生物化学课程讲授雏议

在医学院校的课程中,生物化学是主要课程之一。学习并掌握这门课程,对于学习其它基础课与临床课,乃至以后从事医疗、科研工作都具有重要意义。然而,学生普遍感到生化课难学,原因何在?教师如何才能讲好生化课?本文结合我们的教学实践加以探讨。1 生物化学课难学的原因 生化是以化学知识为基础来探究生命现象规律的学科。这就要求学习者具备比较扎实的化学基础知识,尤其是有机化学的知识。

ECGF生物活性与肝素的相关性研究

观察肝素与内皮细胞生长因子（ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ。ＥＣＧＦ）的分离、生物活性及促创伤愈合作用的相关性。结果表明：用肝素亲和层析分离ＥＣＧＦ纯度高、产量多；肝素可使ＥＣＧＦ生物活性增加；另外，在动物实验中，肝素与ＥＣＧＦ合用可使创伤提前愈合。

碱性离子水和酸性离子水中有关化学成分的测试

对沈阳东宇电气公司研制的馨波尔离子水生成器制出的碱性离子水和酸性离子水中的钙、镁离子、溶解氧、余氯含量及pH值进行了测试,并与自来水对照。其结果为钙镁离子含量:碱性离子水依次大于自来水和酸性离子水;溶解氧含量:酸性离子水依次大于自来水和碱性离子水;余氯含量:自来水大于酸性离子水并远远大于碱性离子水;pH值:碱性离子水依次大于自来水和酸性离子水。

前降钙素在感染和败血症诊断中的临床价值

目的探讨血清前降钙素(PCT)检测对进入重症监护病房(ICU)患者发生严重感染和败血症的诊断价值。方法选择ICU患者121例,其中无感染患者24例作对照组,全身炎症反应综合征(SIRS)患者31例,败血症患者26例,重症败血症患者25例和败血症休克患者15例。检测血清PCT水平,应用受试者工作特征曲线(ROC)进行评价。结果败血症组(平均2.39ng/mL)、重症败血症组(4.64ng/mL)和败血症休克组(5.86ng/mL)与对照组(0.59ng/mL)相比,PCT水平有显著差异,并且随感染程度加重有升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。感染组(败血症组+重症败血症+败血症休克组)PCT水平高于非感染组(对照组+SIRS组),差异有统计学意义(P<0.05)。PCT水平在ROC曲线下的面积为0.897,临床诊断的临界点是1.0ng/mL,灵敏度和特异度分别为85.84%和80.00%。结论经ROC曲线评价,PCT可以作为ICU患者感染和败血症的鉴别诊断指标。

肿瘤相关抗原在人大肠癌中的表达

目的应用ND-1单抗和抗CEA单抗对大肠癌细胞的标记情况对比,探讨LEA在大肠癌中的表达及意义。方法采用流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测大肠癌细胞系LEA和CEA的表达。并采用间接ELISA法测定LEA和CEA单抗对大肠癌细胞系的特异性。应用免疫组化检测其在大肠癌组织中的表达。结果流式细胞仪检测显示,LEA抗原在CCL-187、CX-1、CLone A和CCL-229细胞表达的阳性峰平均荧光强度呈递减趋势,并且强于CEA的表达量(P<0.01)。LEA在高分化大肠癌细胞系CCL-187和CX-1高度表达,并且低侵袭大肠癌细胞系CCL-187和CX-1LEA表达量高于高侵袭大肠癌细胞系CLoneA和CCL-229(P<0.01)。ELISA检测表明,与抗CEA单抗相比,ND-1单抗对大肠癌细胞具有很强的特异性结合力(P<0.01)。LEA的表达阳性率随大肠腺癌组织分化程度降低而下降(P<0.01),而且对高分化腺癌表现出更高的选择性。抗CEA单抗对高、中、低分化癌选择性相似(P>0.05)。结论LEA是更加特异的高分化大肠癌相关抗原。LEA可能与癌细胞的分化程度、侵袭力、恶性程度有关,LEA可作为早期诊断和判断大肠癌恶性程度的有用指标。

