应用冷光源内窥镜和点样吸头完成的新型小鼠气管滴注法

目的建立一套新型易操作的小鼠气管插管、滴注方法.方法依靠冷光源内窥镜和电泳点样吸头为插管工具,建立一套新型的插管操作系统.利用高倍放大,完成小鼠气管插管、滴注,研究中1周内对20只♂ CB17-SCID小鼠（体质量24～28g）进行插管和滴注80μL环境污染细颗粒物悬液.结果共完成80次插管、滴注操作,末次滴注24h后解剖小鼠可见气管低端和肺内有散在的空气污染细颗粒物分布.结论应用冷光源内窥镜和电泳点样吸头进行的气管滴注新方法操作快速、简洁、可重复性好,能够广泛用于小鼠呼吸系统的插管和滴注操作.

PM2.5刺激非小细胞肺癌A549细胞凋亡基因的表达

目的观察PM2.5暴露对非小细胞肺癌A549细胞的影响,进而了解其对细胞的毒性作用机制。方法利用细胞活力检测法确定PM2.5暴露的浓度;用透射电镜观察暴露后细胞的形态特征;通过转录组测序及实时定量RT-PCR,对损伤发生机制进行预测。结果通过细胞活力检测确定PM2.5暴露处理的终浓度为50μg/cm2。形态学检测表明,暴露处理后,细胞核内染色质凝聚,边集于核膜。凋亡相关基因IL1A、IL1B、CXCL3、CXCL2、PTGS2、IRAK2的表达上调,TP53和TNFRSF1A的表达下调。结论通过刺激细胞凋亡基因表达水平的变化,PM2.5暴露诱导了非小细胞肺癌A549细胞的凋亡。

PM_(2.5)对大鼠脾细胞中氧化损伤及凋亡蛋白的影响

为探讨大气细颗粒物PM_(2.5)暴露对Wistar大鼠急性脾损伤的影响,PM_(2.5)冬夏混合膜由实验室保留,将大鼠随机分为实验组和对照组(n=8),实验组4 h/d、750μg·mL^(-3)PM_(2.5)口鼻暴露处理,对照组生理盐水,5 d/周,共2周,染尘结束24 h后处死,称重收集脾脏上清和细胞,HE染色观察脾组织形态学变化。检测脾上清H_2O_2含量水平。Cell viabitity assay和qRT—PCR仪器检测脾细胞的Bax、Bc L-2水平的表达情况。HE染色结果发现,PM_(2.5)可增加脾生发中心的淋巴细胞。PM_(2.5)染尘后实验组大鼠体重明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。PM_(2.5)染尘可增加脾上清H2O2含量水平。脾细胞活力和凋亡结果表明,PM_(2.5)暴露可抑制脾细胞的增殖能力以及上调Bax和Bcl-2基因表达。PM_(2.5)染尘可引起脾脏氧化损伤,促使氧化应激水平上升,发生炎症反应,增加脾细胞的增殖能力,最终对脾产生一定的损害作用。

PM2.5暴露对鸦胆子油乳治疗荷瘤肺癌小鼠腹腔巨噬细胞的作用

目的探讨PM2.5暴露对鸦胆子油乳治疗荷瘤肺癌小鼠腹腔巨噬细胞的活性调节作用。方法建立肺癌荷瘤A549细胞小鼠模型32只,随机分为4组:治疗组1(鸦胆子油乳治疗组)和对照组1,治疗组2(PM2.5暴露联合鸦胆子油乳治疗组)和对照组2,每组8只。收集腹腔巨噬细胞,检测520 nm吸光度值。结果腹腔巨噬细胞吞噬能力显示,治疗组1高于对照组1,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组2低于对照组2及治疗组1高于治疗组2,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 PM2.5暴露对鸦胆子油乳治疗荷瘤肺癌小鼠腹腔巨噬细胞的活性有抑制作用。

应用小鼠灌胃针和点样吸头建立的大、小鼠肺泡灌洗新方法

目的 建立一套新型易操作的大、小鼠肺泡灌洗新方法。方法 依靠小鼠灌胃针和电泳点样吸头为工具,建立一套新型的大、小鼠肺泡灌洗操作系统。分别使用10 ml或1 ml的无菌注射器配合插管工具完成肺泡灌洗操作。研究中对10只雄性Wistar大鼠（体重220-250 g）和10只雄性CB17-SCID小鼠（体重24-28 g）进行插管和肺泡灌洗液收集。结果 共完成20次大、小鼠的插管和肺泡灌洗操作,成功收集到1×107个大鼠肺泡巨噬细胞和3×106个小鼠肺泡巨噬细胞。结论 应用小鼠灌胃针和电泳点样吸头完成的收集大、小鼠肺泡灌洗液新方法,能够被广泛用于大、小鼠呼吸系统疾病模型的研究。

链球菌与香菇多糖联用对PM_(2.5)暴露肺癌小鼠呼吸道菌群的影响

目的观察潜在益生菌链球菌C17、D19株与香菇多糖联合应用对PM_(2.5)暴露肺癌荷瘤小鼠呼吸道菌群多样性的影响。方法尾静脉注射A549细胞悬液构建荷瘤SCID小鼠模型,气管滴注40μL 20mg/mL的PM_(2.5)溶液,每周1次,持续4周。实验组(LS组)给予链球菌C17、D19株混合菌液喷雾给药,每周2次,同时腹腔注射3mg/kg香菇多糖。对照组(PM组)仅喷雾生理盐水。比较组(LE组)喷雾生理盐水同时给予香菇多糖。全部小鼠均持续处理4周。利用高通量测序对咽拭子样本中的菌群进行16SrDNA序列检测,进行OTU统计、物种组成分析、指示物种分析、Alpha多样性分析、Beta多样性分析。结果PM组小鼠OTU数量大于LE组、LS组。各组主要优势菌为厚壁菌门、变形菌门、放线菌门、蓝细菌门、拟杆菌门。与PM组比较,LE组(t=3.2064,P=0.0071)、LS组(t=3.4061,P=0.0098)放线菌门丰度增加显著,LE组蓝细菌门丰度减少显著(t=2.7316,P=0.0340)。属水平上,LS组与LE组各优势菌属总丰度显著高于PM组。与PM组比较,LS组小鼠呼吸道嗜气杆菌属(t=7.1686,P=0.0008)和普雷沃菌属(t=2.2702,P=0.0230)丰度显著增加,LE组嗜气杆菌属(t=2.5238,P=0.0429)、加德纳菌属(t=2.4720,P=0.0445)、奇异菌属(t=4.8123,P=0.0030)、弧菌属(t=2.4597,P=0.0210)、普雷沃菌属(t=2.6076,P=0.0319)丰度差异显著。种水平上,与PM组比较,LS组小鼠呼吸道酸性链球菌(t=2.4456,P=0.0450)、Rodentibacter_heylii(t=7.1686,P=0.0008)增加显著,LE组普雷沃菌(t=2.2751,P=0.0462)、Rodentibacter_heylii(t=2.5238,P=0.0340)增加显著。Alpha多样性分析显示,LE组与PM组间、LS组与PM组间菌群Chao指数(t=2.3867,P=0.0388;t=5.8780,P=0.0006),Ace指数(t=2.8267,P=0.0192;t=6.1316,P=0.0009)差异有统计学意义。Beta多样性分析显示,LS组与PM组间(t=2.9994,P=0.0056)、LE组与PM组间(t=4.8938,P<0.0001)OTU水平比较差异有统计学意义。结论潜在益生菌C17、D19株与香菇多糖联合应用可调节PM_(2.5)暴露肺癌小鼠呼吸道的菌群多样性。