肿瘤特异性凋亡基因诱导人淋巴瘤细胞凋亡的机制

目的:研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)在诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡时,cJun氨基末端激酶(JNK)信号通路的作用。方法:用含有apoptin基因的真核表达载体,瞬时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937。采用流式细胞仪、Westernblot、台盼蓝染色及RTPCR等研究其在不同时间条件下诱导U937细胞凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬时转染U937细胞48h,可出现明显的凋亡;而且凋亡细胞的数量与apoptin基因的转染时间有关。诱导后24h,U937细胞中出现磷酸化的JNK蛋白的表达,诱导后48h达高峰;而非磷酸化的JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导U937细胞凋亡的作用。JNK信号通路的激活,可能在apoptin基因诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥着重要作用。

肿瘤特异性凋亡基因对人淋巴瘤细胞诱导作用

目的观察肿瘤特异性凋亡基因(Apoptingene)对人淋巴瘤细胞U937的凋亡诱导作用。方法用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937;采用台盼蓝染色法、RTPCR及DNA凝胶电泳等方法研究其在不同时间条件下对人淋巴瘤细胞U937诱导凋亡的作用。结果Apopin基因瞬间转染的人淋巴瘤细胞U937可出现明显的细胞凋亡;而且凋亡细胞的数量与Apoptin的转染时间有关。结论Apoptin基因具有诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡的作用。

重组人IL-18对辐射损伤后小鼠免疫功能的调节作用

目的:探讨重组人IL-18(IL-18)对辐射损伤后小鼠免疫功能的影响。方法:对32只小鼠分4组进行辐射损伤,然后分别用淋巴细胞转化实验、NK细胞细胞毒实验、T淋巴细胞亚群测定和血清中IgG测定方法观察IL-18对其免疫功能的调节作用。结果:重组人IL-18能够提高辐射损伤后小鼠的T、B淋巴细胞转化能力,增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力,上调CD4+T细胞的数量,但对IgG产生能力没有调节作用。结论:重组人IL-18对辐射后小鼠免疫功能损伤有促进恢复的作用。

Apoptin基因/壳聚糖纳米粒的制备及其对U937细胞凋亡的诱导作用

目的以羧甲基壳聚糖为基质材料,制备apoptin基因缓释微球,探讨其对U937细胞凋亡的作用。方法采用复凝聚法制备apoptin/壳聚糖微球,分别用光镜观察微球形态、内切酶研究其稳定性、DNA电泳阻滞分析apoptin/壳聚糖最佳比例、PCR测定apoptin基因作为复制摸板能力、用MTT法检测其抗肿瘤活性。结果壳聚糖与apoptin基因可形成稳定的微球,其直径在200～300之间,成球性较好,apoptin/壳聚糖微球P/N最佳质量比为5.5:1。微球能够有效防止DNA酶的降解作用,apoptin/微球载体中的基因仍具有DNA复制摸板功能,并能有效地转染U937细胞,转染48h可诱导U937细胞发生凋亡,从而抑制瘤细胞生长。结论apoptin基因与羧甲基壳聚糖可形成稳定的缓释微球,并能有效地转染肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞发生凋亡。

Caspase-3在Apoptin基因诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的:研究Caspase-3在Apoptin gene诱导Hela细胞凋亡中的作用。方法:用含有Apoptin基因的真核表达载体pcDNAA3瞬间转染体外培养的Hela细胞;Hela细胞瞬间转染后0、24、48、72和96h,分为正常的Hela细胞对照组,pcD-NA3.1质粒转染对照组和实验组。分别采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测Hela细胞的凋亡;以比色法检测Caspase-3的相对活性。结果:以转染后24、48和72hHela细胞的总RNA为模板,经RT-PCR均可扩增出Apoptin cDNA,正常Hela细胞和空载体转染细胞均为阴性表明Apoptin已在转染细胞中表达;Apoptin基因瞬间转染的Hela细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带,表明有凋亡发生;FCM检测发现,以Apoptin基因转染后48h,在DNA直方上的G1峰前,即出现1个明显的亚2倍体峰(亚G1峰,即凋亡峰),并随着转染时间延长而增强。细胞凋亡率与对照组相比较差异显著(P<0.05)。Hela细胞经pcDNAA3质粒转染后24h实验组Caspase-3的活性开始升高,72h达高峰,明显高于正常细胞对照组和pcDNA3.1对照组(P<0.01)。结论:Apoptin基因可通过激活Caspase-3诱导Hela细胞凋亡。