IL-8基因在幽门螺杆菌相关性胃疾病中的表达

目的研究白细胞介素8(IL-8)基因与幽门螺杆菌(H.pylor)i相关性胃疾病发生发展的关系。方法采用免疫组化技术检测144例H.pylori相关性胃疾病胃黏膜标本中IL-8蛋白表达,其中浅表性胃炎54例、胃溃疡33例、萎缩性胃炎57例;另外探讨了72例不同胃黏膜标本H.pylori感染及其根除治疗对IL-8蛋白产生的影响。结果胃疾病IL-8蛋白阳性表达率H.pylori阳性组高于H.pylori阴性组(55.4%,40.3%);浅表性胃炎IL-8蛋白阳性表达率H.pylori阳性组高于H.pylori阴性组(P<0.05);胃溃疡和萎缩性胃炎IL-8蛋白阳性表达率H.pylori阳性组高于H.pylori阴性组。H.pylori阳性组和H.pylori阴性组从浅表性胃炎→胃溃疡→萎缩性胃炎中IL-8蛋白阳性表达率逐渐上升(P<0.05)。根除H.pylori治疗后IL-8蛋白阳性表达率低于根除H.pylori治疗前。结论IL-8表达增强可能与HP相关性胃疾病有关。H.pylori感染可能通过IL-8介导促进癌前状态的发生。根除H.pylori治疗可以影响癌前状态。

人胎肝细胞生长刺激物质的分离纯化及活性测定

从人胎肝组织纯化肝细胞生长刺激物质（ｈＨＳＳ），经过匀浆、热处理、乙醇沉淀、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５凝胶过滤，聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳及ＩＳＣＯＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ转移浓缩电泳等步骤，分离出具有ＨＳＳ活性的蛋白质。经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳显示５３ＫＤ与１８ＫＤ两条带。

SAHA和TRAIL联合使用对乳腺癌雌激素受体阳性细胞MCF-7生长的影响

目的实时观测SAHA和TRAIL联合使用后对乳腺癌雌激素受体阳性细胞MCF-7生长的影响。方法实时无标记动态细胞分析系统(real time cell analysis,RTCA)动态监测各种处理因素对乳腺癌MCF-7细胞生长状况的影响并通过Biostation^(TM)活细胞工作站实时收集各种处理因素对乳腺癌MCF-7细胞增殖干预的形态学证据。结果xCELLigence RTCA实时无标记动态细胞分析系统显示,随着TRAIL的加入,SAHA对MCF-7细胞的抑制作用明显增强。SAHA和TRAIL的联合用药可能提高了SAHA对MCF-7细胞的敏感性。实时活细胞工作站成像实验进一步证明SAHA和TRAIL联合用药对MCF-7乳腺癌细胞的抑制作用强于SAHA或TRAIL单独用药。结论SAHA和TRAIL的联合使用对MCF-7细胞的生长具有协同抑制作用。

亲和层析法纯化抗大肠肿瘤相关抗原的单克隆抗体

目的制备和纯化鼠源性抗人大肠肿瘤单克隆抗体(单抗),分析其相应抗原在大肠肿瘤细胞中的表达。方法常规方法免疫BALB/c小鼠制备腹水,应用G蛋白亲和层析柱对小鼠腹水样品进行分离纯化。采用SDS-PAGE、间接免疫荧光(IFA)、间接ELISA检测纯化后抗体的纯度、活性、效价和特异性。用免疫细胞化学、流式细胞术和免疫组织化学技术S-P法检测其相应抗原在大肠肿瘤细胞株和组织中的表达。结果还原性SDS-PAGE显示所获抗体为单一组分。应用间接ELISA检测抗体效价为1∶106,纯化后的抗体对大肠肿瘤细胞株具有特异结合活性,并在高分化大肠腺癌组织中表现出更高选择性(P<0.01)。结论G蛋白亲和层析法操作简便,所得单抗的纯度高,特异性强,生物学活性好。对临床上早期诊断大肠肿瘤将具有较大的意义。

