突发性耳聋患者中医辨证分型与纯音测听指标的对照

目的:对突发性耳聋患者中医辨证分型与纯音测听指标进行对照,分析二者的关系及规律性。方法:选择2002-10/2005-10在沈阳医学院附属沈州医院门诊就诊和住院治疗的突发聋患者192例,入选病例均在治疗开始前由资深中医师进行辨证诊断,根据患者的病史和症状,以及舌象、临床表现,初步拟设风热侵袭型、肝火上扰型、痰火蕴结型、肾精亏损型、脾胃虚弱型和气滞血瘀型等6个基本证型。并接受了纯音听阈检查,纯音听阈检查使用MedseOB822听力计,采用上升法检查气、骨导纯音听阈。以4级分类法为标准:①轻度聋:纯音听力损失10～30dB;②中度聋:纯音听力损失31～60dB;③重度聋:纯音听力损失61～90dB;④极重度聋:纯音听力损失>90dB。听力损失损失图形按7种图形划分:①高频听力损失型。②低频听力损失型。③中频听力损失型。④碟型、平坦听力损失型。⑤岛状听力损失型。⑥高、低频听力损失型。⑦全频听力损失型。听力学检查时间为治疗前1周内。对不同中医证型突发聋患者纯音测听各项指标作一比较,进行归纳分析。结果:突发聋患者192例最终全部进入结果分析。①突发聋患者192例中,风热侵袭型47例,肝火上扰型28例,痰火蕴结型25例,肾精亏损型11例,脾胃虚弱型14例,气滞血瘀型67例。②与总体样本纯音测听指标比较中,痰火蕴结型、肾精亏损型、脾胃虚弱型和气滞血瘀型患者患耳多数纯音测听指标均明显高于总体样本,而风热侵袭型和肝火上扰型患者多数指标明显低于总体样本(P均<0.05～0.01)。③各组间比较中,痰火蕴结型、肾精亏损型、脾胃虚弱型和气滞血瘀型患者的双侧语音频率、8kHz频率多数测听指标均明显高于风热侵袭型和肝火上扰型患者,另有脾胃虚弱型双侧和气滞血瘀型患者的左侧4kHz频率明显高于后两者(P均<0.05～0.01)。④各证型突发聋患者听力损失程度比较中,风热侵袭型中轻度聋和中度聋较多见,而肝火上扰型则以中度聋居多数,痰火蕴结型、肾精亏损型、脾胃虚弱型和气滞血瘀型患者均以重度聋、极重度聋听力损失为主。⑤各证型患者听力损伤图形比较中,风热侵袭型和肝火上扰型损伤图形以高频听力损失型和碟型、平坦听力损失型为主,而痰火蕴结型仅以碟型、平坦听力损失型为多,气滞血瘀型以高频听力损失型、碟型平坦听力损失型和中频听力损失型为主要分布,肾精亏损型和脾胃虚弱型患者则以岛状听力损失型和全频听力损失型为主要代表。结论:各种中医证型突发聋患者听力损失程度、纯音听阈指标和听力损伤图形表现不一,痰火蕴结、肾精亏损、脾胃虚弱和气滞血瘀型患者听力损失程度较重,对各证型患者进行辨证施治有可能改善病情。

新基因JDP2通过不同通路抑制人胰腺癌上皮向间质转化作用的研究

目的研究Jun二聚化蛋白2(JDP2)与人胰腺癌细胞系BxPC3上皮向间质转化(EMT)之间的关系。方法应用pCEFL-HA-JDP2质粒瞬时转染BxPC3细胞系,并继续分别用转化生长因子β1(TGF-β1)和I型胶原(Collagen I)诱导,以仅加DMSO为空白对照组,倒置显微镜观察细胞形态学变化,Western blot及免疫荧光检测E-cadherin、vimentin的表达。Transwell小室侵袭实验验证侵袭能力的变化。结果与空白对照组相比,转染JDP2组上皮标志物E-cadherin及间质标志物vimentin表达变化不明显,而转染空质粒组则E-cadherin表达降低而vimentin表达升高,提示JDP2能够抑制由Collagen I及TGF-β1诱导的EMT;同时我们验证,转染JDP2质粒组细胞侵袭能力亦明显小于转染空质粒组细胞(P<0.05)。结论 JDP2,作为AP-1类因子的抑制因子,可以通过不同通路抑制EMT的产生,从而为胰腺癌的分子靶向治疗找到新的方向。

