病理生理学网络课程教学的设计和应用

为探索以课堂理论教学为主,网络教学为辅的新型基础医学教学模式,设计并建设了病理生理学网络课程平台。实践和问卷调查表明网络课程的应用节约了课堂教学时间,提高了课堂教学效率,丰富了课堂讲授内容,促进了学生的自主学习和师生之间教与学的互动;这种教学模式是可行的,较传统的课堂教学显示出了很大的优势。

以病例讨论为中心的PBL教学在病理生理学教学中的应用

应用PBL教学原理,结合病理生理学特点,在教学中实施“以病例讨论为中心”的PBL教学模式.通过问卷调查及试卷分析对实施的效果进行分析。结果表明,此种教学方法与传统教学方法相比,能够激发学生的学习兴趣、培养学生的整体思维能力,提高教学质量。

鞣花酸对纳米二氧化钛颗粒诱导肝损伤的保护作用及其机制

目的探讨鞣花酸(EA)对纳米二氧化钛颗粒(TiO_(2)NPs)诱导的肝损伤发挥保护作用的机制。方法小鼠随机分为对照组、EA组、TiO_(2)NPs组和TiO_(2)NPs+EA组,对照组不做任何处理,TiO_(2)NPs组接受TiO_(2)NPs 150 mg/(kg·d)灌胃处理,EA组接受EA 50 mg/(kg·d)灌胃处理,TiO_(2)NPs+EA组在TiO_(2)NPs 150 mg/(kg·d)给药基础上灌胃给予EA 50 mg/(kg·d)。8周后取材,检测各组肝损伤指标,并观察肝组织病理学形态改变。Western blot检测各组氧化应激相关Ogg1、脂质合成相关Srebp-1c、内质网应激相关Bip、Pdi、ATF6-p50、ATF6-p90、p-Ire1α、Xbp1s、Xbp1u、p-eIf2α、ATF4和肝纤维化相关α-SMA表达。qPCR检测各组维持脂质代谢稳态相关Acox2、Ces1g、Acot7、Pparα、Cpt1a、Scad、Srebf1、Mlxipl、Lxrα、Xbp1s、内质网应激相关Atf4、Chop和肝纤维化相关Tgfb、Col 1α1、α-Sma的mRNA水平。结果与对照组相比,TiO_(2)NPs组小鼠肝指数增加,肝脏结构紊乱。Ogg1、Srebp-1c、Bip、ATF6-p50、ATF6-p90、p-Ire1α、Xbp1s、Xbp1u、p-eIf2α、ATF4及α-SMA的表达显著增多。Acox 2、Ces 1 g、Acot 7、Cpt1a及Scad的mRNA水平显著下降,而Pparα、Srebf 1、Mlxipl、Lxrα、Xbp 1 s、Atf 4、Chop、Tgfb、Col 1α1及α-Sma的mRNA水平显著升高。与TiO_(2)NPs组相比,TiO_(2)NPs+EA组小鼠以上指标呈现相反趋势。结论EA通过减轻氧化应激、内质网应激和脂质代谢紊乱缓解TiO_(2)NPs诱导的肝损伤。

TNF-α单克隆抗体对小鼠变应性鼻炎的治疗作用及机制研究

目的探讨TNF-α抗体干预对小鼠变应性鼻炎(AR)的治疗作用及潜在分子机制。方法 18只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、AR模型组和TNF-α抗体干预组;采用卵清蛋白诱导致敏建立AR模型,于鼻腔刺激前滴加TNF-α单克隆抗体进行治疗;对各组小鼠进行行为学评分,H-E染色观察鼻黏膜组织病理学变化,TUNEL法检测细胞凋亡,ELISA检测鼻黏膜液中TNF-α、IL-1β、Ig E表达水平,Western blotting检测NF-κB p65、IκB及凋亡相关蛋白表达变化。结果 TNF-α抗体干预组变应性鼻炎症状减轻,炎症反应程度降低,鼻黏膜液中TNF-α、IL-1β、Ig E含量及鼻黏膜组织中NF-κB p65、cleaved caspase-3、Bax表达水平较AR模型组显著降低,I-κB及Bcl-2表达增加。结论 TNF-α单克隆抗体干预对小鼠变应性鼻炎具有一定的治疗作用,可能通过抑制NF-κB信号通路激活、调节Th1/Th2平衡、降低炎性因子水平、抑制细胞凋亡发挥作用。

