方法 20名健康男性受试者随机分组,按自身交叉、单剂量口服赖诺普利受试和参比制剂各20mg后,用高效液相色谱-串联质谱法测定血浆中赖诺普利的浓度,非房室模型法计算各主要药代动力学参数,并进行方差分析和生物等效性评价。结果赖诺普利片受试制剂和参比制剂的tm ax分别为(6.00±0.46),(6.35±0.88)h;Cm ax分别为(81.47±40.92),(80.91±37.45)ng·mL-1;t1/2分别为(10.99±6.12),(10.71±3.40)h;AUC0-48分别为(784.90±379.40),(815.40±377.60)ng·h·mL-1;AUC0-∞分别为(838.50±392.00),(868.00±392.20)ng·h·mL-1,受试制剂的相对生物利用度F为(97.1±11.9)%。结论国产与进口赖诺普利片具有生物等效。

氨酚咖黄烷胺片在人体的生物等效性研究

目的:研究氨酚咖黄烷胺的药物动力学和生物等效性。方法:按双周期随机交叉试验设计,24名健康男性受试者分别单次口服受试试剂和参比试剂后,HPLC法测定血浆中对乙酰氨基酚、咖啡因的浓度,HPLC-MS/MS法测定血浆中金刚烷胺的浓度。结果:口服受试试剂和参比试剂后,对乙酰氨基酚的t_(1/2)分别为(3.93±1.66)和(3.56±1.38)h,C_(max)分别为(6.301 2±0.840 8)和(6.695 6±1.260 0)μg·ml^(-1),t_(max)分别为(0.79±0.42)和(0.77±0.59)h,AUC_(0-t)分别为(26.2±5.4)和(27.0±5.6)μg·h·ml^(-1);对乙酰氨基酚的相对生物利用度为(98.1%±15.1)%。咖啡因的t_(1/2)分别为(6.50±2.53)和(6.70±2.37)h,C_(max)分别为(795.1±182.5)和(811.8±194.1)ng·ml^(-1),t_(max)分别为(0.89±0.61)和(0.98±0.69)h,AUC_(0-t)分别为(7 008±2 615)和(7 330±2 669)ng·h·ml^(-1);咖啡因的相对生物利用度为(96.7%±18.7)%。金刚烷胺的t_(1/2)分别为(13.29±4.04)和(11.76±3.63)h,C_(max)分别为(295.3±80.5)和(303.0±72.4)ng·ml^(-1),t_(max)分别为(2.10±1.13)和(2.13±1.17)h,AUC_(0-t)分别为(4 158±1 653)和(4 097±1 366)ng·h·ml^(-1);金刚烷胺的相对生物利用度为(104.5±32.7)%。结论:受试试剂与参比试剂真有生物等效性。

盐酸氨溴索干混悬剂的人体生物等效性研究

目的:研究盐酸氨溴索干混悬剂和盐酸氨溴索片的生物等效性。方法:24名健康志愿者分别单剂量口服盐酸氨溴索干混悬剂(受试制剂)和盐酸氨溴索片(参比制剂)各90 mg,采用反相高效液相色谱法测定血浆中盐酸氨溴索的浓度。采用Das 2.0程序计算其药动学参数。结果:受试制剂和参比制剂的主要药动学参数分别为:t1/2(7.968±3.212)和(7.176±3.512)h;Cmax(0.173±0.070)和(0.174±0.072)μg.mL-1;Tmax(0.969±0.450)和(0.927±0.116)h;AUC0-t(1.149±0.237)和(1.141±0.244)μg.h.mL-1。以AUC0-t计算,与参比制剂相比受试制剂中盐酸氨溴索的平均相对生物利用度为(102.0±15.1)%。结论:两种制剂具有生物等效性。

高效液相色谱法测定人血浆中盐酸氨溴索的浓度

目的建立HPLC测定人血浆中盐酸氨溴索含量的方法。方法选用Diamonsil-C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.0)-四氢呋喃(700∶320∶25,v/v/v),流速:1.2 ml/min,检测波长:242 nm,柱温:室温。结果该方法低、中、高3种浓度的提取回收率为88.2%～104.8%,日内、日间相对标准差为2.7%～5.3%(n=6),在10.2～610.8 ng/ml范围内线性关系良好。结论本法简便、灵敏、专属性强,能满足含量测定及体内药代动力学研究的需要。

