双氢青蒿素对人增生性瘢痕成纤维细胞体外作用及其机制的研究

目的探究双氢青蒿素在体外对人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblasts, HSFs)的作用及相关的作用机制。方法通过噻唑蓝实验检测双氢青蒿素作用24 h和48 h的细胞毒性;通过锥虫蓝染色计数活细胞检测双氢青蒿素作用24 h和48 h后对细胞增殖能力的影响;通过划痕实验检测双氢青蒿素对人HSFs迁移能力的影响。对双氢青蒿素作用24 h后的细胞进行AV-PI双染色,通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。试剂盒染色后用流式细胞仪检测双氢青蒿素作用24 h后细胞周期的变化。应用Western blot对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β, TGF-β1)、半胱天冬蛋白酶3 (caspase3)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和Ⅰ型胶原的蛋白表达进行定量分析。通过实时定量PCR来检测TGF-β1 m RNA的表达量。结果⑴双氢青蒿素呈时间和剂量依赖性地对人HSFs表现出明显的细胞毒性并能显著抑制人HSFs的增殖。⑵双氢青蒿素可以剂量依赖性地抑制人HSFs的迁移。⑶双氢青蒿素可以剂量依赖性地激活caspase3,从而增加人HSFs的凋亡,还可以通过抑制Cyclin D1表达将人HSFs细胞周期阻滞在G0-G1期。⑷双氢青蒿素可以剂量依赖性地抑制人HSFs内TGF-β1和Ⅰ型胶原的表达。结论双氢青蒿素可以时间和剂量依赖性地在体外抑制人HSFs的增殖并可以抑制其迁移,可以剂量依赖性地激活Caspase3来增加人HSFs的凋亡并可以通过抑制Cyclin D1表达引起人HSFs周期发生G0-G1期阻滞。双氢青蒿素的作用机制与其抑制成纤维细胞内TGF-β1和Ⅰ型胶原的表达有关。