乳腺癌MCF-7细胞p21^(WAF1/CIP1)启动子区HDAC1高功能结合位点的研究

目的研究乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子区调控其转录活性的特异性结合位点。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol·L^(-1)0.88μL SAHA(S组)、0.625 nmol·L^(-1)10μL Leptin(L组)处理24 h,对照组(B组)细胞培养在完全型RPMI 1640培养基中。各组细胞裂解液与HDAC1抗体孵育,收集纯化结合HDAC1抗体的DNA片段,应用Realtime PCR法检测p21^(WAF1/CIP1)启动子区从TSS到其上游(+2^-4 000 bp)f1~f10片段的DNA相对表达量并用2-ΔΔCT法分析。结果 B组中,HDAC1抗体在p21^(WAF1/CIP1)启动子区f1、f8片段有高亲和力,f8片段达最高。S组中,HDAC1抗体与p21^(WAF1/CIP1)启动子区f1~f10片段结合量明显低于对照组,f8片段达最低,而在L组此片段与HDAC1抗体结合量达最大值。结论乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,HDAC1可被招募至p21^(WAF1/CIP1)启动子区,该启动子区上游-2 800 bp至-3 200 bp DNA片段是与HDAC1高度结合的靶功能区。

葡萄糖调节蛋白78和基质金属蛋白酶在口腔鳞状细胞癌中的表达

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和基质金属蛋白酶(MMPs)在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及意义,阐明GRP78在口腔鳞状细胞癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组织化学方法检测26例口腔鳞状细胞癌组织和10例正常口腔组织中GRP78蛋白的表达;采用逆转录PCR检测正常口腔组织和口腔鳞状细胞癌组织中GRP78 m RNA的表达;采用免疫组织化学方法检测26例口腔鳞状细胞癌组织中MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结果 GRP78蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中的阳性表达率为100%(26/26),在正常口腔组织中的阳性表达率为20%(2/10),两者比较差异有统计学意义(P<0.01);与高分化和中分化口腔鳞状细胞癌组织比较,低分化口腔鳞状细胞癌组织中的GRP78蛋白阳性表达强度明显增高(P<0.05)。与正常口腔组织比较,GRP78 m RNA表达水平在口腔鳞状细胞癌组织中的表达增高(P<0.05)。MMP-2和MMP-9蛋白在口腔鳞状细胞癌组织中的阳性表达率均为100%(26/26)。结论 GRP78和MMPs在口腔鳞状细胞癌组织中表达明显升高,提示口腔鳞状细胞癌中GRP78蛋白的表达可能与肿瘤的侵袭和转移相关。

乳腺癌MCF-7细胞p21^(WAF1/CIP1)启动子区雌激素受体α的高功能结合位点

目的研究雌激素受体(ER)α募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子区调控其转录活性的具体作用位点,明确辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)及瘦素(leptin)在调节p21^(WAF1/CIP1)启动子功能中的分子机制。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol/L的SAHA 0.88μL(SAHA组)、0.625 nmol/L的leptin 10μL(leptin组)处理24 h,对照组在完全型RPMI-1640培养基中培养细胞。应用染色质免疫共沉淀技术将各组细胞裂解液与ERα抗体孵育,收集纯化结合ERα抗体的DNA片段,应用实时PCR法检测p21^(WAF1/CIP1)启动子区从转录起始点到其上游(+2^-4 000 bp)f1~f10片段的DNA相对表达量并用2-ΔΔCt法分析。结果对照组中,与ERα抗体结合的f1、f2、f8片段DNA相对表达量较f9片段高出2倍以上(P<0.01)。与对照组比较,SAHA及leptin组f1~f10片段与ERα抗体结合能力均降低,其中SAHA组f8片段DNA相对表达量达最低值(P<0.01),且明显低于leptin组(P<0.01)。SAHA组中以f8片段为对照,其他片段与ERα抗体结合能力均较其升高(P<0.05或0.01)。leptin组中以f8片段为对照,其他片段与ERα抗体结合能力均较其降低,除f1外均有统计学差异(P<0.01)。结论乳腺癌细胞增殖过程中细胞增殖信号招募ERα至p21^(WAF1/CIP1)启动子区,且p21^(WAF1/CIP1)启动子区-2 800 bp^-3 200 bp区域存在与ERα高度结合的靶功能区。