碱性成纤维细胞生长因子对人晶体上皮细胞增殖及一氧化氮和诱导型一氧化氮合酶的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人晶体上皮细胞内一氧化氮(NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、基因及蛋白表达的影响。方法:以含10%胎牛血清(FBS)与100mg/L青霉素和100mg/L链霉素的DMEM培养液培养及传代人晶体上皮细胞。用0.001,0.01,0.1,1,10和100μg/L浓度的bFGF作用于晶体上皮细胞,用MTT法检测晶体上皮细胞的增殖情况;用Griess法测定NO含量;分别用RT-PCR方法及westernblot法检测iNOS基因及蛋白的表达。结果:①bFGF对细胞增殖的影响:与对照组比较,除100μg/L组外,其余浓度为0.001～10μg/L的bFGF对人晶体上皮细胞的增殖效应均大于对照组,其中0.01～10μg/L的bFGF对人晶体上皮细胞的增殖效应差异显著(P<0.05)。②bFGF对晶体细胞NO水平、NOS活性及iNOS的基因和蛋白表达的影响:对照组和0.001,0.01,0.1μg/LbFGF组NO水平较低,而在1μg/L和10μg/L的bFGF使人晶体上皮细胞的NO含量增高,0.1～10μg/L的bFGF使人晶体上皮细胞的NOS活性增高、使iNOS的基因和蛋白表达增强。结论:可以促进人晶体上皮细胞的增殖,使NO含量和iNOS的活性和蛋白表达增高。

碱性离子水乳化三油酸甘油酯及胆固醇的试验研究

为检验碱性离子水对血脂的影响,我们对碱性离子水乳化三油酸甘油酯及胆固醇进行试验,并以自来水及与碱性离子水pH值相同的碱性自来水为对照。结果表明,碱性离子水乳化三油酸甘油酯和胆固醇的情况依次好于碱性自来水和自来水。

中药有效成分对肿瘤恶病质脂耗竭的抑制作用

为探索抑制毒激素-L所诱导的恶病质脂耗竭的有效药物,将中药有效成分次黄嘌吟、尿囊素、腺嘌吟、大叶茜草素及欧琴素—乙等分别与毒激素-L和从大鼠获得的脂细胞一起孵育,并与单纯中药组和单纯毒激素-L组相比较。结果5种中药成分和毒激素-L组的游离脂肪酸的含量明显低于单纯毒激素-L组(P<0.01),提示5种中药成分均可抑制毒激素-L所诱导的脂解反应。而单纯中药组与正常对照组无差异(P>0.05),提示该5种中药成分对正常脂解反应无影响。

构建siRNA慢病毒载体抑制A549细胞株VEGF受体KDR基因的表达

目的构建针对血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR基因的siRNA慢病毒载体,鉴定其对肺癌细胞株A549基因干扰效果。方法设计合成针对KDR编码区的三条siRNA序列及阴性对照序列,克隆到PGCL-GFP载体,构建重组质粒,行PCR鉴定、DNA测序分析;转染人肺癌细胞株A549,Real-Time PCR及Western blot分别检测KDR mRNA、蛋白水平变化;细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期。结果成功构建pGCL/KDR-siRNA重组质粒。A549干扰组KDR mRNA表达率下降,KDR蛋白表达量明显减少,细胞周期改变。结论构建的pGCL/KDR-siRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制A549细胞株KDR基因的表达。

乙型肝炎病毒感染者PreS1-Ag、PreS2-Ag与HBV测定分析

目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)感染者PreS1-Ag和PreS2-Ag与HBV-M之间的关系。方法:用ELISA法对316例HBV感染者血清进行PreS1-Ag和PreS2-Ag及HBV-M检测。结果:对照组的血清PreS1-Ag和PreS2-Ag与HBV-M为阴性,而HBV感染者血清PreS1-Ag和PreS2-Ag在三种主要模式中的检出率分别为88.8%,76.3%;70.3%,55.4%;68.2%,55.7%。结论:PreS1-Ag和PreS2-Ag更敏感地反映了HBV的感染和复制程度,对乙肝血清标志物检测起重要的补充作用。