FHL1在人胰腺癌族中的表达及其与胰腺癌的侵袭及转移的相关性研究

目的:探讨FHL1蛋白在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌临床病理特征的关系。方法:利用Western blot检测62例胰腺癌手术切除标本与其相对应的癌旁胰腺组织中FHL1蛋白的表达。用Logrank检验分析FHL1蛋白表达与预后的关系。结果:FHL1的蛋白表达在胰腺癌中与对应癌旁胰腺组织相比下降明显(0.197±0.042 vs.0.508±0.272,P<0.01)。同时,FHL1在胰腺癌中的表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移、肿瘤累及范围、远处转移均有明显差异(P<0.05),与高表达FHL1组相比,低表达FHL1组患者术后生存时间明显缩短(P<0.01)。结论:FHL1的异常表达很可能与胰腺癌的侵袭、转移等密切相关,而这种异常表达又影响了胰腺癌患者的预后。

JDP2在TGF-β1诱导的人胰腺癌细胞系Panc-1上皮向间质转化中的作用

目的:研究JDP2与TGF-β1诱导的人胰腺癌细胞系Panc-1上皮向间质转化之间的关系.方法:实验分为空白对照组、JDP2转染组、空质粒转染组3组,并分别用P、P-J-T、P-V-T缩写代表.用pCEFL-HA-JDP2质粒和pCEFL空质粒瞬时转染人胰腺癌细胞系Panc-1,48h之后应用TGF-β1分别刺激JDP2转染和空质粒转染组细胞48h.以正常的Panc-1细胞为空白对照组,仅加等量的PSB.倒置显微镜下观察各组细胞的形态学变化的差异;应用RT-PCR及Westernblot的方法检测E-cadherin及vimentin的蛋白及mRNA表达变化;应用Transwell侵袭实验观察各组细胞的迁移能力.结果:P-J-T组能够明显抑制由TGF-β1诱导产生的EMT.与P组相比,P-J-T组大部分细胞没有明确的形态学上的变化,E-cadherin及vimentin蛋白及mRNA表达变化不明显,迁移能力亦无明确差异(48.0±5.3vs52.0±7.2),未成功诱导EMT;而P-V-T组Panc-1细胞大多数变成长梭形,细胞间紧密连接丢失,E-cadherin表达明显降低(mRNA表达:P<0.01;蛋白表达:P<0.05),vimentin蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.01),侵袭至小室下室的细胞明显增加(48.0±5.3vs81.0±10.7,P<0.01),出现非常显著的上皮向间质转化特征.结论:JDP2具有明显抑制EMT的作用,JDP2转染后的胰腺癌细胞系可以明显抑制由TGF-β1诱导的EMT,这使得JDP2有可能成为新的胰腺癌的靶向治疗因子.

转化生长因子β1联合表皮生长因子诱导上皮向间质转化对人喉癌细胞株Hep-2侵袭能力影响的研究

目的探讨转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)联合表皮生长因子(epithelial growth factor,EGF)诱导上皮向间质转化对人喉癌细胞株Hep-2侵袭能力的影响。方法应用TGF-β1单独刺激和TGF-β1联合EGF刺激人喉癌细胞株Hep-2后24、48 h观察细胞形态学的动态变化。应用Transwell检测细胞侵袭能力及RT-PCR和Western blot技术检测细胞上皮钙依赖黏附蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达。结果①TGF-β1单独处理48 h组和TGF-β1联合EGF处理24、48 h组均能刺激喉癌细胞株Hep-2发生细胞形态改变。②TGF-β1联合EGF处理组无论是24 h还是48 h,其Hep-2细胞的侵袭能力都明显强于相同时段TGF-β1单独处理组(P<0.05);TGF-β1单独处理48 h组细胞侵袭能力又明显强于对照组(P<0.05)。③TGF-β1联合EGF处理组E-cadherin的表达降低,而Vimentin表达却明显上升。结论 EGF能够协同TGF-β1诱导上皮向间质转化,从而使喉癌具有更强的侵袭能力。

