基于自主学习平台的食品毒理学课程“混合式教+学”模式教学改革与实践

目的:探讨"混合式教+学"模式在食品毒理学教学实践中的应用效果。方法:选取某医学院2016级、2017级食品质量与安全专业本科生进行教学实践和效果评价,选择50%教学内容进行"混合式教+学"教学改革,另外50%教学内容采取传统教学授课。以平时成绩、期末成绩及调查问卷对"混合式教+学"教学效果进行评价。结果:传统教学部分学生的平时成绩为(75.08±6.81)分,期末成绩为(82.23±8.54)分,而"混合式教+学"部分学生的平时成绩为(88.98±2.97)分,期末成绩为(73.7±8.42)分,差异均有统计学意义(P<0.05)。参与"混合式教+学"课程反馈的学生中,有83.33%的同学能够全程跟随老师听课,且集中精力听课时间在31~45 min内的学生比例达到92.71%。结论:"混合式教+学"模式明显提高学生的平时成绩,对培养学生自主学习能力及学习参与度有明显效果,但对提升学生的期末成绩尚需进一步探讨和改进。

Raf/MEK/ERK及Ca^(2+)/CaN信号通路在双酚A影响巨噬细胞分泌IL-10中的作用

目的:探讨Raf/MEK/ERK和Ca^(2+)/CaN信号通路在双酚A (BPA)调控巨噬细胞分泌IL-10中的作用。方法:以小鼠单核白血病巨噬细胞(RAW264.7)为靶细胞,2μg/ml脂多糖(LPS)为激活剂,采用1、10、100μmol/L BPA染毒。以10、 30μmol/L钙离子通道阻断剂(Ver), 0.25、 0.5μmol/LCaN阻断剂(FK506)和10、 40μmol/LERK抑制剂(PD98059)作为干预剂加入100μmol/LBPA,分别作用细胞4、12、24h。采用实时定量PCR技术测定ARaf、CRaf、MEK、ERK1、ERK2、NFATp、NFATc及IL-10的基因表达,采用ELISA方法检测细胞上清液IL-10的蛋白含量。结果:与对照组(0μmol/L BPA)相比,2μg/ml LPS组IL-10基因和蛋白表达水平升高,CRaf、MEK、ERK1、ERK2、NFATp和NFATc基因表达水平升高;与LPS组比较,100μmol/LBPA组IL-10的基因与蛋白表达水平降低,ARaf、CRaf、MEK、ERK1、ERK2、NFATp和NFATc基因表达水平升高;与100μmol/LBPA组比较,Ver组和FK506组IL-10基因和蛋白表达水平升高,NFATp和NFATc基因表达水平降低,而高浓度PD98059组IL-10基因和蛋白表达水平降低,NFATc表达水平降低而NFATp表达水平升高,差异均有统计学意义。结论:本实验条件下,Raf/MEK/ERK和Ca^(2+)/CaN信号通路共同调控NFAT,进而介导了BPA对巨噬细胞分泌细胞因子IL-10的影响,具体机制还需进一步探讨。

DEHP、MEHP对小鼠胚胎干细胞细胞毒性的研究

目的分析不同浓度的邻苯二甲酸二乙基己酯[di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]及其活性代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)对小鼠胚胎干细胞细胞毒性、增殖的影响。方法用含有不同浓度DEHP(1 000、100、10、1、0.1、0.01μmol/L)、MEHP(1 000、100、10、1、0.1、0.01μmol/L)的培养液,对胚胎干细胞进行培养,用CCK-8法检测细胞活性。结果染毒96 h后,高剂量(1 000μmol/L)DEHP、MEHP均对胚胎干细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),且染毒剂量与细胞抑制率之间存在明显的正相关性,相关系数分别为0.51、0.62(P<0.05)。结论在一定浓度范围内,DEHP及MEHP均对小鼠ESC具有细胞毒性,且有浓度依赖性。

