逍遥散加味通过miRNA326靶向调节ADAM17对自身免疫性甲状腺炎肝郁脾虚大鼠的抗炎机制研究

目的:考察逍遥散加味通过小分子核糖核酸326(miR326)靶向调节肿瘤坏死因子转化酶17(ADAM17)对自身免疫性甲状腺炎肝郁脾虚大鼠抗炎机制的影响。方法:采用高碘水联合甲状腺球蛋白皮下注射对大鼠进行免疫干预建立自身免疫性甲状腺炎,采用慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节的方法复制大鼠肝郁脾虚证模型。随机将33只大鼠按随机数字表法分为模型组、逍遥散加味组、金水宝片组,另12只作为正常组。连续给药8周后,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清游离三碘甲状腺原(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、超敏促甲状腺激素(TSH)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化酶抗体(TPOAb)水平;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测甲状腺组织miR-326、白细胞介素-17信使核糖核酸(IL-17mRNA)、白细胞介素-4信使核糖核酸(IL-4mRNA)、干扰素γ核糖核酸(IFN-γmRNA)水平,全自动超微量样品蛋白质表达定量分析(Wes)检测甲状腺组织ADAM17蛋白表达,流式细胞法检测CD4^(+)IFN-γ^(+)T细胞、CD4^(+)IL-4+T细胞和CD4^(+)IL-17^(+)T细胞比例,苏木素-伊红染色(HE)染色法检测各组大鼠甲状腺组织病理形态。结果:与模型组比较,逍遥散组大鼠血清TSH水平升高(P<0.01),TGAb和TPOAb水平降低(P<0.01),CD4^(+)IFN-γ^(+)T细胞、CD4^(+)IL-17^(+)T细胞比例降低(P<0.01);甲状腺组织miR326、IL-17 mRNA水平降低(P<0.01);ADAM17蛋白表达升高(P<0.01),甲状腺组织病理学明显改变。结论:逍遥散加味可能通过下调肝郁脾虚型实验性身免疫性甲状腺炎大鼠(EAT)甲状腺组织中的miR-326的表达,从而上调靶蛋白ADAM17的表达,抑制Th17细胞分化,进一步减少IL-17 mRNA的表达,最终产生抗炎作用。

二苯甲酰甲烷通过抑制NF-κB/NLRP3炎症小体对糖尿病肾病大鼠肾损伤的影响

目的探究二苯甲酰甲烷对糖尿病肾病大鼠肾损伤的改善作用及可能机制。方法SPF级雄性SD大鼠30只,随机分为对照组(Control组)、糖尿病肾病组(DN组)、二苯甲酰甲烷组(Dibenzoyl组),每组10只。测量大鼠空腹血糖;全自动生化分析仪检测大鼠血清Scr和BUN水平及24h尿微量白蛋白含量;HE染色观察肾组织病理形态变化;Western blot检测肾组织NF-κB、NLRP3、cleaved caspase-1和IL-1β表达。结果二苯甲酰甲烷降低糖尿病肾病大鼠空腹血糖、血清Scr和BUN水平及24h尿微量白蛋白含量,改善肾组织病理损伤,降低肾组织NF-κB、NLRP3、cleavedcaspase-1和IL-1β蛋白表达。结论二苯甲酰甲烷可通过抑制NF-κB/NLRP3信号通路改善糖尿病肾病大鼠肾损伤。