MTA1基因表达与下咽癌颈淋巴结转移的关系

目的:探讨下咽癌组织中转移候选基因(metastasis-associated gene1,MTA1)的表达与颈淋巴结转移的关系,阐明该基因可能是下咽癌淋巴结转移的分子机制之一。方法:应用逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测17例下咽癌(11例伴颈淋巴结转移、6例不伴颈淋巴结转移),8例癌旁正常黏膜中MTA1mRNA的表达。结果:RT-PCR结果显示在11例下咽癌转移组的癌组织中,MTA1 mRNA表达阳性率为90.9%(10/11);在6例不伴颈淋巴结转移的其它下咽癌组织及8例癌旁正常黏膜中MTA1 mRNA的表达率分别为33.3%(2/6)和0%。转移组的表达率与其他2组之间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:MTA1 mRNA的表达与下咽癌颈淋巴结转移密切相关,提示MTA1 mRNA的检测可作为下咽癌颈淋巴结转移的诊断指标。

不同程度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者腭咽肌组织病理形态的比较

目的:分析不同程度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者腭咽肌组织的病理形态学变化。方法:选取128例接受悬雍垂腭咽成形术治疗的OSAHS患者作为观察对象。根据多导睡眠监测结果中的呼吸暂停低通气指数(AHI)将其分为轻度组40例(5次/h<AHI<15次/h)、中度组43例(15次/h<AHI<30次/h)和重度组45例(AHI>30次/h)。选取无口咽部阻塞疾病,且行腭肿物或腭良性肿瘤切除术的患者46例作为对照组。通过前固定、制片、漂洗、后固定、漂洗、脱水、聚合、修块、染色各步骤将四组腭舌弓、腭咽弓组织制成标本,在显色镜下观察其形态学改变。比较各组腭舌弓、腭咽弓、腭舌弓线粒体、腭咽弓线粒体的病变程度。结果:中度组、重度组舌腭弓肌纤维、咽腭弓肌纤维正常者比例均显著低于轻度组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中度组、重度组明显变化者比例显著高于轻度组、对照组,重度组显著变化者比例显著高于其他三组,差异均有统计学意义(P<0.05)。舌腭弓线粒体、咽腭弓线粒体正常者比例:重度组<中度组<轻度组<对照组,舌腭弓线粒体、咽腭弓线粒体显著变化者比例:重度组>中度组>轻度组>对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:腭咽肌组织及肌间线粒体形态学改变与OSAHS病情关系密切,可能是导致OSAHS病情加重的原因之一。