卵巢颗粒细胞体外培养体系的建立及DEHP、MEHP对其增殖功能的影响

目的：建立卵巢颗粒细胞的原代培养体系，探讨邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）及其活性中间产物邻苯二甲酸单（2-乙基）己酯（MEHP）对原代培养的卵巢颗粒细胞增殖作用的影响。方法：选用21～25日龄未成年雌性Wistar大鼠，皮下注射孕马血清（PMSG），48h后断头处死，收集卵巢颗粒细胞，在DMEM—F12培养液中培养。卵巢颗粒细胞原代培养体系建立成功后分别将不同剂量的DEHP（1μM、5μM、25μM、50μM、100μM）和MEHP（1μM、5μM、25μM、50μM、100μM）作用细胞24h及48h，以CCK-8法检测细胞增殖情况。结果：DEHP作用卵巢颗粒细胞24h时，1μM DEHP和100μM DEHP均能明显抑制卵巢颗粒细胞增殖，差异有统计学意义（P〈0．05）。DEHP作用卵巢颗粒细胞48h时，1μM DEHP和100μMDEHP均能明显促进卵巢颗粒细胞增殖，差异有统计学意义（P〈0.05）。而MEHP作用卵巢颗粒细胞24h及48h，MEHP各染毒剂量组均无统计学差异（P〉0．05）。结论：DEHP能促进卵巢颗粒细胞增殖，并且和作用时间长短有关。MEHP在观察剂量下，尚未显示有促进卵巢颗粒细胞增殖的作用。

青春期前DEHP暴露对雌性大鼠机体发育及卵巢脂质过氧化的影响

目的:研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对青春期前雌性大鼠机体发育及卵巢组织脂质过氧化水平的影响。方法:将40只4周龄雌性Wistar大鼠,随机分成0,50,150,500mg/(kg.d)剂量组。每周连续染毒5天,染毒4周,于末次染毒24小时后进行阴道涂片并处死处于动情间期的动物。用分光光度法测定组织和血中超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)酶的活性和丙二醛(MDA)含量。结果:500?/?剂量组肝脏重量、肝脏系数及肾脏重量高于对照组,差异具有显著性(P<0.05);DEHP染毒500 mg/kg组的卵巢中SOD活性,与对照组和其他剂量组相比显著下降(P<0.05)。DEHP各染毒剂量组卵巢和血中CAT活性和MDA含量与对照组相比无明显差异(P>0.05)。结论:青春期前DEHP暴露对雌鼠的肝脏及肾脏产生损伤作用,DEHP可能对卵巢抗氧化系统有一定影响。

母鼠孕期暴露双酚A对子代雌性大鼠性发育的影响

目的:研究母鼠孕期暴露双酚A(BPA)对子代雌性大鼠的性发育影响。方法:选择SPF级12周龄的健康成年SD大鼠,按雌∶雄为2∶1比例合笼。将妊娠大鼠20只,随机分成4组,于妊娠第5天至第20天,分别按0,10,50,250mg/(kg.d)进行灌胃染毒。母鼠正常分娩,雌性仔鼠出生28天开始观察阴道开口,第一次发情周期,此后连续观察动情周期变化,在第10周确定发情间期后处死动物。称量肝脏、肾脏、子宫、卵巢的重量,计算脏器系数;用ELISA法测血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、孕酮(P4)、雌二醇(E2)及睾酮(T)水平。结果:各剂量组肝脏和肾脏重量与对照组相比有增加趋势,50 mg/kg组的肾脏重量和250 mg/kg组的肾脏系数有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,10 mg/kg组阴道开口延迟,而250 mg/kg组阴道开口日龄提前,各剂量组阴道开口时体重增加(P<0.05);与对照组相比,BPA各剂量组子代雌性大鼠性周期均无明显影响;各剂量组与对照组相比,T水平明显下降(P<0.05);50mg/kg组与对照组相比,LH、FSH、E2水平明显减少(P<0.05),且P4水平有升高趋势;而250 mg/kg组上述指标与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:母鼠孕期暴露BPA可能导致子代雌性大鼠下丘脑-垂体-性腺轴的调节功能障碍,对其性发育功能造成一定影响。