苦参素通过NLRP3信号通路调节自身免疫性甲状腺炎大鼠Th1/Th2细胞平衡

目的探究苦参素对自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺功能的改善及可能机制。方法40只SPF级SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、苦参素低剂量组(OM-L组)和苦参素高剂量组(OM-H组),每组10只。ELISA法检测大鼠血清TSH、TGAb、TPOAb、IFN-γ、IL-12、IL-4和IL-10水平;流式细胞术检测大鼠外周血Th1细胞(CD3^(+)CD8^(-)IFN-γ+细胞)和Th2细胞(CD3^(+)CD8^(-)IL-4^(+)细胞)比例;免疫荧光检测大鼠甲状腺组织ASC表达;Western blot检测大鼠甲状腺组织NLRP3、Caspase-1和GSDMD-N蛋白表达水平;qRT-PCR检测大鼠甲状腺组织IL-18和IL-1βmRNA表达水平。结果苦参素降低自身免疫性甲状腺炎大鼠血清TSH、TGAb和TPOAb水平,降低Th1细胞比例及Th1型细胞因子分泌,增加Th2细胞及Th2型细胞因子分泌,降低甲状腺组织ASC、NLRP3、Caspase-1和GSDMD-N蛋白表达及IL-18和IL-1βmRNA表达。结论苦参素改善自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺功能,恢复Th1/Th2细胞免疫平衡,减轻自身免疫性甲状腺炎,其机制可能与抑制NLRP3炎症小体有关。

Fexara mine通过激活AMPK通路对糖尿病肾病大鼠肾组织损伤的影响

目的探究Fexara mine对糖尿病肾病大鼠肾损伤的改善作用及可能机制。方法SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)和Fexara mine组,每组10只。全自动生化仪检测大鼠血清肌酐水平和24 h尿蛋白量;Masson染色检测大鼠肾组织纤维化;ELISA检测大鼠血清炎症因子IL-1β和TNF-α水平;Western blot检测大鼠肾组织SOD1、SOD2和p-AMPK蛋白表达。结果Fexara mine降低糖尿病肾病大鼠血清肌酐水平和24 h尿蛋白量,减轻大鼠肾组织纤维化,降低大鼠血清炎症因子水平,增加大鼠肾组织SOD1、SOD2和p-AMPK蛋白表达水平。结论Fibronectin对糖尿病肾病大鼠肾组织纤维化具有改善作用,其机制可能与激活AMPK信号通路抑制炎症和氧化应激反应有关。

阿司匹林通过抑制NF-κB信号通路减轻肥胖大鼠相关肾损伤

目的探究阿司匹林对肥胖大鼠肾损伤的改善作用及可能机制。方法Wistar大鼠随机分为对照组(Control组)、肥胖组(Obesity组)和阿司匹林组(Aspirin组),每组10只;全自动生化仪检测大鼠血清肌酐和尿素氮水平;HE染色检测大鼠肾组织病理形态变化;Masson染色检测大鼠肾组织纤维化;免疫荧光检测大鼠肾组织巨噬细胞浸润;DHE染色检测大鼠肾组织活性氧含量;Western blot检测大鼠肾组织NF-κB和p-NF-κB蛋白表达。结果阿司匹林降低肥胖大鼠血清肌酐和尿素氮水平,改善大鼠肾组织病理损伤和纤维化,降低大鼠肾组织巨噬细胞浸润和活性氧含量,降低大鼠肾组织p-NF-κB蛋白表达水平。结论阿司匹林对肥胖大鼠肾损伤具有改善作用,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。

白藜芦醇介导PERK/ATF4/CHOP信号通路改善自身免疫性甲状腺炎大鼠内质网应激

目的探究白藜芦醇对自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺细胞内质网应激及细胞凋亡的作用。方法30只SPF级SD大鼠随机分为对照组(Control组)、自身免疫性甲状腺炎组(AIT组)和白藜芦醇组(Res组),每组10只。ELISA法检测大鼠血清TGAb、FT3、SOD和MDA水平;TUNEL检测大鼠甲状腺组织细胞凋亡水平;Western blot检测大鼠甲状腺组织细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、内质网应激相关蛋白GRP78、ATF6和p-EIF2α及PERK/ATF4/CHOP信号通路相关蛋白p-PERK、ATF4、CHOP表达水平。结果白藜芦醇降低自身免疫性甲状腺炎大鼠血清TGAb、MDA和FT3水平,增加SOD水平,降低甲状腺组织细胞凋亡水平,降低Bax、GRP78、ATF6、ATF4和CHOP蛋白表达水平及EIF2α和PERK蛋白磷酸化水平,增加Bcl-2蛋白表达水平。结论白藜芦醇通过抑制PERK/ATF4/CHOP信号通路抑制自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺细胞内质网应激与细胞凋亡。

