基于MOOC的混合式教+学模式生物化学教学改革与实践

目的:探讨基于MOOC的混合式教+学模式在生物化学教学实践中的应用效果。方法:选取某医学院校2018级口腔医学专业本科生64人为对照组、2019级口腔医学专业本科生64人为试验组开展教学实践研究。对2组平时成绩、期末成绩进行比较,并采用调查问卷对基于MOOC的混合式教+学模式教学效果进行评价。结果:2组学生的平时成绩、期末成绩比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在参与课程反馈的学生中,全程跟随老师听课的同学约占89.06%;有56.25%的学生听课注意力集中时间在31~45 min。结论:基于MOOC的混合式教+学模式有效提高了学生学习的主动性和参与度,优化了考核方式,提高了学生的学习成绩,从整体上提升生物化学的教学质量和效果。为进一步寻找更适合生物化学的教学改革模式提供了重要的理论基础和参考依据。

血清心肌酶谱及肌钙蛋白T测定在急性心肌梗死诊断中的意义

目的:通过测定血清心肌酶谱及肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT),探讨其对急性心肌梗死(acute myocardialinfarction,AMI)的诊断价值。方法:选取AMI患者45人作为病例组,健康体检者50人作为对照组,采集其静脉血进行分离、检测,数据经统计学分析后进行比较。结果:在AMI早期,心肌酶谱和cTnT的含量明显高于对照组,且cTnT升高的幅度较心肌酶谱显著,病例组cTnT检测阳性率较高。结论:联合检测血清中的心肌酶谱与cTnT,具有协同互补的作用,对AMI的早期诊断及疗效观察有较高价值。

秘制烧伤膏对大鼠浅Ⅱ度烧烫伤的保护作用及机制研究

目的:观察秘制烧伤膏对大鼠浅Ⅱ度烧烫伤的疗效并探讨其作用机制。方法:建立经典大鼠浅Ⅱ度烧烫伤模型,将72只大鼠随机分成秘制烧伤膏组、京万红组和空白对照组,并分别于烧烫伤后1、2、3、7、14、21 d 6个时间点做描记称重法,以烧烫伤后2 d的创面面积作为烫伤面积计算各时间点创面愈合率;取烧烫伤后3 d大鼠背部创面全层皮肤,采用Western blot法测定白介素6(IL-6)、核因子κB(NF-κB)和Caspase-3的蛋白表达水平。结果:烧烫伤后3 d开始,秘制烧伤膏组、京万红组与空白对照组创面愈合率差异均有统计学意义(P<0.01或0.05),秘制烧伤膏组创面愈合率与京万红组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与京万红组、空白对照组比较,秘制烧伤膏组在烧烫伤后3 d时IL-6、NF-κB和Caspase-3蛋白表达水平均有较明显的降低(P<0.05)。结论:大鼠浅Ⅱ度烧烫伤后,秘制烧伤膏通过抑制炎症与凋亡水平来保护创面,促进创面愈合,且治疗效果优于京万红。

SAHA和TRAIL联合使用对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231生长状态的影响

目的实时观测辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合使用对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231生长状态的影响。方法应用实时无标记细胞分析系统(RTCA)动态监测SAHA和TRAIL联合使用对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长状况的影响,并通过Biostation IM活细胞工作站收集各种处理因素对MDA-MB-231细胞增殖干扰作用的形态学证据。结果 x CELLigence RTCA显示SAHA和TRAIL具有协同抑制MDA-MB-231细胞生长的作用,其中50 ng/m L TRAIL与5μmol/L SAHA联合作用效果最佳。活细胞工作站显示SAHA和TRAIL联合处理对MDA-MB-231细胞生长的抑制效果较SAHA或TRAIL单独处理更显著。结论 SAHA和TRAIL联合使用对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长具有协同抑制作用。

