基于科技平台在医学高等教育中实现立德树人

随着新时代医学的迅猛发展,国家对医学科学研究的重视程度也越来越高,高等医学院校在培养医学人才的同时,也应坚持贯彻党的教育方针,把立德树人作为高等教育的根本任务,贯彻落实在大学生学习过程中的各个阶段。医学高等院校的分子形态学实验室作为重要的科技平台,同样担负着全方位育人、培养优秀医务科研工作者的重要使命。文章阐述了在教学实践过程中通过宣教诚实守信、科学作风、节约意识、爱护他物、团队意识和劳动精神,多角度多环节充分发挥科技平台的作用,在管理的过程中言传身教地融入育人理念,落实立德树人的任务,培养出德才兼备的高素质医学人才。

FAM136A调控胃癌进展的分子机制研究

目的:研究FAM136A(family with sequence similarity 136,member A gene)在胃癌进展中的调控作用。方法:通过生信分析筛选出FAM136A在胃癌中转录水平,通过免疫组织化学染色技术分析FAM136A在胃癌组织中表达特点及临床病理意义,通过侵袭实验(Transwell实验)、细胞活力检测实验(MTT实验)检测FAM136A对胃癌细胞迁移、侵袭、增殖能力的影响。结果:FAM136A在胃癌中转录水平明显高于癌旁组织,FAM136A在胃癌组织中高表达,主要定位于细胞质,病理分期Ⅱ、Ⅲ期、T分期T2~4、N分期1~3期的高表达比例高于病理分期Ⅰ期、T分期T1及N分期0期(P<0.01)。FAM136A增强胃癌细胞迁移、侵袭和增殖能力。FAM136A增强胃癌细胞中上皮间质转化(EMT)和细胞周期相关蛋白的表达。结论:FAM136A可通过调控EMT增强胃癌细胞迁移和侵袭能力。FAM136A可通过调节细胞周期促进胃癌增殖能力。

RNF181在非小细胞肺癌中低表达并抑制肿瘤进展

目的探讨环指蛋白(RNF)181调控非小细胞肺癌的作用及其分子机制。方法采用免疫组织化学染色技术检测RNF181在75例非小细胞肺癌及其癌旁组织的表达情况,分析其临床病理学意义。在非小细胞肺癌细胞系H1299及A549中通过转染质粒或siRNA差异表达RNF181,通过MTT实验,流式细胞技术及Transwell实验分别检测细胞增殖能力,细胞周期及侵袭能力变化情况,通过Western印迹实验检测上皮细胞间质转化(EMT)相关蛋白及细胞周期相关蛋白的表达情况。结果RNF181主要定位于细胞质,其在肺癌组织中呈相对低水平表达(P<0.01),并与肺癌临床分期(P<0.05)及局部淋巴结转移呈负相关(P<0.01)。RNF181可分别抑制H1299和A549的增殖能力,阻滞细胞周期于G1/S期,并可抑制细胞周期蛋白(cyclin)D1的表达;RNF181可分别抑制H1299和A549的侵袭能力,促进内皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)的表达,并抑制神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)、Snail同源物1(Snail)及Snail同源物2(Slug)蛋白的表达。结论RNF181可通过调控EMT及细胞周期抑制非小细胞肺癌进展过程。

瞬时受体电位通道蛋白的跨膜片段分析

目的分析瞬时受体电位（TRP）通道的膜拓扑结构。方法采用糖基化的方法,对传统TRP通道TRPC5的各疏水片段进行膜整合分析。结果 TRPC5通道中,S4～S8片段按顺序分别以Ncyt/Cexo和Nexo/Ccyt的方式插入到膜中,C末端位于细胞内。而S1～S3片段可能存在2种膜整合方式：一种是S1和S3整合到膜上,S2位于细胞外;另一种是混合模式,S1和S3分别位于细胞内,其N末端均位于细胞内。结论 TRPC5通道的S4～S8为跨膜片段,S1～S3片段需进一步实验验证。

