siRNA下调S100A4基因表达对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨应用小干扰RNA(siRNA)下调人胶质瘤U251细胞中S100A4基因表达和对U251细胞增殖及凋亡的影响。方法脂质体法U251细胞转染化学合成的针对S100A4基因的特异性siRNA,RT-PCR和Western印迹方法分别检测S100A4 mRNA和蛋白表达水平。分别应用CCK-8法、流式细胞术和酶标仪检测下调S100A4表达对U251细胞增殖、凋亡能力及细胞内含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3活性的影响。结果与正常对照组和阴性对照组比较,siRNA转染48 h后,siRNA-S100A4组细胞中S100A4 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),U251细胞的增殖受到抑制,细胞凋亡率明显增加(P<0.05),且沉默S100A4表达可以上调caspase-3活性(P<0.01)。结论 S100A4 siRNA能有效下调S100A4基因的表达,抑制U251细胞的增殖,诱导细胞凋亡,参与脑胶质瘤的生物学行为。

饥饿诱导胃癌细胞自噬发生及Beclin-1表达的变化

目的探讨饥饿诱导胃癌细胞MKN1自噬的发生及自噬相关蛋白Beclin-1表达的变化。方法培养胃癌细胞MKN1至对数生长期后,以无氨基酸培养液EBSS代替RPMI1640培养液培养细胞,培养12h后收集细胞,应用Western印迹和定量PCR(qRT-PCR)方法分别检测特异性标记自噬的微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)以及自噬相关蛋白Beclin-1的蛋白和mRNA表达。免疫荧光检测饥饿诱导后细胞自噬体的产生。结果饥饿处理12 h后,Western印迹和qRT-PCR检测LC3B和Beclin-1蛋白和mRNA表达与对照组比较均明显增加(P<0.05)。免疫荧光下可见点状自噬体。结论饥饿可以诱导胃癌细胞MKN1发生自噬,Beclin-1与饥饿诱导胃癌细胞MKN1的自噬相关,为进一步研究Beclin-1在胃癌细胞自噬中的作用机制奠定了基础。