Annexin V-FITC/PI法检测脂多糖诱导滋养细胞的凋亡

目的:通过流式细胞术测定法检测脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对滋养细胞凋亡的影响,明确LPS与滋养细胞凋亡的关系,为预防和治疗由滋养细胞凋亡导致的病理妊娠提供新的思路。方法:利用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测不同浓度的LPS处理培养的JEG-3细胞系滋养细胞的凋亡率分析。结果:流式细胞检测结果显示LPS组凋亡指数分别为(2.05±0.33)%、(7.43±0.68)%、(13.43±0.90)%显著高于对照组(0.80±0.15)%,且P均<0.01。结论:Annexin V-FITC/PI法能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞、继发性坏死的细胞;LPS能够诱导滋养细胞过度凋亡,且凋亡率随着LPS浓度的增加而增加。

人肝癌与肝正常细胞系ST3Gal唾液酸转移酶家族表达差异的研究

目的:分析ST3Gal唾液酸糖基转移酶家族在不同肝细胞系表达的差异,为ST3Gal唾液酸糖基转移酶家族与细胞膜唾液酸糖链表达相关性研究奠定基础。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测人正常肝细胞系L-02、人肝癌细胞系HepG-2、SMMC-7721中ST3Gal唾液酸转移酶家族全部成员ST3GalⅠ～Ⅵ的mRNA表达情况。结果:与L-02相比,HepG-2、SMMC-7721中ST3GalⅣ高表达;ST3GalⅠ、ST3GalⅤ、ST3GalⅥ低表达;ST3GalⅡ、ST3GalⅢ不稳定表达。结论:高表达的ST3GalⅣ可能是调节细胞膜表面唾液酸糖链的关键酶之一,并与肝癌细胞膜表面α23-唾液酸糖链表达增高相关。

胃癌发生发展中可溶型Fas/FasL的表达及其意义

目的:探讨Fas/FasL基因蛋白在胃癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组化、特定组织蛋白提取及Westem印迹杂交技术,对20例正常胃黏膜,22例癌前病变和35例胃癌组织中Fas/FasL的表达情况加以分析。结果:正常胃黏膜、癌前病变、胃癌组织的Fas阳性率分别为85%、45%、37%;FasL的阳性率分别为20%、27%、46%。Western印迹杂交显示:胃癌细胞产生的Fas蛋白以分子量30 kDa的可溶型Fas(sFas)为主,伴少量的43 kDa膜型Fas(mFas)。结论:Fas在正常胃黏膜和癌前病变、胃癌组织中的表达强度差异有显著性(P<0.05);FasL在胃癌组织和正常胃黏膜、癌前病变中的表达强度差异有显著性(P<0.05)。

应用唾液酸糖基转移酶基因芯片检测ST3GalⅤ在人肝癌细胞系中的表达

目的:通过唾液酸糖基转移酶基因芯片检测ST3GalⅤ在人正常肝细胞系L-02及肝癌细胞系Hep G-2和SMMC-7721中的表达差异。方法:制备唾液酸糖基转移酶基因芯片,应用基因芯片检测ST3GalⅤ在人正常肝细胞系L-02及肝癌细胞系Hep G-2和SMMC-7721中的表达,并通过蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达水平。结果:唾液酸糖基转移酶ST3GalⅤ在人肝癌细胞系中表达降低。结论:ST3GalⅤ在肝癌细胞系中表达水平的降低导致神经节苷脂GD1a的合成下降从而影响肝细胞的生长增殖。

G蛋白β、γ亚基对M2受体的磷酸化的影响

目的:探讨G蛋白β、γ亚基在调节G蛋白偶联受体激酶活性的重要作用和G蛋白β、γ亚基影响M2受体磷酸化新的作用机制。方法:利用四个柱层析分离G蛋白α亚基与G蛋白β、γ亚基;将纯化的G蛋白β、γ亚基、GRK-2,[γ-P32]标记的ATP与mAChR2,共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳,凝胶片干燥后放射性自显影检测M2受体磷酸化结果。结果:G蛋白β、γ亚基在没有激动剂存在的情况下明显增强M2受体的磷酸化。氨甲酰胆碱明显增强M2受体的磷酸化,阿托品或肝素(GRK2抑制剂)完全阻断M2受体的磷酸化。M2受体的磷酸化是依赖激活剂如氨甲酰胆碱作用发生的,这种依赖关系呈明显的剂量关系。结论:G蛋白β、γ亚基是通过上调GRK2活性增强M2受体的磷酸化的。说明Gβγ同Gα一样均可引起效应蛋白的激活,在细胞信号转导中起同样重要作用,共同介导一系列的生物学效应。