bFGF对脑缺血大鼠脑组织HSP70 mRNA表达影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注后热休克蛋白70(HSP70)mRNA的表达,探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元HSP70 mRNA的调节作用及机制。方法应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞1h再灌注损伤24h,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)、RT-PCR法检测海马及皮质内神经元凋亡和HSP70 mRNA的表达。结果大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数增加而HSP70mRNA表达较正常组增加,注射bFGF后神经元凋亡数减少,HSP70mRNA表达明显高于缺血再灌注组。结论bFGF抑制缺血神经元凋亡,参与HSP70 mRNA的调节,对缺血神经元有保护作用。

血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞移动抑制因子mRNA表达的影响

目的探讨血管紧张素(Ang)Ⅱ是否能通过核因子(NF)-κB途径调节巨噬细胞移动抑制因子(MIF) mRNA的表达。方法佛波酯诱导THP-1细胞48 h并使其转化为巨噬细胞,用CD68进行免疫细胞化学鉴定。第一组:对照组、AngⅡ1×10^(-8)mol/L组、AngⅡ1×10^(-7)mol/L组、AngⅡ1×10-6mol/L组、AngⅡ1×10^(-5)mol/L组。第二组:对照组、AngⅡ(1×10(-6)mol/L)组、AngⅡ(1×10^(-6)mol/L)+吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)组、PDTC组。Western印迹方法检测第一组细胞核内NF-κB的表达。Real time RT-PCR方法检测第二组巨噬细胞MIF mRNA的表达。结果 Western印迹随着AngⅡ浓度的升高,NF-κBp65的表达逐渐增强。Real time RT-PCR:AngⅡ组MIF mRNA表达明显高于对照组;给予NF-κB特异性抑制剂PDTC后,由AngⅡ诱导的MIF mRNA表达明显降低。结论 AngⅡ能通过NF-κB信号通路促进巨噬细胞MIF mRNA的表达。

血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞移动抑制因子表达的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是否能通过核因子-κB(NF-κB)途径调节巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的表达。方法:佛波酯诱导THP-1细胞48 h使其转化为巨噬细胞。第一组:对照组:AngⅡ1×10^(-8)mol/L组;AngⅡ1×10^(-7)mol/L组;AngⅡ1×10^(-6)mol/L组;AngⅡ1×10^(-5)mol/L组。第二组:对照组;AngⅡ1×10^(-6)mol/L组:AngⅡ1×10^(-6)mol/L+PDTC组:PDTC组。Western blot检测第一组细胞核内NF-κB的表达。Real time RT-PCR检测第二组巨噬细胞MIF mRNA的表达。ELISA检测第二组巨噬细胞上清液中MIF的含量。结果:Western Blot:随着AngⅡ浓度的增高,NF-κBp65的表达逐渐增强。Real time RT-PCR:AngⅡ组MIF mRNA表达量明显高于对照组:PDTC作用后,由AngⅡ诱导的MIF mRNA表达明显降低。ELISA:AngⅡ组MIF含量明显高于对照组;PDTC作用后,由AngⅡ诱导增加的MIF含量明显降低。结论:AngⅡ能通过NF-κB信号通路促进巨噬细胞MIF mRNA的表达和MIF的分泌。