氨基末端激酶信号通路在Apoptin基因诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的:探讨肿瘤特异性凋亡基因(Apoptingene)在诱导Hela细胞凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用。方法:用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的Hela;采用流式细胞仪、免疫印迹法(Westernblot)、苔盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下Hela细胞诱导凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬间转染的Hela细胞可出现明显的细胞凋亡;而且凋亡细胞的数量与Apoptin的转染时间有关;凋亡细胞内磷酸化型JNK蛋白随凋亡细胞数量的增加而增多,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导Hela细胞凋亡的作用,JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。

Apoptin基因通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡

目的研究caspase-3在肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡中的作用。方法用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色瘤细胞A375;采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测A375细胞的凋亡;以比色法检测caspase-3的相对活性。结果Ap-optin基因瞬间转染的A375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术发现实验组细胞凋亡率明显高于其他各组(P<0.01);转染后24h实验组caspase-3的活性开始升高,72h达高峰,明显高于其他各组(P<0.01)。结论Apoptin基因可通过激活caspase-3诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡。

肿瘤特异性凋亡基因诱导人黑色素瘤细胞凋亡机制的研究

目的研究肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)在诱导人黑色素瘤细胞A375发生凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用。方法用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375;采用流式细胞仪、免疫印迹法(W estern b lot)、台盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果Apoptin基因瞬间转染的人黑色素瘤A375细胞出现明显的细胞凋亡,凋亡细胞的数量随Apoptin转染时间延长而增多,磷酸化型JNK蛋白在转染Apoptin 24 h开始表达,48h和72h过表达,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论Apoptin基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用,JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。

RhIL-18对核辐射诱导小鼠脾细胞凋亡的抑制作用

目的探讨重组人白细胞介素18(rhIL-18)对核辐射所致小鼠脾细胞凋亡的抑制作用及其对免疫功能的调节调节。方法对32只C57小鼠分4组进行核辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用细胞死亡ELISA试剂盒测定胞浆中核小体含量,用DAN琼脂糖电泳检测凋亡细胞DNA片段,用淋巴细胞转化实验测定rhIL-18对脾细胞免疫功能的调节作用。结果与对照组比较,rhIL-18能够明显降低核辐射所致的小鼠脾细胞凋亡;提高核辐射损伤后小鼠的脾细胞细胞转化能力。结论rhIL-18可能通过抑制核辐射诱导的细胞凋亡而增强小鼠脾细胞功能。

rhIL-18对放疗前后肿瘤患者PBMC功能的调节作用

为探讨rhIL-18对放疗前后肿瘤患者周围血单个核细胞(PBMC)免疫功能的调节作用,分离65例放疗前后肿瘤患者及40例正常人的外周血PBMC,在不同浓度rhIL-18刺激下培养72h,收集其培养上清液,采用ELISA方法检测其中IL-2、IL-4、IFN-γ和GM-CSF的含量。结果表明,PHA单独刺激下肿瘤放疗组IL-2、IFN-γ和GM-CSF的含量比正常对照组显著降低,其差异具有显著性P<0.05;PHA联合不同浓度的rhIL-18刺激下,放疗前后肿瘤组的IL-2、IFN-γ和GM-CSF的含量均高于PHA组,其差异具有显著性(P<0.01),但与正常对照组没有显著性(P>0.05);PBMC培养上清液中IL-2、IFN-γ和GM-CSF的水平在放疗前后肿瘤组中随着IL-18浓度的增加呈现出增强的趋势;但各组IL-4含量变化不明显。结论:IL-18能够促进放疗前后肿瘤患者PBMC产生IL-2、IFN-γ和GM-CSF,因此在调节免疫功能和增强机体抗肿瘤方面具有一定意义。