冠心病患者血清超敏C-反应蛋白检测的分析

目的:探讨超敏C-反应蛋白(high sensitive C-reactive protein,hs-CRP)与冠心病(coronary heart disease,CHD)的关系。方法:选沈阳医学院奉天医院CHD患者76例为病例组[稳定型心绞痛(stable angina pectoris,SAP)25例,不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris,UAP)4l例,急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)10例]和50例健康体检者为对照组,分别以免疫比浊法测定其hs-CRP值,并统计分析。结果:CHD组hs-CRP值均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。UAP组和AMI组hs-CRP值均高于SAP组,而AMI组hs-CRP值又高于UAP组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:CHD患者依病情发展情况的不同,hs-CRP的增高程度亦不同,提示hs-CRP与CHD患者病情发展存在密切的关系,可为CHD患者诊断及疗效观察提供参考依据。

胆碱能受体和肾上腺素能受体磷酸化的调节作用机制研究

目的:研究受体激活剂或抑制剂影响G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)介导的胆碱能m2受体和β2肾上腺素能受体膜蛋白(β2-AR)磷酸化的调节机制。探讨兴奋剂使m2受体和β2-AR受体活化,引发受体磷酸化级联反应,进而影响蛋白激酶催化受体磷酸化的起始机制。方法:制备亲和层析柱;利用亲和层析方法从大鼠脑中纯化毒蕈碱乙酰胆碱m2受体;分别将纯化的毒蕈碱乙酰胆碱m2受体或β-肾上腺素受体,G蛋白偶联受体激酶-2,[γ-p32]ATP与受体激活剂或抑制剂共同保温,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白,放射性自显影检测m2受体磷酸化结果。结果:m2受体激活剂氨甲酰胆碱明显增强m2受体的磷酸化,而m2受体抑制剂阿托品或肝素(GRK2抑制剂)完全阻断了m2受体的磷酸化。m2受体的磷酸化是依赖激活剂如氨甲酰胆碱作用发生的,呈明显的剂量依赖关系;β2-AR的激活剂特布他林增强肾上腺素能受体的磷酸化,而肝素可完全阻断β2-AR的磷酸化;并且证实氨甲酰胆碱对mAChR2,特布他林对β2-AR磷酸化的增强作用是选择性的作用结果;HEL299细胞磷酸化实验结果也显示氨甲酰胆碱可以增强HEL299细胞m2受体的磷酸化,阿托品可以抑制HEL299细胞m2受体的磷酸化。结论:实验证实氨甲酰胆碱、特布他林和阿托品等一些m2受体和β2-AR的激活剂及抑制剂对M2受体和β2-AR磷酸化的调节作用。提示激活剂增强m2受体和β2-AR的磷酸化可能是这些受体活化一个重要部分,由此开始加速受体敏感性下调,受体耐受性增强。