银杏内酯B对体外培养神经细胞延迟整流钾电流的作用

目的研究银杏内酯B对传代培养的SH SY5Y细胞延迟整流钾电流(IK)的影响。方法传代培养SH SY5Y细胞,用浓度为0.1、1.0和10.0μmol/L的银杏内酯B灌流细胞,用全细胞膜片钳技术记录SH SY5Y细胞IK。结果浓度为0.1、1.0和10.0μmol/L的银杏苦内酯B在指令电压+60 mV时使SH SY5Y细胞IK峰密度值分别从(2.19±0.45)pA/pF增大至(2.48±0.37)pA/pF(P<0.05,n=5)、(2.97±0.29)pA/pF(P<0.01,n=5)和(3.15±0.48)pA/pF(P<0.01,n=5)。IK分别增大13.24%、35.62%和43.85%,具有浓度依赖性。结论银杏内酯B能增加IK,并且具有浓度依赖性。

银杏叶提取物预防心肌缺血再灌注损伤的研究

目的：探讨银杏叶提取物对心肌缺血再灌注损伤的临床预防效果。方法随机选取50只SD大鼠，建立缺血再灌注损伤模型，将其随机平均分配为5组，给予药物1组-3组大鼠银杏叶提取物进行治疗，给予对照组大鼠生理盐水静脉注射，假手术组不做处理，对比各组模型一氧化氮、心肌组织丙二醛水平。结果实验组心肌组织丙二醛及一氧化氮水平明显低于对照组大鼠，差异具有显著性（P〈0.05）；不同剂量银杏叶提取物注射组之间差异无显著性（P〉0.05）。结论通过给予心肌缺血再灌注损伤患者银杏叶提取物治疗，能够有效降低机体一氧化氮及氧自由基水平，起到良好的预防效果。

大鼠海马结构CA1位置细胞对感觉错配适应的相关反应

目的观察大鼠经过学习其海马结构接受视觉-前庭-本体感觉错配格局并将其视为匹配的状态后CA1位置细胞的电活动,为揭示海马结构可编码感觉输入的任何组合提供依据。方法应用微电极细胞外记录方法,记录清醒大鼠在适应视觉-前庭-本体感觉错配条件后海马结构CA1位置细胞神经元放电情况。结果 56个位置细胞中,29个神经元在正向状态中有显著的空间放电(正向相关神经元),19个神经元在反向状态中有显著的空间放电(反向相关神经元)。位置野内放电频率的分布呈现不对称及负偏斜。结论大鼠海马结构位置细胞可编码不能自然发生的新的感觉输入配置,更新海马结构比较器内的信息。

老年变应性鼻炎患者血清TNF-α和IL-2的表达水平及临床意义

变应性鼻炎（AR）是特应性机体接触致敏原后由IgE介导的由多种细胞因子参与的鼻黏膜非感染性慢性炎性疾病，临床症状表现为鼻痒、打喷嚏、鼻塞、流鼻涕、头痛、嗅觉减退等。

HDAC1在调控乳腺癌MCF-7细胞p21^(WAF1/CIP1)转录过程中与ERα的协同作用

目的研究乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)、雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)共同募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子特定区域,调控其转录活性的具体作用位点,同时明确辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)及瘦素(Leptin)在调节p21^(WAF1/CIP1)启动子功能中的作用机制。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol·L^(-1)0.88μL SAHA(SAHA组)、0.625nmol·L^(-1)10μL Leptin(Leptin组)处理24 h,对照组(Basal组)细胞培养在完全型RPMI 1640培养基中。各组细胞裂解液先后与HDAC1抗体及ERα抗体进行染色质免疫共沉淀(chromatin-immunoprecipitation,Ch IP)孵育,收集纯化结合HDAC1及ERα抗体的DNA片段,应用Real-time PCR法检测p21^(WAF1/CIP1)启动子区从转录起始位点(transcription start site,TSS)到其上游(+2^-4 000 bp)f1~f10片段的DNA相对表达量,并用2^(-△△CT)法分析。结果Basal组中,HDAC1、ERα抗体在p21^(WAF1/CIP1)启动子区f1、f8片段有高亲和力。SAHA组中,HDAC1、ERα抗体与p21^(WAF1/CIP1)启动子区f1、f8片段结合量明显低于对照组,而在Leptin组两片段与HDAC1、ERα抗体结合量明显高于对照组。结论乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,细胞增殖信号可招募HDAC1、ERα至p21^(WAF1/CIP1)启动子区。该启动子区上游0^-400bp,-2 800^-3 200 bp DNA片段是与HDAC1、ERα共同作用的靶功能区。

