miR-218表达质粒的构建及其在肾癌769-P细胞中的表达

目的 构建miR-218的稳定表达质粒,为研究miR-218在人类肾癌中的表达和作用机制打下实验基础.方法 应用pcDNA3.1（＋）载体,以人Has-miR-218设计引物,聚合酶链反应（PCR）法进行扩增,再与载体相连接,构建稳定表达质粒.应用质粒对肾癌769-P细胞系进行转染,并测定细胞中miR-218的表达.结果 构建质粒产物经过酶切及测序结果鉴定正确,用构建好的表达质粒pcDNA3.1-miR-218转染人类肾癌细胞769-P后,细胞miR-218表达明显升高（相对表达量为1.64）.结论 成功构建了miR-218表达质粒pcDNA3.1-miR-218,该质粒可应用于研究miR-218在肾细胞癌中的功能及作用机制.

miRNA-218对裸鼠肾细胞癌调控作用的研究

目的观察miRNA-218对裸鼠肾细胞癌的作用。方法将pcDNA3．1-miR-218质粒及其对照空载体质粒分别转染至人肾癌细胞株A498、769．P，然后将转染后的细胞株按分组接种至裸鼠体内，观察裸鼠的机体及肿瘤的变化情况，并测定相应组织中miRNA-218的表达情况。结果A498＋pcDNA3．1．miR-218转染组荷瘤裸鼠在第25天开始体质量减轻程度均较对照组低，肿瘤体积在第10天后即较对照组小，差异均有统计学意义（均P〈0．05）；769-P＋pcDNA3．1-miR-218转染组荷瘤裸鼠在第19天开始体质量减轻程度均较对照组低，肿瘤体积在第10天后即较对照组小，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。组织学检测两细胞miRNA-218转染组荷瘤裸鼠肿瘤组织miRNA-218表达量均较对照组增高，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论裸鼠体内实验证实，miRNA-218表达上调能够抑制肾肿瘤的生长。