丙烯酰胺对雄性大鼠的生殖损伤及机制研究

目的:研究丙烯酰胺对雄性大鼠生精功能及睾丸的损害作用,探讨产生雄性生殖毒性的原因及CYP2E1的作用。方法:选择健康成熟的雄性Wistar大鼠60只,随机分为阴性对照组(生理盐水)、ACR 20mg/kg组、诱导剂无水乙醇200mg/kg组、无水乙醇200mg/kg+ACR 20mg/kg组、抑制剂二乙基二硫代氨荃甲酸钠(DDC)20mg/kg组、DDC20mg/kg+ACR20mg/kg共6组,以5ml/kg容量连续灌胃染毒4周。检测睾丸、附睾、前列腺、精囊腺脏器系数和睾丸病理;血中睾酮(T)、雌二醇(E2)含量;睾丸组织GSH、GR、GSH-Px水平;精子数,精子畸形率;曲细精管第Ⅶ、Ⅷ期各细胞成分构成变化。结果:ACR、ACR+诱导剂及ACR+抑制剂组精子数下降、畸形率升高,与阴性对照组比较存在显著差异,GSH含量显著升高(P<0.05),其它指标均无显著变化(P>0.05)。结论:ACR可引起大鼠生精功能的改变,但未观察到CYP2E1在这种改变中的明显作用。

邻苯二甲酸酯类对生殖毒性的影响及其机制的研究进展

邻苯二甲酸酯(phthalates,PAEs)作为环境内分泌干扰物,主要应用于工业和日用品生产中,可通过消化道、呼吸道及皮肤接触等途径进入人体。人群暴露于PAEs对健康产生的危害也逐渐受到重视,尤其是生殖健康方面。本文就PAEs的暴露情况、对机体生殖系统影响及其可能机制进行综述。

低剂量双酚A及邻苯二甲酸二乙基己酯对PC3细胞增殖的影响

目的:探讨低剂量环境内分泌干扰物双酚A(Bisphenol A,BPA)和邻苯二甲酸二乙基己酯(Di-2-ethylhexy-lPhthalate,DEHP)对PC3细胞增殖的影响。方法:PC3细胞用含10%胎牛血清的F12培养基培养,将处于对数生长期的细胞制成104/ml的细胞悬液,按100μl/孔容积加入96孔板,24 h后分别加入BPA、DEHP、雌二醇(Estradiol,E2)和双氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT)10μl/孔,终浓度为0、0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、100、1 000、10 000、100 000 nM,每个剂量设3个复孔,重复2次,24 h后加入CCK8 10μl/孔,37℃孵育4 h后450 nm处检测吸光度;然后在培养液中加入终浓度为0.1μM/ml的他莫昔芬(Tamoxifen,Tam)拮抗雌激素受体(Estradiol Receptor,ER)的作用,用能明显促进细胞增殖的0.01、0.1、1、10、100 nM剂量,再次对PC3细胞进行染毒,同样方法检测4种物质作用PC3后的吸光度。结果:10 nM和100 nM的BPA,0.01 nM、0.1 nM和10nM的E2,0.01、0.1、1、10、100、1000、10 000、100 000 nM的DEHP均有促进PC3细胞增殖的作用,而DHT却无这种影响,用TAM封闭ER功能后,0.1、1、10、100nM的BPA、DEHP、E2、DHT均有促进PC3增殖的效果。结论:低剂量环境内分泌干扰物BPA和DEHP可促进PC3细胞增殖,作用机制与E2相似;而当ER被封闭后,DHT却呈现出促细胞增殖作用。

PAEs对淋巴细胞分泌IL-4蛋白的影响

目的:以DBP和DEHP为例,研究PAEs对淋巴细胞分泌IL-4蛋白的影响,为进一步探讨PAEs的免疫毒性提供基础。方法:分别用ConA及PMA+Ion去激活脾淋巴细胞,以不同浓度DBP和DEHP染毒细胞72 h、96 h,实验终点用ELISA方法检测细胞上清液中细胞因子IL-4蛋白表达。结果:不同激活条件下,10μM、50μM的DBP或DEHP作用72h均明显降低细胞上清液中IL-4蛋白表达;而10μM的DBP或DEHP作用96h却显著促进了IL-4蛋白表达。结论:不同激活条件下,PAEs对淋巴细胞分泌IL-4蛋白影响不同,可能与其免疫毒性有关。