黄芪甲苷对甲基苯丙胺依赖大鼠脑组织中bcl-2、caspase-3表达的影响

目的探讨黄芪甲苷对甲基苯丙胺(MA)依赖大鼠脑组织bcl-2及caspase-3蛋白表达的影响。方法选用健康Wistar雄性大鼠60只,随机分为空白对照组、MA依赖模型组、黄芪甲苷(10 mg/kg)+MA干预组和黄芪甲苷(20 mg/kg)+MA干预组,每组15只。空白对照组腹腔注射生理盐水;MA依赖模型组及药物干预组按剂量逐日递增法腹腔注射给药,建立MA依赖大鼠实验动物模型;同时灌胃给药黄芪甲苷干预治疗。应用免疫组化法检测大鼠脑组织bcl-2及caspase-3蛋白的表达;应用RT-PCR和琼脂糖凝胶电泳方法测定bcl-2、caspase-3 mRNA的表达。结果与空白对照组比较,MA依赖模型组脑组织的caspase-3表达增加(P<0.01),bcl-2在应激状态下也有明显表达;大剂量黄芪甲苷处理组与MA依赖模型组比较bcl-2表达显著增加(P<0.01),caspase-3蛋白表达明显减少(P<0.01);bcl-2 mRNA的表达显著增加,caspase-3 mRNA的表达明显减少(均P<0.01)。结论黄芪甲苷可明显增加MA依赖大鼠脑组织bcl-2蛋白表达,降低caspase-3蛋白表达作用,并上调bcl-2 mRNA表达和下调caspase-3 mRNA表达的作用。

黏着连接分子A在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨黏着连接分子(JAM)-A在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床病理意义。方法采用免疫组织化学Elivision法检测JAM-A蛋白在82例NSCLC及10例癌旁正常肺组织中的表达。结果 JAM-A主要定位于细胞膜,82例NSCLC组织中,30例(37%)为高表达,在10例癌旁正常肺组织中均为低表达。JAM-A膜高表达同肺癌pTNM分期(P=0.012),局部淋巴结转移(P=0.007),患者不良预后相关(P=0.02)。结论 JAM-A的高表达与NSCLC的进展密切相关,检测JAM-A可为监测NSCLC预后及治疗提供理论依据。

糖基化扫描方法分析KvAP通道电压感受器S3-S4在膜中所处位置

目的探讨分析KvAP通道电压感受器S3-S4在膜中所处的位置。方法采用膜拓扑结构分析和糖基化扫描方法,对KvAP通道的电压感受器S3-S4在膜中所处位置进行分析。结果 KvAP通道中,S3以Ncyt/Cexo方式插入到膜中,其C端终止于G4,S4以Ncyt/Cexo方式插入到膜中,其N端终止于G40。G4及G40均位于人工插入的G-loop中。结论 KvAP通道S3片段的C端与S4片段的N端位于膜内,电压感受器S3-S4可能为非跨膜片段,S3位于膜的中间;此结果与电压门控机制中的KvAP模型一致。

Shaker通道电压感受器S3-S4片段末端氨基酸分析

目的探讨分析传统Shaker通道电压感受器S3-S4在膜中所处的位置。方法采用膜拓扑结构分析和糖基化扫描方法,对传统Shaker通道的电压感受器S3-S4在膜中所处位置进行分析。结果 Shaker通道中,S3以Nexo/Ccyt方式插入到膜中,其C端终止于T329,S4以Nexo/Ccyt方式插入到膜中,其N端终止于L358。结论 Shaker通道电压感受器S3-S4为跨膜片段,与电压门控机制中传统的Shaker模型一致。

经典瞬时受体电位通道蛋白在β淀粉样蛋白诱导的阿尔茨海默病小鼠海马区的表达

目的探讨经典瞬时受体电位（TRPC）通道蛋白在阿尔茨海默病（AD）小鼠海马区中的表达情况。方法将36只ICR小鼠随机分为AD组和对照组，每组18只。13淀粉样蛋白（Aβ）1-42侧脑室注射制作AD小鼠模型。Morris水迷宫试验测定小鼠学习记忆能力。逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测海马区TRPCI-TRPC7mRNA的表达。分别采用免疫荧光和Western blotting检测海马区的TRPC4蛋白表达。结果AD组小鼠水迷宫测试的逃避潜伏期较对照组明显延长（P〈0．01），在目标象限停留时间明显缩短（P〈0．01），穿越平台次数明显减少（P〈0．01）。RT-PCR结果显示，在AD组及对照组TRPCI～TRPC7 mRNA均有不同程度的表达，其中AD组TRPC4mRNA表达较对照组明显增加（P〈0．01）。免疫荧光显示TRPC4表达在海马区的神经细胞膜上，且与对照组相比AD组TRPC4表达增加。Western blotting结果显示AD组TRPC4蛋白表达较对照组增加（P〈0．05）。结论侧脑室注射Aβ1—42寡聚体后，小鼠海马区TRPC4蛋白表达含量增加，提示TRPC4可能参与到钙稳态失调引起的AD的发病机制中。