强直性脊柱炎患者的纯音测听指标分析

目的:分析强直性脊柱炎患者的纯音测听指标,并与正常人对照,观察其听觉损害特征,寻找可能的干预方法。方法:选择2001-04/2005-04沈阳医学院附属沈州医院及鞍钢铁东医院门诊就诊和住院治疗的强直性脊柱炎患者48例。对照组选择同期在本院进行健康体检的正常人55例。听力学检查时间在治疗前1周内,对照组检查时间选择与体检同期进行。受试者坐在标准测听室内,由专业技师检查气、骨导纯音听阈。结果:强直性脊柱炎组48例和对照组55例全部完成各项检查,进入结果分析。①48例强直性脊柱炎患者(96耳)检出听力减退29例(57耳),患病率为59.4%,对照组检出10例(19耳),患病率为17.3%,两组比较差异有显著性意义(χ2=16.742,P<0.001)。②强直性脊柱炎组语言频率为4kHz和8kHz的纯音测听指标均明显高于对照组(t=2.139～3.254,P均<0.05～0.01)。③按临床表现累及范围分组后,强直性脊柱炎病变范围大组(22例,>3.4种)的语音频率,4kHz频率和8kHz双侧纯音测听指标均明显高于范围小组(26例,<3.4种)(t=2.255～3.128,P均<0.05～0.01)。④按病情活动性评分分组后,活动明显组(17例,≥5.6分)的各个频率双侧纯音测听多数指标(4kHz频率左侧除外)均显著高于活动不明显组(31例,<5.6分)(t=2.250～3.243,P均<0.05～0.01)。⑤按病情程度分组后,病情重组(美国风湿协会强直性脊柱炎分期3～4期,19例)的各个频率双侧纯音测听指标均明显高于病情轻组(1～2期,29例)(t=2.288～3.290,P均<0.05～0.01)。⑥按Fries功能障碍指数分组后,功能差组(Fries指数≥14.9,17例)的多数频率纯音测听指标(语言和8kHz频率右侧除外)均明显高于功能佳组(Fries指数<14.9;31例)(t=2.176～3.295,P均<0.05～0.01)。结论:强直性脊柱炎患者有很高的听力减退患病率,与病变范围、病情活动性、分期和功能障碍程度密切相关,对于这一群体应注意监测听力。

单层上皮细胞角蛋白在声门上型喉癌中的表达

目的 探讨角蛋白(cytokeratin,CK)19,CK18在声门上型喉癌中的表达及其临床意义。方法 用免疫组化法观察60例声门上型喉癌术后标本CK19,CK18的表达。结果①60例声门上型喉癌组CK19表达阳性53例,阳性率88.3％,而CK18呈阴性表达;②60例声门上型喉癌CK19表达与病理分级有关:中分化组与低分化组(P=0.019),高分化组与低分化组(P=0.003)之间的差异显著,而与TNM分期无关(P=0.186);③60例声门上型喉癌CK19表达在有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P=0.019);④60例声门上型喉癌CK19表达与生存时间无关(P=0.438)。结论60例声门上型喉癌CK19表达与病理分级及淋巴结转移有关,而与TNM分期及生存时间无关。

突发性聋患者血浆vWF、GMP-140水平的变化

目的通过测定突发性聋患者血浆凝血因子Ⅷ相关抗原(vWF)和血小板颗粒膜蛋白(GMP-140)水平变化,进一步探讨血管病变与突发性聋的关系。方法采用酶联免疫双抗体夹心法(ELISA)分别检测20例青年组(年龄≤60岁)突发性聋患者和20例老年组突发性聋患者血浆中vWF和GMP-140含量,并用相同的方法测定20例健康对照组上述指标。结果①突发性聋患者的血浆中vWF和GMP-140含量均较对照组明显增高,差异显著(P<0.01)。②老年组患者的血浆vWF和GMP-140含量较青年组患者明显升高,有显著性差异(P<0.05、P<0.01)。结论①突发性聋患者体内存在血管内皮细胞受损和血小板高度活化状态,并可能参与了突发性聋的发病过程。②老年患者比青年患者存在着更严重和(或)广泛的血管内皮细胞受损,以及更强烈的血小板激活反应。认为血管病变是突发性聋的重要病因之一。