高锌抑制鼠前列腺癌细胞RM-1侵袭与诱导凋亡的实验研究

目的探讨锌对鼠前列腺癌细胞RM-1侵袭能力和凋亡的影响。方法将RM-1细胞培养于含Zn2+的培养基中,Zn2+终浓度分别为0μmol/L(control)、100μmol/L、200μmol/L、250μmol/L、300μmol/L,继续培养24 h,MTT检测锌对RM-1细胞增殖的影响;RT-PCR检测肿瘤侵袭和凋亡相关基因mmp-2、mmp-9、bax和bcl-2 m RNA表达。结果 MTT检测结果显示,与对照组比较,不同浓度锌对RM-1细胞增殖抑制率明显增加(P<0.05);与100μmol/L组、200μmol/L组比较,250μmol/L组、300μmol/L组细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01)。RT-PCR结果显示,与对照组比较,250μmol/L、300μmol/L组mmp-2和mmp-9 m RNA及bcl-2 m RNA表达水平明显降低(P<0.01);bax m RNA表达水平明显升高(P<0.01)。结论高锌可以降低RM-1细胞的增殖和侵袭能力,诱导RM-1细胞的凋亡。

视觉-前庭感觉-本体感觉错配适应大鼠海马CA1区位置细胞的放电特征

目的观察大鼠经过学习其海马结构接受视觉-前庭感觉-本体感觉错配格局并将其视为匹配的状态后CA1区位置细胞的电活动,为揭示海马结构可编码感觉输入的任何组合提供依据。方法建立视觉-前庭感觉-本体感觉错配格局,根据对海马结构齿状回θ节律的记录及其电功率的计算,获知大鼠适应该感觉冲突后,应用钨丝微电极细胞外记录方法,记录清醒大鼠在适应视觉-前庭感觉-本体感觉错配条件后海马CA1区位置细胞神经元集群放电情况。结果 56个位置细胞中,14个(25.0%)神经元在感觉正配及错配条件下均有位置稳定的空间放电(双向移动相关经验非依赖神经元),33个(58.9%)神经元在感觉正配及错配条件下依次出现位置不稳的空间放电(双向移动相关经验依赖神经元)。经验非依赖神经元的位置野长度及非对称指数的均值大于经验依赖型神经元,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。此外,位置野内放电频率的分布呈现出不对称及负偏斜。结论动物在适应自然情况下不可能出现的新的感觉配置后,海马结构能编码这一配置并能更新其储存的记忆,接受新的配置作为匹配状态。海马结构可能编码感觉输入的任何组合。

罗红霉素对慢性鼻-鼻窦炎血清中TNF-α和IL-8释放的影响

目的探讨罗红霉素对慢性鼻-鼻窦炎血清中TNF-α和IL-8含量变化的影响。方法选取我院2012年6月—2013年6月收治的32例慢性鼻-鼻窦炎患者作为研究组,另选取20例体检健康患者(对照组)作为研究对象,所有患者均口服小剂量罗红霉素胶囊治疗12周,并采取ELISA双抗体夹心法测定患者血清中TNF-α和IL-8的含量变化。结果与罗红霉素治疗前相比,治疗后患者VAS、Lund-MackayLund-Kennedy评分明显降低(P<0.05);与治疗前相比,研究组患者治疗后血清中TNF-α、IL-8的含量明显降低(P<0.05);与正常组相比,研究组患者治疗前后血清中IL-8的含量明显高于正常组(P<0.05),而研究组治疗前其TNF-α含量比正常组高,治疗后其TNF-α的含量与正常组无明显差异(P>0.05)。结论 TNF-α和IL-8与慢性鼻-鼻窦炎的发生和发展密切相关,罗红霉素可通过抑制TNF-α和IL-8的水平来发挥其抗炎作用,对慢性鼻-鼻窦炎患者血清中TNF-α和IL-8的含量变化进行动态观察有利于评估患者的用药效果及预后的判断。