IGF2R在非小细胞肺癌中的表达及与肿瘤进展的相关性研究

目的探讨胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况与临床病理因素的关系。方法收集80例NSCLC组织及10例癌旁正常肺组织石蜡标本制成切片,利用免疫组织化学染色(SP)法检测IGF2R的表达,并分析其与各种临床病理因素的关系。结果 IGF2R主要定位于细胞膜及细胞质,80例NSCLC组织中,46例(57.5%)为高表达,在非癌性肺组织中弱表达或无明显表达。IGF2R表达同低级别pTNM分期(P=0.038)、局部淋巴结转移减少(P=0.021)相关。结论 IGF2R的表达与NSCLC低级别pTNM分期、局部淋巴结转移减少相关。

推拿手法教学实践能力培养的探索

传统康复方法学是一门重实践的学科,其中推拿手法是基础核心内容。本研究结合《传统康复方法学》推拿手法教学模式,以探索课内理论教学与实训教学相结合为基础,通过组织学生拍摄教学视频包括脚本制作、视频完善、实践活动等,拓展课外实践教学方法与途径,激发学生学习兴趣,调动学生学习的积极性、主动性,提高学生实践操作能力。以强化推拿手法技能教学,提高教学质量。

HPSE2在非小细胞肺癌中表达与预后的关系

目的检测乙酰肝素酶-2(heparanase-2,HPSE2)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况,并探讨其与NSCLC的临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学(S-P法)检测82例NSCLC患者及10例癌旁正常肺组织中HPSE2的表达。结果 HPSE2主要定位于细胞浆,在82例NSCLC组织中,30例(37%)为高表达,在非癌肺组织中弱表达或无明显表达。HPSE2高表达同局部淋巴结转移减少(P=0.012),患者预后生存时间延长相关(P=0.027)。结论 HPSE2的表达与NSCLC局部淋巴结转移减少及患者预后生存时间延长相关。

骨髓源性血管内皮祖细胞的分离培养及鉴定

目的:探索大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的培养、诱导分化及鉴定方法。方法:取大鼠股骨并冲洗骨髓腔,梯度密度离心法获单个核细胞后内皮细胞培养液培养,通过细胞形态、免疫组化和免疫荧光检测CD34、vWF、CD133、ⅧF,以及摄取DiL-acLDL的能力进行鉴定。结果:新分离的骨髓单个核细胞呈圆形,2 d后细胞贴壁,呈梭形或纺锤形,7 d呈集落或线状排列,10 d接近融合,呈鹅卵石样排列;贴壁细胞CD34、ⅧF、vWF、CD133均表达阳性,能摄取Dil-acLDL并结合FITC-Lectin-UEA-1。结论:从大鼠骨髓中分离出EPCs,并初步建立了骨髓源性EPCs分离培养、诱导分化及鉴定方法。