肿瘤坏死因子α单克隆抗体对变应性鼻炎小鼠自噬影响的实验研究

目的观察肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)单克隆抗体对变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)模型小鼠自噬的影响。方法30只6周龄雌性BALB/c小鼠,随机数字表法分为对照组、模型组(即AR组)、TNF-α抗体干预组(即AR+TNF-α组)、自噬抑制剂3-甲基嘌呤(3-methylindole, 3-MA)干预组(即AR+3-MA组)、TNF-α抗体联合自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin, RAP)干预组(即AR+TNF-α+RAP组)5个组,每组6只。常规方法制作AR模型,于鼻腔激发致敏前给予相应试剂,并持续整个实验过程。对小鼠进行行为学评分,眼窝静脉采血,处死小鼠收集鼻黏膜组织,苏木精-伊红染色观察鼻黏膜病理学变化,酶联免疫吸附测定法检测血清中炎性因子及IgE的表达,实时定量聚合酶链反应结合蛋白印迹法检测自噬相关指标微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein-1 light chain-3B,LC3B)、Beclin-1、死骨片重组蛋白1(sequestosome1,p62)、自噬相关基因5(autophagy-related 5,ATG5)、自噬相关基因7(autophagy-related 7,ATG7)的表达,免疫荧光观察LC3B蛋白点状聚集情况。应用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果同AR组比较,AR+TNF-α及AR+3-MA组小鼠AR症状较轻;鼻黏膜病理学变化较弱;血清IgE、TNF-α、白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的表达显著减少[IgE:666.19±78.35(±s,下同)比692.38±64.29比1 059.05±146.44,TNF-α:112.06±12.95比113.17±15.43比161.22±17.96,IL-4∶54.05±7.14比58.26±5.67比79.95±6.33,IFN-γ:28.58±4.51比30.67±2.60比39.83±3.31,P值均<0.05];鼻黏膜组织中LC3B Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、ATG5、ATG7的表达明显降低,p62的表达明显升高。采用自噬诱导剂RAP干预后,TNF-α单克隆抗体对AR的治疗作用被拮抗。结论TNF-α单克隆抗体可抑制自噬水平,显著改善AR小鼠鼻部症状。

连翘酯苷对顺铂作用后豚鼠耳蜗c-jun表达的影响

目的:研究连翘酯苷对顺铂作用后豚鼠耳蜗c-jun表达的影响。方法:将30只豚鼠随机分为对照组(10只),顺铂组(10只)和连翘酯苷组(10只)。腹腔注射顺铂溶液(8mg/kg),1次/d,连续7d,建立顺铂耳毒性模型;连翘酯苷组在每次注射顺铂溶液30min前腹腔注射连翘酯苷25.0mg/kg/d,连续7d;对照组以生理盐水代替顺铂溶液注射,连续7d。实验动物被处死前,检测其DPOAE幅值变化;采用蛋白质印迹杂交(Western Blotting)检测各组豚鼠耳蜗c-jun蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应检测各组豚鼠耳蜗c-jun基因mRNA的表达。结果:顺铂组DPOAE幅值明显低于对照组(P<0.01);相比于顺铂组,连翘酯苷组DPOAE幅值明显升高(P<0.05)。顺铂组豚鼠耳蜗c-jun蛋白与mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.01);相比于顺铂组,连翘酯苷组c-jun蛋白与mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:连翘酯苷能够通过降低c-jun的表达防护顺铂所致的耳蜗损伤。

转化生长因子-1和上皮钙黏附素在声门上型喉癌中的表达与转移和预后的关系

目的:探讨转化生长因子1(TGFβ1)和上皮钙黏附素(Ecd)在声门上型喉鳞状细胞癌(SGLSCC)中的表达与颈部淋巴结转移和预后的关系。方法:采用免疫组织化学SABC法对60例SGLSCC蜡块标本和10例正常喉黏膜标本中TGFβ1、Ecd的表达情况进行检测,结合临床及随访资料进行分析。结果:①60例SGLSCC中TGFβ1和Ecd的阳性表达率分别为81.7%(49/60)和70.0%(42/60);10例正常喉黏膜中TGFβ1和Ecd的阳性表达率分别为20.0%(2/10)和90.0%(9/10);②TGFβ1和Ecd在淋巴结、病理分级及临床分期3项在各组间的表达分别呈正、负相关关系;③两指标的表达与淋巴结转移有显著的关系,而与患者的年龄、性别及肿瘤大小无关;④两指标间无一致性但呈负相关关系;⑤Ecd的表达与生存率曲线有统计学意义。结论:SGLSCC中TGFβ1和Ecd的表达与淋巴结转移有关,两指标间呈负相关关系,两指标可作为预测SGLSCC淋巴结转移的标志物,而Ecd还可作为判断预后的标志物。