HPLC-MS/MS法测定人血浆中千金藤素的浓度

目的建立人血浆中千金藤素浓度的HPLC-MS/MS测定法。方法血浆样品1.0 mL经甲基叔丁基醚萃取后,以2.5 mmol/L醋酸铵(含0.05%甲酸)-甲醇(40∶60)为流动相,采用ZORBAX Eclipse XDB-C8(150 mm×4.6 mm,5μm)柱分离,采用电喷雾电离化(ESI)方式和多反应离子监测(MRM)模式进行正离子检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 607.2→365.1(千金藤素)和m/z 247.2→98.0(内标甲哌卡因)。结果千金藤素血药浓度线性范围为0.10～208.40 ng/mL,定量下限为0.10 ng/mL。低、中、高3个浓度提取回收率分别为72.3%、76.8%、79.5%。结论该法操作简便、快速、灵敏,适用于千金藤素在人体内的药代动力学研究。

LC-MS/MS法测定人血浆中非布司他及其活性代谢物67M-4的质量浓度

目的建立测定人血浆中非布司他及其活性代谢物67M-4质量浓度的LC-MS/MS方法。方法采用乙腈沉淀蛋白法处理血浆样品,采用不同的LC-MS/MS条件分别测定血浆中极性差异较大的非布司他和67M-4的质量浓度。非布司他的测定采用Platisil ODS（150 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱和体积分数0.1%甲酸溶液-乙腈（体积比30∶70）为流动相;67M-4的测定采用Zorbax SB-C18（50 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱和体积分数0.2%甲酸溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱。质谱检测采用多反应离子选择监测（MRM）方式。结果血浆中非布司他和67M-4的质量浓度分别在0.010 00～15.06 mg·L-1和0.505 0～202.0μg·L-1内线性关系良好,提取回收率分别为88.0%～93.5%和88.7%～96.2%,方法的专属性,日内、日间精密度及基质效应均符合测定要求。结论该方法灵敏、可靠,适用于非布司他在人体内的药代动力学研究。

扎鲁司特胶囊在健康人体的生物等效性

目的评价扎鲁司特胶囊与扎鲁司特片(均平喘药)在健康人体内的生物等效性。方法 20名健康男性志愿受试者随机分为2组,用双周期自身交叉、单剂量口服扎鲁司特胶囊(受试制剂)和扎鲁司特片(参比制剂)各20 mg后,用HPLC/MS-MS法测定扎鲁司特的血浆浓度,并计算药代动力学参数。结果受试制剂和参比制剂的主要药代动力学参数:tmax分别为(1.50±0.76),(1.63±0.48)h;Cmax分别为(505.34±208.73),(449.62±191.80)ng·mL-1;t1/2分别为(7.60±4.87),(7.36±4.50)h;AUC0-48分别为(1362±534),(1260±581)ng·h·mL-1;AUC0-∞分别为(1371±537),(1268±588)ng·h·mL-1。受试制剂的相对生物利用度为(113.6±29.7)%。结论扎鲁司特胶囊与扎鲁司特片具有生物等效性。

司帕沙星片在健康人体的药动学和生物等效性研究

目的建立HPLC内标法测定血浆中司帕沙星含量,并研究司帕沙星片的相对生物利用度及生物等效性。方法 20名健康志愿者分2组,随机、交叉口服试验制剂与参比制剂的司帕沙星片0.4 g,测定其血药浓度,计算药物动力学参数及生物等效性评价。结果试验制剂与参比制剂血浆中司帕沙星的tmax为(4.68±0.44)和(4.55±0.51)h;Cmax为(1 560.4±243.9)和(1 584.1±273.9)ng.mL-1;t1/2为(20.92±4.85)和(19.81±3.75)h;用梯形法计算AUC0-t为(43 325±12 174)和(44 139±11 815)ng.h.mL-1;AUC0-∞为(45 452±12 884)和(45 999±12 629)ng.h.mL-1。以AUC0-t计算,试验制剂的平均相对生物利用度为(97.9±5.8)%。结论该法操作简便,快速灵敏,可用于测定血浆中的司帕沙星浓度;司帕沙星的两制剂具有生物等效性。