载脂蛋白J与2型糖尿病患者高胰岛素血症的关系

目的:探讨动脉血管壁中载脂蛋白J(ApoJ)与2型糖尿病患者高胰岛素血症的关系。方法:取正常人动脉16例(组);2型糖尿病患者动脉共26例,其中胰岛素水平正常患者14例(组),高胰岛素血症患者12例(组)。应用免疫组织化学方法检测各组动脉内ApoJ的表达和分布,利用计算机图像分析仪对免疫组化染色切片进行灰度扫描作相对定量分析。并采用酶联免疫吸附法测定各组患者血浆ApoJ水平。结果:组动脉壁未见ApoJ阳性免疫沉积物表达,平均灰度值为138.60±6.20;组患者动脉内膜可见ApoJ弱阳性表达,其阳性免疫沉淀物稀疏地散在动脉内膜的细胞外基质中,平均灰度值115.50±7.54;组动脉壁内膜ApoJ阳性沉积物明显增多,主要分布在内皮和平滑肌细胞周围,动脉内膜平均灰度值为82.8±6.2。同时血浆ApoJ水平明显升高。结论:2型糖尿病患者高胰岛素血症与ApoJ呈正相关,ApoJ能从一个侧面反映2型糖尿病患者胰岛素抵抗状况。

环指蛋白181在乳腺浸润性导管癌中表达及其临床意义

目的研究环指蛋白(RN)181在乳腺浸润性导管癌中表达的临床病理学意义。方法采用免疫组织化学染色Elivision方法检测RN181蛋白在79例乳腺浸润性导管癌癌组织及其36例乳腺增生组织中的表达。结果 RN181表达主要位于胞质,RN81在乳腺浸润性导管癌中的表达水平显著低于乳腺增生组织(P=0. 000),且与淋巴结转移呈负相关(P=0. 000)。RN181在乳腺浸润性导管癌中的表达与年龄(P=0. 918)、肿瘤大小(P=0. 817)、组织学分级无明显相关性(P=0. 150)。RN181在4种不同乳腺癌分子分型中的表达存在显著差异性(P=0. 001),其中luminal B型中RN181的表达显著低于其他三种亚型[luminal A,人表皮生长因子受体(HER)2过表达型,三阴型](P<0. 05)。结论 RN181在乳腺癌中可能作为抑癌因子发挥作用,其表达在不同分子亚型乳腺癌中存在差异性,可能成为诊断乳腺癌分子分型的指标。

bFGF对局部性脑缺血再灌注大鼠海马及皮质神经元CREB表达的影响

目的:研究大鼠脑缺血再灌注后cAMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的变化,探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元CREB的调节作用及机制.方法:应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2h再灌注损伤24h,采用TUNEL法、免疫组化检测海马及皮质内神经元凋亡和CREB的表达.结果:大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数增加而CREB表达较假手术组减少,注射bFGF后神经元凋亡数减少,CREB表达明显高于缺血再灌注组.结论:bFGF抑制缺血神经元凋亡,参与CREB的调节,对缺血神经元有保护作用.

RNF181、cyclin D1、Ki-67在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:研究环指蛋白181(ring finger protein 181,RNF181)、cyclin D1、Ki-67在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达水平及其临床病理学意义。方法:采用免疫组织化学染色法检测83例NSCLC组织及癌旁组织中RNF181、cyclin D1、Ki-67的蛋白表达情况并分析其临床病理意义。结果:在NSCLC组织中RNF181主要定位于细胞浆,在肺癌组织中普遍低表达;cyclin D1、Ki-67主要定位于细胞核,在癌组织中相对高表达。不同肿瘤分化患者NSCLC组织中RNF181表达、cyclin D1阳性、Ki-67表达情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05);不同局部淋巴结转移患者NSCLC组织中RNF181表达、cyclin D1阳性情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同年龄、性别、病理类型患者NSCLC组织中RNF181表达、cyclin D1阳性、Ki-67表达情况及不同局部淋巴结转移患者NSCLC组织中Ki-67表达情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。NSCLC组织中RNF181表达与cyclin D1、Ki-67均呈负相关(r_(s)=-0.373、-0.417,P<0.001),cyclin D1与Ki-67表达水平呈正相关(r_(s)=0.526,P<0.001)。结论:RNF181在NSCLC组织中低表达,cyclin D1、Ki-67在NSCLC组织中高表达分别与肿瘤进展相关,并随肿瘤分化程度或局部淋巴结转移情况不同而存在差异,三者蛋白表达水平存在相关性。