PPARγ基因RNA干扰慢病毒载体构建及干扰Leydig细胞株建立

目的:通过靶向过氧化物酶体增殖因子活化受体PPARγ基因阻断,建立稳定干扰Leydig细胞株TM3。方法:采用慢病毒四质粒包装系统构建特异靶向小鼠PPARγ基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,用以建立PPARγ基因稳定沉默的Leydig细胞株TM3。结果:经测序证实,成功构建编码表达PPARγ短发夹结构RNA(sh-PPARγ)的慢病毒载体LV3-sh-PPARγ及对照载体LV3-Control。病毒载体转导Leydig细胞株TM3后,荧光显微镜证实细胞转染效率>90%,Real-time PCR测定实验组TM3细胞PPARγ的mRNA表达比未处理细胞下降70%(P<0.05),对照组与未处理细胞差异无显著性(P>0.05)。Western blot显示实验组PPARγ蛋白表达量比未处理细胞明显下降(P<0.05),对照组与未处理细胞差异无显著性(P>0.05)。结论:成功构建特异靶向小鼠PPARγ基因的RNAi慢病毒载体LV3-sh-PPARγ及对照载体LV3-Control,并成功建立PPARγ表达稳定干扰的小鼠Leydig细胞株TM3,为PPARγ生殖毒性研究提供了新的细胞模型。

双酚A对小鼠睾丸间质细胞毒性及miR-203-3p和PI3K/AKT/FOXO1信号通路的影响

目的研究双酚A对小鼠睾丸间质细胞的毒性作用,及对miR-203-3p和PI3K/AKT/FOXO1信号通路的影响。方法不同浓度BPA(0、2、10、50、250μmol/L)处理小鼠睾丸间质细胞24 h,CCK8法检测细胞活力,Real time PCR检测miR-203-3p和FOXO1、AKT、PI3K的相对表达水平。结果不同浓度BPA处理细胞后,细胞活力随BPA剂量的增大而减少,50、250μmol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。各处理组miR-203-3p表达量均较对照组升高,10、250μmol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。2、10μmol/L组FOXO1表达量较对照组升高,50、250μmol/L组表达量较对照组降低,2、50、250μmol/L组FOXO1相对表达量与对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。各处理组AKT水平均出现下降趋势,10、50、250μmol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。各处理组PI3K水平均出现下降趋势,50、250μmol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。结论双酚A致睾丸间质细胞损伤,影响miR-203-3p和FOXO信号通路相关基因的改变。

实时无标记细胞分析系统与台盼蓝染色法分析双酚A对小鼠睾丸间质细胞毒性作用的比较

目的分析实时无标记细胞分析系统与台盼蓝染色法分析双酚A(BPA)对小鼠睾丸间质细胞毒性作用,以确定最佳实验方案。方法采用实时无标记细胞分析系统及台盼蓝染色法测定BPA对小鼠睾丸间质细胞的细胞毒性,计算其IC_(50)。结果实时无标记细胞分析法及台盼蓝染色法结果表明,不同浓度BPA使小鼠睾丸间质细胞的活力下降,1 000μmol/L时下降最为明显,IC_(50)分别为704、745μmol/L。但实时无标记系统能够实时监测细胞生长的动态生物学反应。结论实时无标记分析法能够更直观、准确地观察细胞生长情况,弥补台盼蓝染色法的缺点,是一种新的研究细胞毒性的实验方法。

无机砷暴露抑制小鼠肾脏CD4^+T淋巴细胞的免疫调节效应

目的探讨无机砷暴露对小鼠肾脏CD4^+T淋巴细胞分化能力的影响及其可能机制。方法雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组、(2.5、5、10)mg/kg NaAsO2暴露组,每组10只。一次性灌胃方式染毒,染毒时间为24 h,对照组给予生理盐水。实时荧光定量PCR检测肾脏1型辅助T(Th1)细胞转录因子T细胞表达的T盒(T-bet)及细胞因子γ干扰素(IFN-γ),Th2细胞转录因子GATA结合蛋白3(GATA3)及细胞因子白细胞介素4(IL-4),Th17细胞转录因子维甲酸相关孤核受体γt(ROR-γt)及细胞因子IL-22,调节性T细胞(Treg)转录因子叉头盒转录因子3(FOXP3)及细胞因子转化生长因子β(TGF-β)的mRNA水平。采用商品化的试剂盒检测血清中过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC),肾脏中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果与对照组相比,砷暴露组小鼠体质量、肾脏质量及脏器系数无明显变化;砷暴露组小鼠Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg转录因子T-bet、GATA3、ROR-γt、FOXP3及相关细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-22、TGF-β的mRNA水平明显降低;砷暴露小鼠血清中CAT活性及T-AOC水平明显降低。此外,砷明显增加肾脏MDA水平,减少SOD活性。结论无机砷暴露抑制肾脏T细胞亚群功能,诱导肾脏氧化损伤。