miR-149-5p/PANX1轴对垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究miR-149-5p对垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用及可能机制。方法qRT-PCR检测垂体瘤组织及正常垂体组织中miR-149-5p表达;将miR-149-5p模拟物转染垂体瘤细胞,Edu实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;生物信息学分析PANX1 mRNA 3′UTR上miR-149-5p的潜在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证;qRT-PCR和Western blot检测转染miR-149-5p模拟物后垂体瘤细胞PANX1表达;转染miR-149-5p模拟物后,Edu实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。结果miR-149-5p在垂体瘤组织中下调;过表达miR-149-5p抑制垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭;miR-149-5p靶向结合PANX1并抑制其表达;过表达PANX1逆转了过表达miR-149-5p对垂体瘤细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论miR-149-5p抑制PA细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向抑制PANX1表达有关。

基于miR326调节Th17细胞探讨逍遥散加味颗粒对实验性自身免疫性甲状腺炎肝郁脾虚大鼠炎症的影响

目的从miR326调控Th17细胞分化角度,探讨逍遥散加味颗粒干预实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)肝郁脾虚模型大鼠炎症反应的作用机制。方法将48只大鼠随机分为正常组(12只)和造模组(36只)。采用高碘水喂养联合皮下注射甲状腺球蛋白对大鼠进行免疫干预,每周2次,并于第5~8周进行加强免疫,每周1次。从第5周开始采用慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节法复制大鼠肝郁脾虚证模型。将造模成功大鼠按随机数字表法分为模型组、逍遥散组、金水宝组,逍遥散组灌胃逍遥散加味颗粒混悬液13.63 g/(kg·d),金水宝组灌胃金水宝片混悬液477 mg/(kg·d),连续给药8周。采用ELISA法检测血清游离三碘甲状腺原(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、超敏促甲状腺激素(TSH)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化酶抗体(TPOAb)水平;PCR法检测甲状腺组织miR326、IL-17 mRNA、IL-4 mRNA、γ-干扰素(IFN-γ)mRNA水平,Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统检测甲状腺组织E26转化-特异性1(Ets-1)蛋白表达,流式细胞术检测CD4+IFN-γ+T细胞、CD4+IL-4+T细胞和CD4+IL-17+T细胞比例,HE染色法观察大鼠甲状腺组织病理形态。结果与模型组比较,逍遥散组大鼠血清TSH[(3328.88±724.45)pg/ml比(1900.25±203.91)pg/ml]水平升高(P<0.01),TGAb[(63.60±9.01)IU/ml比(96.19±10.74)IU/ml]和TPOAb[(6.84±1.45)IU/ml比(11.62±2.06)IU/ml]水平降低(P<0.01),甲状腺组织miR326[(3.57±0.57)比(7.63±0.90)]、IL-17 mRNA[(6.71±0.97)比(13.02±1.18)]水平降低(P<0.01),Ets-1[(0.71±0.40)比(0.39±0.02)]蛋白表达升高(P<0.01),CD4+IFN-γ+T细胞[(13.10±2.23)%比(20.7±2.07)%]、CD4+IL-17+T细胞比例[(18.90±1.31)%比(25.1±1.03)%]降低(P<0.01),甲状腺组织病理学明显改善。结论逍遥散加味可通过下调EAT肝郁脾虚大鼠甲状腺组织中miR-326表达,上调靶蛋白Ets-1表达,抑制Th17细胞分化,进一步减少IL-17 mRNA表达,改善EAT肝郁脾虚大鼠炎症反应。