血管内皮细胞生长因子受体KDR基因靶向RNA干扰质粒的构建

目的:应用RNA干扰技术设计构建针对血管内皮细胞生长因子受体KDR的小干扰RNA,并观察脂质体转染肺癌细胞A549后的干扰效果。方法:实验于2005-03/2006-01在沈阳医学院生物化学及分子生物学教研室完成。①设计针对KDR编码区有短发夹结构的3条mRNA序列,经退火成互补双链,克隆到pGCsi.H1/neo/GFP载体中构建3个重组质粒,分别命名为KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3。②设立5组:小干扰RNA组,分别转染KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3;阳性对照组,转染pGCsi.H1/neo/siGFP,该质粒载体中的插入序列为针对绿色荧光蛋白的小干扰RNA,不干扰待研究的内源性基因;阴性对照组,转染pGCsi.H1/neo/GFP/NON,该载体为不干扰任何内源性基因的小干扰RNA;空白对照组,转染pGCsi.H1/neo/GFP空载体;正常对照组,不进行任何转染。③对重组质粒进行酶切鉴定、DNA测序分析;脂质体法转染质粒至肺癌A549细胞株后,实时定量PCR检测KDRmRNA的水平变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线。结果:①小干扰RNA表达载体的鉴定:KDR-siRNA1、KDR-siRNA2和KDR-siRNA3表达载体用限制性内切酶NdeⅠ和SmaⅠ进行单酶切后,均产生约713bp、5480bp和2403bp、3790bp两个片段,与预期结果相同。测序结果与设计的编码相应短发夹状KDR-小干扰RNA的寡核苷酸序列一致,证明KDR-小干扰RNA真核表达载体构建成功。②KDR-小干扰RNA对A549细胞中KDRmRNA水平的影响:与阳性对照组、阴性对照组、空白对照组和正常对照组的A549细胞相比,KDR-siRNA1,2,3表达载体转染后的A549细胞KDR基因表达水平均明显受到抑制,抑制率分别为64%、81%和72%,其中以KDR-siRNA2抑制作用最为明显。③KDR-小干扰RNA对A549细胞生长的影响:阳性对照组、阴性对照组、空白对照组、正常对照组的A549细胞生长趋势较为一致,且生长速度均明显高于转染3种KDR-小干扰RNA表达载体的A549细胞,从接种第2天开始差异有显著性意义(t=15.29～17.65,P均<0.01)。结论:血管内皮细胞生长因子受体KDR靶向RNA干扰重组质粒构建成功,该载体能有效抑制肺癌A549细胞KDR基因表达与细胞增殖。

2000例2～6岁儿童血清维生素A营养调查分析

目的：了解沈阳市城区幼儿园2～6岁儿童血清中维生素A的水平。方法：选择沈阳市和平区幼儿园2～6岁儿童的血清样品2000例，以改进的微量荧光光度法进行检测。结果：2000例儿童血清维生素A水平波动在0.700～1.751μmol/L，平均（1.074±0.257）μmol/L。可疑亚临床维生素A缺乏检出率为52.7％，未见维生素A缺乏和亚临床维生素A缺乏。结论：沈阳市城区幼儿园2～6岁儿童维生素A缺乏症、亚临床维生素A缺乏可能已经基本根除，但可疑亚临床维生素A缺乏有上升趋势。降低和根除可疑亚临床维生素A缺乏的发生是我们目前和下一步的工作重点。

HOXD13基因突变及所致疾病

HOX基因家族在脊椎动物的肢体发育中发挥巨大的作用。隶属于HOXD基因群的HOXD13基因参与肢体最远端(手和脚)的发育过程。HOXD13基因突变可以导致并多指(趾)畸形。随着研究的深入,新的突变以及疾病类型不断被发现,对HOXD13基因的结构与功能,以及HOXD13基因突变引起的疾病有了进一步认识。

先天性肢端畸形基因分型的研究进展

先天性肢端畸形是人类最常见的出生缺陷之一，不仅影响肢体的外观形态和功能运动，甚至使患者丧失基本的劳动能力。本文主要论述短指（趾）、并多指（趾）畸形的研究进展。

硫普罗宁治疗急性有机磷中毒所致肝损伤疗效分析

急性有机磷中毒（AOPP）是急诊科常见的危重急症之一，其发生率及中毒死亡率非常高。肝脏作为有机磷进入体内的代谢器官，功能损伤是中毒后致死的原因之一，有研究报道，中重度AOPP中毒的肝损伤发生率为100％。因此，降低AOPP病死率，治疗肝损伤是关键。硫普罗宁（tiopronin．国内商品名称凯西莱）作为肝功能改善和代谢解毒剂，首先由日本研究上市，继之被欧洲十余个国家批准上市。

对长期冷藏保存的双胸蚓溶栓酶活性分析

目的探讨双胸蚓属蚯蚓体内提取的溶栓酶保存与稳定性。方法采用Folin-酚试剂法,对4℃冷藏保存220个月的溶栓酶制剂的酶活性测定,并观测对人实验性血凝块的溶解作用。结果 4℃冷藏保存220个月的溶栓酶制剂的活性为55.1 U/ml;完全溶解(30±5)mg血凝块的时间为(4.3±0.8)h,与冷藏保存初酶活性测定值和溶解血凝块时间变化在10%左右。结论发现在4℃保存的溶栓酶制剂能持续较长时间,提示该溶栓酶具有较强的稳定性。