寡核苷酸探针制备的优化

目的:探讨寡核苷酸微阵列制备中适合使用的探针浓度、探针缓冲液pH值、离子强度、优化杂交条件。方法:选取人白细胞抗原DQA1位点,针对多态性集中的外显子2设计一对保守引物及16条特异性分型探针;分别用ddH2O和0.1、0.2mol/L碳酸盐缓冲液(pH=7)稀释探针至100μmol/L;选取合适的缓冲液浓度后,调碳酸盐缓冲液为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0等6种pH值,选取最优pH值及离子强度,分别溶解探针至20、50、100、200μmol/L,比较上述不同条件的杂交结果。结果:用0.1mol/L、pH9的碳酸盐缓冲液溶解探针杂交效果最佳;探针浓度为20μmol/L时信号弱,其他浓度下无显著差别。结论:通过探针制备的优化可以提高杂交效率,探针浓度与杂交信号强度无明显正相关。

双胸蚯蚓溶栓酶对胎鼠大脑神经细胞生长发育的作用

为了探讨双胸蚯蚓溶栓酶对神经细胞的影响及其作用机制,应用神经细胞体外培养技术观察了1—30日内在不同剂量双胸蚯蚓溶栓酶作用下的Wis-tar胎鼠大脑神经细胞的生长发育过程。结果显示,不同剂量溶栓酶对神经元突起的数量和长度以及轴索的形成和发展均有影响,表明双胸蚯蚓溶栓酶对体外培养的胎鼠大脑神经细胞的生长发育有促进作用。

抗人大肠癌单克隆抗体的制备及应用

目的制备和纯化抗人大肠癌单克隆抗体(ND-1),分析其在大肠癌诊断中的应用价值。方法常规免疫小鼠制备腹水,腹水经离心和过滤后,应用G蛋白亲和层析法进行纯化。采用SDS-PAGE、间接免疫荧光(IFA)、间接ELISA检测纯化后抗体的纯度、活性、效价和特异性。并用免疫组织化学SP法检测在大肠癌组织中的表达。结果经SDS-PAGE分离可见两条相对分子质量(Mr)分别为55 000和25 000明显的两条蛋白条带。间接ELISA检测抗体效价为1∶1 000 000,ND-1抗体对表达相应抗原的大肠癌细胞株具有特异结合活性。人大肠癌组织切片经ND-1抗体免疫组织化学染色阳性率为82.9%,其中高分化腺癌阳性率为100%。结论应用G蛋白亲和层析法可以很好分离纯化鼠腹水中的IgG1亚型的单克隆抗体,抗体的纯度高,特异性强,生物学活性好,可望成为有效的肿瘤诊断和治疗的手段。

大蒜素改善GJIC功能及抗氧化作用的实验研究

本文从氧自由基、ＧＪＩＣ（细胞间缝隙连接通讯）及ＤＮＡ含量三个不同角度观察了大蒜素可显著减轻氧自由基对细胞的毒害，并能解除苯巴比妥对ＧＪＩＣ的抑制（Ｐ＜００１），提示大蒜素有明显的预防苯巴比妥的动物促癌作用及对抗氧自由基损害的功效。

低氧模拟剂氯化钴对胃癌细胞BGC823中S100A4基因表达的影响

S100A4基因是肿瘤侵袭转移相关的重要基因,该基因高表达与胃癌浸润、淋巴结转移及胃癌细胞体外侵袭力密切相关。为探讨S100A4基因高表达的机制,文章应用低氧模拟剂氯化钴处理胃癌细胞BGC823,RT-PCR、免疫组化、免疫荧光及Westernblotting方法分别检测BGC823细胞中S100A4mRNA及蛋白表达情况。结果显示,氯化钴处理胃癌BGC823细胞后,S100A4mRNA及蛋白表达明显增加。提示低氧模拟剂氯化钴可促进胃癌细胞BGC823中S100A4基因表达。