新烟碱类杀虫剂对人类及哺乳动物的生殖毒性作用

新烟碱类杀虫剂(neonicotinoids,NEOs)作为一种广谱杀虫剂,因其对哺乳动物毒性较低,广泛应用于农业、园林绿化和家庭宠物中的昆虫防治。但由于NEOs水溶性较高,不容易发生水解,因此容易在土壤、水体、农作物中残留,并通过饮水、饮食、皮肤接触等途径进入人体,从而导致人群的广泛暴露。多项研究发现,NEOs暴露可导致遗传毒性、神经毒性、免疫毒性和生殖毒性等。本文主要对NEOs对人类及哺乳动物的生殖毒性作用及其可能机制进行综述。

双酚A雌性生殖毒性及其机制研究进展

双酚A(bisphenol A,BPA)作为一种重要的有机化工原料,广泛用于生产高分子材料及精细化工产品,属于环境内分泌干扰物。BPA可以通过消化道、呼吸道以及皮肤进入机体,对多个系统均能产生有害的影响,其生殖系统毒性尤为引起人们重视。流行病学调查结果与动物实验数据表明,BPA暴露对雌性生殖系统会产生不利的影响,但具体机制尚不十分明确。本文综述了BPA对雌性生殖系统的影响及其相关机制。

双酚A对雄(男)性生殖系统的影响及其表观遗传学机制

双酚A (bisphenol A,BPA)作为一种具备雌激素效应的环境内分泌干扰物,是塑料工业的重要添加剂,被广泛应用于食品及饮料包装、餐具、婴儿用瓶等。在日常生活中可通过皮肤、呼吸和消化道途径接触。越来越多的研究逐渐关注人群暴露于BPA对健康尤其是雄性生殖方面的影响。本文就BPA对雄性生殖系统的影响以及相关表观遗传学机制进行综述。

啶虫脒对睾丸间质细胞的毒性作用

目的探究啶虫脒(Acetamiprid,ACE)对睾丸间质细胞TM3的毒性作用,为ACE致生殖毒性机制研究提供理论基础。方法应用DMEM-F12培养基培养TM3细胞。以不同浓度ACE处理TM3细胞24 h和48 h,采用CCK8法测定细胞活力,计算24 h IC_(50)。根据IC_(50)值选择后续TM3细胞暴露的适宜ACE浓度。ACE处理TM3细胞24 h,流式细胞术测定细胞凋亡率,qPCR测定细胞增殖指数PCNA、Ki 67 mRNA,及睾酮合成酶基因Star、Hsd3b1、Cyp11a1 mRNA的表达。结果细胞活力在4、6、8、10、12 mmol/L随ACE浓度升高而下降,且在8、10、12 mmol/L组,48 h细胞活力显著低于24 h(P<0.05)。计算24 h IC_(50)为7.20 mmol/L,故后续以0、2、4、6、8 mmol/L ACE处理TM3细胞24 h。与0 mmol/L组相比,PCNA mRNA在6、8 mmol/L组表达显著降低(P<0.01),Ki67 mRNA在4、6、8 mmol/L组表达显著降低(P<0.05)。流式细胞术结果发现,TM3细胞凋亡率随ACE浓度升高而增加。ACE处理还可以导致Star和Hsd3b1 mRNA在6、8 mmol/L表达显著升高(P<0.05),Cyp11a1 mRNA在所有剂量组均显著升高(P<0.01)。结论ACE暴露可通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡导致细胞活力降低,同时,ACE可通过上调Star、Hsd3b1、Cyp11a1基因表达影响睾酮合成过程,但相关机制还需要进一步研究。

孕期双酚A暴露对子代生殖和内分泌发育的影响及表观遗传学机制

双酚A是一种常见的环境内分泌干扰物,作为合成环氧树脂和聚碳酸酯的原料,在日常生活中接触机会很多。随着世界范围内对双酚A使用量的增加,其对人群健康的影响日益受到关注,尤其是生命早期阶段母体暴露对子代生长发育的影响,已成为研究热点。本文从胎盘、生殖系统及内分泌系统的发育方面阐述孕期双酚A暴露对子代的影响及表观遗传学机制,为制定孕期双酚A暴露的标准提供理论依据。