肿瘤特异性凋亡基因对荷瘤小鼠基因治疗的实验研究

为研究肿瘤特异性凋亡基因对肿瘤的基因治疗作用,以S-180肉瘤细胞的荷瘤小鼠为模型,用克隆了肿瘤特异性凋亡基因的真核表达载体直接进行基因治疗,同时以生理盐水、真核载体为对照。结果表明,与对照组相比,基因治疗组小鼠一般生长状态良好,体内肿瘤生长明显减缓(P<0.01),生存期延长,体重增加,在肿瘤组织中可检测到肿瘤特异性凋亡基因mRNA的表达。结论:肿瘤特异性凋亡基因在体内具有明显的抗肿瘤作用,对开展肿瘤的基因治疗有一定的临床意义。

肿瘤特异性凋亡基因对人黑色素瘤细胞A375凋亡诱导作用

为观察肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)对人黑色素瘤细胞A375的凋亡诱导作用,用含有凋亡基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375,采用台盼蓝染色法、RT-PCR及DNA凝胶电泳等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果表明,凋亡基因瞬间转染的人黑色素瘤细胞A375可出现明显的细胞凋亡;而且凋亡细胞的数量与转染时间有关。结论:凋亡基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用。

鸡贫血病毒vp3基因融合表达载体的构建及表达

为构建鸡贫血病毒vp3基因(肿瘤特异性凋亡基因)的原核融合表达载体,并在大肠杆菌中进行表达,采用常规分子克隆技术,将vp3基因克隆入融合表达载体pGEX-4T-2中,氯化钙法转化大肠杆菌DH5α。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导、用SDS-PAGE检测表达产物。经限制性内切酶酶切和PCR扩增,表明vp3基因成功地克隆到原核表达载体上,分子量为380 bp;SDS-PAGE电泳显示,构建的表达载体表达出分子量(Mr)约为39 600的融合蛋白,与预期的结果相符。结论:采用上述方法可成功地构建vp3蛋白的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得有效表达,对于vp3蛋白的大量制备、深入研究其诱导肿瘤细胞的性质具有实际意义。

构建SARS病毒E2蛋白保护性抗原原核表达载体

目的 构建SARS病毒E2蛋白保护性抗原片段的原核表达载体 ,为SARS的诊断和预防奠定基础。方法 采用人工合成法合成SARS病毒E2蛋白 3’端cDNA ;采用常规分子克隆方法将此cDNA片段克隆入原核表达载体 pBV2 2 0中 ,经温度诱导和SDS -PAGE电泳证明外源蛋白表达。 结果 合成的E2蛋白cDNA经序列测定表明 ,与报道的SARS病毒相应序列一致 ,内切酶酶切及PCR均得到 4 5 6bp的cDNA片段 ,与实验设计一致 ,证明该cDNA片段插入了 pBV2 2 0载体中 ;SDS -PAGE电泳表明有外源蛋白表达。

改良淋病奈瑟菌选择性培养基的研制与试用

为了检测本室研制的改良淋球菌选择性培养基的性能,以英国 OXOID 公司的 TM 培养基作为参考培养基,分别接种淋球菌标准菌株 ATCC20916和30例怀疑为淋病的临床患者标本,比较生长情况:再挑取标准菌株单个菌落用三线法划线接种于两种培养基,在低倍显微镜下测量直径,比较菌落直径大小。结果表明,经37℃培养18h 后,标准菌株在 TM 培养基中菌落直径为0.53±0.03mm,在自制培养基中为0.52±0.04mm,经 t 检验,差异无统计学意义(P>0.05)。临床患者标本各有24例呈淋球菌阳性,阳性率一致。结论:本室研制的改良淋球菌培养基与参考培养基特异性、敏感性相同,淋球菌在上述两种培养基中生长速度相同,有望成为进口产品的替代品。

微量法快速检测肾综合征出血热病毒特异性抗体的自身血凝试验

为验证微量快速自身血凝试验用于检测肾综合征出血热(HFRS)病毒抗体的实用性,采用直接玻片自身血凝试验检测临床诊断为HFRS病人全血中的特异性抗体。采用间接免疫荧光法作平行对照。结果表明病人全血54份中,自身血凝试验49例阳性,占90.8%,而间接免疫荧光法仅45例阳性,占83.3%。用自身血凝试验检测90例正常人全血,其中89例不出现凝集。结论:检测HFRS病人全血中病毒抗体的自身血凝试验是一种简便、微量、快速的试验诊断方法,适合基层医疗单位使用。

人IL-18 cDNA的RT-PCR扩增及其重组质粒的构建

为构建人白细胞介素18(IL-18)的重组质粒,用 RT-PCR 技术从健康人外周血单核细胞中扩增出编码人 IL-18的 cDNA,并将此基因定向克隆人表达载体 pBV220中,通过对转化子的筛选得到带有 IL-18插入片段的阳性克隆。经酶切分析及核苷酸测序表明,克隆到的基因与文献报道完全一致。表达的重组 IL-18占菌体总蛋白质的20%。表达的蛋白分子量约为18.3kD。表达产物主要以包涵体的形式存在。

改良解脲脲原体选择性培养基的研制和试用

为检测本室研制的改良解脲脲原体(Uu)液体选择性培养基性能及与进口产品和国内其他同类产品进行比较,选用了法国 BioMereux 的 Uu 选择性培养基和另外两种国产培养基。按常规方法将156例临床标本平行接种于本室自制和其它三种培养基中,37℃孵育,定期观察并记录结果,对阳性结果转种于固体培养基以排除假阳性,比较四种不同来源的培养基的性能差异。结果表明,本室研制的 Uu 选择性培养基与 BioMereux 产品性能一致,另两种国产培养基各有不同的假阳性和假阴性。结论:本室研制的Uu 液体选择性培养基性能可靠,可用于临床上 Uu 的选择性培养。

检测肾综合征出血热病毒抗体的自身血凝试验的建立

为建立一种快速检测肾综合征出血热(HFRS)病人血液中病毒抗体的自身血凝试验方法,采用木瓜酶消化法制备抗红细胞糖蛋白单克隆抗体(McAb)的F(ab)_2片段,用硫酸鱼精蛋白提取HFRS病毒抗原,并用戊二醛法将两种蛋白耦联制成双价试剂,以HFRS病人阳性血清与人"O"型血红细胞制成模拟全血标本,进行红细胞凝集试验。结果表明,红细胞McAb F(ab)2片段与HFRS病毒抗原蛋白发生有效耦联,可使HFRS的模拟标本出现明显血凝,整个实验过程仅需30min。结论:用自身血凝试验检测HFRS病毒抗体方法快速,简便,不需特殊设备,非常适合基层医疗单位应用。