重组人IL-18对核辐射损伤小鼠脾细胞因子的影响

为了探讨重组人IL-18(rhIL-18)对核辐射损伤后小鼠脾细胞因子的免疫调节作用,对32只C57小鼠分4组进行核辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用试剂盒测定其培养上清中IL-2、IFN-γ、GM-CSF、IL-4和脾细胞抗体形成量,观察rhIL-18对核辐射损伤小鼠脾细胞因子的免疫调节作用。结果表明与对照组比较,rhIL-18能够提高核辐射损伤前后小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ、GM-CSF和IL-2的能力,辐射损伤后应用rhIL-18组的细胞因子水平高于核辐射损伤前应用rhIL-18组;但对IL-4分泌能力和脾细胞抗体形成量没有影响。结论:rhIL-18具有促进核辐射损伤小鼠脾细胞分泌IL-2、IFN-γ和GM-CSF的作用。

Apoptin基因壳聚糖缓释微球载体的制备及其对A375细胞的凋亡诱导作用

为制备以羧甲基壳聚糖为基质材料的apoptin基因缓释微球载体，并研究其对A375细胞的凋亡诱导作用，采用超声波法制备羧甲基壳聚糖-DNA微球载体，并用扫描电镜对其进行了表征观察，然后将羧甲基壳聚糖-apoptin DNA微球转染人黑素瘤细胞A375，并通过RT-PCR、MTT和凋亡细胞DNA提取等方法对细胞的转染情况及细胞凋亡作了体外检测。结果表明，携带apoptin基因的羧甲基壳聚糖微球直径为200-300nm，成球性较好；此apoptin微球载体能有效地转染A375细胞，诱导A375细胞发生凋亡，从而抑制瘤细胞生长。

rhIL-18对核辐射诱导小鼠脾细胞凋亡的抑制机制研究

为了探讨重组人白细胞介素18(rhIL-18)对核辐射所致小鼠脾细胞凋亡的抑制作用机制,对32只C57小鼠分4组进行核辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用细胞凋亡ELISA试剂盒测定胞质中核小体含量,用DNA琼脂糖电泳检测凋亡细胞DNA片段;用原位杂交方法测定脾细胞凋亡相关基因bax与bcl-2的表达,观察rhIL-18对其表达的调节作用。结果表明,与对照组比较,rhIL-18能够明显降低核辐射所致的小鼠脾细胞凋亡;促进bcl-2的表达,下调bax基因的表达。结论:rhIL-18可能通过促进bcl-2的表达、下调bax基因的表达方式抑制核辐射诱导的小鼠脾细胞凋亡。

重组人IL-18对辐射损伤后小鼠脾细胞因子的免疫调节作用

目的探讨重组人白细胞介素18(IL-18)对辐射损伤后小鼠脾细胞因子的免疫调节功能。方法32只C57小鼠分对照组、单纯辐射组、IL-18+辐射损伤组和辐射损伤+IL-18组进行辐射损伤,2周后取小鼠脾淋巴细胞体外培养,用试剂盒测定其培养上清中IL-2、γ干扰素(IFN-γ)、粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)、IL-4和血清中IgG的含量,观察IL-18对辐射损伤小鼠脾细胞因子的免疫调节作用。结果与对照组比较,重组人IL-18能够提高辐射损伤前后小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ、GM-CSF和IL-2的能力,辐射损伤后应用IL-18组细胞因子的水平高于辐射损伤前应用IL-18组;但对IL-4分泌能力和血清中IgG含量没有调节作用。结论重组人IL-18具有促进辐射损伤小鼠脾细胞因子分泌IL-2、IFN-γ和GM-CSF的作用。