缺氧诱导因子-1α在鼠肺缺血再灌注损伤中的表达与意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-α)在鼠肺缺血再灌注损伤中的表达及其意义。方法采用沈阳医学院实验动物中心24只健康雄性大鼠,将大鼠分为A、B、C3组,A组在建立缺血再灌注损伤模型前24 h,给予腹腔内注射生理盐水;B组注射DMOG;C组仅左侧开胸,不行缺血再灌注处理,建立缺血再灌注损伤模型。结果 A组可见明显肺组织损伤;A、B组各时间HIF-1α蛋白表达增强,平均灰度值降低;A、B组1 h与6 h的IL-8与丙二醛含量均升高,超氧化物歧化酶活力下降;A组与B组再灌注后6 h,IL-8含量升高,丙二醛含量升高,超氧化物歧化酶活力下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论可通过调节HIF-1α活性达到保护缺血再灌注性肺脏,为治疗肺缺血再灌注损伤提供新的思路。

缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的研究

目的探讨缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡和凋亡相关基因表达的相关机制。方法取体外新生大鼠心肌细胞作为试验样本,将其随即平均分配为四组,A组为对照组,B组为模拟缺血组,C组为缺血2 h后再灌注1h组,D组为缺血持续3 h组。采用TUNEL法对各组样本心肌细胞凋亡情况进行检测,并采用免疫组织化学法对Bcl-2/Bax基因的表达情况进行检测。结果在心肌细胞I/R后,检测到明显的阳性凋亡细胞,同时D组和C组细胞凋亡指数明显高于B组,差异具有显著性(P<0.05);免疫组织化学检测结果表明,Bax蛋白表达明显上调,Bcl-2基因表达明显下调。结论缺血和缺血再灌注均会造成心肌细胞凋亡,同时心肌细胞的凋亡同Bcl-2/Bax基因的表达之间存在一定的相互作用关系。

变应性鼻炎患者血清TNF-α和NO含量的动态变化及其免疫相关性分析

目的探讨变应性鼻炎患者血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)含量的动态变化及其免疫相关性。方法选取我院2012年6月—2013年6月耳鼻喉科收治的32例变应性鼻炎患者,以及另选取慢性鼻炎患者和正常患者各32例作为研究对象,将其分为变应性鼻炎组、慢性鼻炎组和正常对照组,采用EIISA双抗夹心法测定TNF-α及采用硝酸还原法测定血清中NO的水平,并探讨变应性鼻炎患者TNF-α和NO含量的动态变化及其免疫相关性。结果变应性鼻炎组的血清TNF-α和NO水平明显高于正常对照组。与变应性鼻炎间歇期及正常对照组进行比较,变应性鼻炎组患者血清TNF-α、NO水平明显比治疗前要高。变应性鼻炎组患者经过激素治疗后,血清TNF-α、NO水平明显比治疗前要低。结论 TNF-α及NO均参与了变应性鼻炎患者的免疫发病过程,血清TNF-α和NO的检测可以为变应性鼻炎的诊断和治疗提供参考依据。

RNA干扰抑制乳腺癌MCF-7细胞鼠双微体-2基因表达及细胞增殖的实验研究

目的研究乳腺增生症、乳腺导管内癌和浸润性乳腺癌组织中mdm2蛋白的表达及siRNA mdm2对肿瘤细胞增殖的影响。方法采用免疫组织化学方法检测乳腺增生症、乳腺导管内癌和浸润性乳腺癌组织中mdm2蛋白的表达;将siRNA mdm2质粒转染乳腺癌MCF-7细胞,应用MTT检测siRNA mdm2对肿瘤细胞增殖的抑制作用。结果 mdm2蛋白在乳腺导管内癌组织和浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率均为100%(18/18,20/20),在乳腺增生症组织中表达阳性率为20%(4/20)。与乳腺增生症组织比较,乳腺导管内癌组织和浸润性乳腺癌组织中mdm2蛋白阳性表达率明显增高(P<0.01)。MTT结果表明转染pGCsiRNA-mdm2后MCF-7细胞生长受到抑制,与mock组和pGCsiRNA-scramble组比较差异有统计学意义(P<0.01)。转染pGCsiRNA-mdm2 72 h后与48 h比较,MCF-7细胞生长受抑制明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 mdm2在乳腺癌组织中存在广泛表达,其阳性表达可能促进肿瘤细胞的增殖过程。