Apoptin基因对小鼠S180荷瘤细胞抑制作用

目的研究肿瘤物异性凋亡基因(apoptin gene)对肿瘤细胞的抑制作用。方法以S-180肉瘤细胞的荷瘤小鼠为模型,用克隆的肿特异性凋亡基因的真核表达载体直接进行基因抑制,分别测定小鼠体内的肿留大小、荷瘤小鼠生存期和肿瘤细胞的凋亡。结果与对照组相比,基因抑制组小鼠一般生长状态良好、体内肿瘤生长明显减缓(P<0.01)、生存期延长、体重增加,在基因抑制的肿瘤组织中可检测到肿瘤特异性凋亡基因mRNA的表达及肿瘤细胞的凋亡。结论肿瘤特异性凋亡基因在体内具有明显的抗肿瘤作用,对开展肿瘤的基因治疗有一定意义。

rhIL-18对慢性乙型肝炎患者免疫功能的调节作用

为了探讨rhIL-18对慢性乙型肝炎(以下称乙肝)患者免疫功能的调节作用,分离55例慢性乙肝及40例正常人的外周血单个核细胞(PBMC),在HBcAg及不同浓度rhIL-18刺激下培养72h,收集其培养上清液,采用ELISA法检测其中IL-2、IL-4、γ干扰素(IFN-γ)和单核巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的含量。结果表明,PHA单独刺激下慢性乙肝组IL-2、IFN-γ和GM-CSF的含量比正常对照组显著降低,其差异具有显著性(P<0.01);HBcAg单独刺激下慢性乙肝组IL-2、IFN-γ和GM-CSF的含量升高,但仍低于正常对照组,其差异没有显著性(P>0.05);HBcAg联合不同浓度的rhIL-18刺激下,慢性乙肝组IL-2、IFN-γ和GM-CSF的含量均高于PHA组和HBcAg组,其差异具有显著性(P<0.01),但与正常对照组没有显著性(P>0.05);PBMC培养上清液中IL-2、IFN-γ和GM-CSF的水平在慢性乙肝组中随着IL-18浓度的增加呈现出增强的趋势;但各组IL-4含量变化不明显。结论:IL-18能够促进慢性乙肝患者PBMC产生大量的IL-2、IFN-γ和GM-CSF,因此在调节免疫功能和增强机体杀伤病毒感染细胞方面具有很好的应用前景。

Apoptin基因／壳聚糖缓释微球的制备及其对A375细胞的凋亡诱导作用

目的:以羧甲基壳聚糖为基质材料,制备apoptin基因缓释微球。方法:采用复凝聚法制备apoptin/壳聚糖微球,分别用光镜观察微球形态、内切酶研究其稳定性、DNA电泳阻滞分析apoptin/壳聚糖最佳比例、PCR测定apoptin基因作为复制摸板能力、用MTT法检测其抗肿瘤活性。结果:壳聚糖与apoptin基因可形成稳定的微球,其直径在200～300nm之间,成球性较好、apoptin/壳聚糖微球P/N最佳质量比为5.5∶1、微球能够有效防止DNA酶的降解作用、apoptin/微球载体中的基因仍具有DNA复制模板功能,并能有效地转染A375细胞,诱导A375细胞发生凋亡,从而抑制瘤细胞生长。结论:apoptin基因与羧甲基壳聚糖可形成稳定的缓释微球,并能有效地转染肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞发生凋亡。

细胞色素C在apoptin诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用

目的研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin)在诱导Hela细胞凋亡中的信号转导机制。方法用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的Hela细胞;采用MTT法检测Hela细胞的凋亡;以比色法检测caspase-8和caspase-3的相对活性;Western blotting检测凋亡细胞中细胞色素C的表达量。结果 MTT法证明ap-optin基因瞬间转染的Hela细胞凋亡率明显高于其他各组(P<0.01);caspase-3的活性升高,但caspase-8活性没有明显变化;细胞色素C释放量明显增多。结论 Apoptin基因可能通过促进线粒体释放细胞色素C激活caspase-3,进而诱导Hela细胞凋亡。