汉坦病毒S基因真核表达载体的构建及表达

目的 将编码汉坦病毒 76 - 1 1 8株核蛋白的S基因片段克隆到真核表达载体pTARGETTM,构建含汉坦病毒核蛋白S基因的重组真核表达质粒pTARGET -hans,并在体外进行瞬间表达。方法 采用PCR产物直接克隆方法 ,将核蛋白S基因插入到真核表达载体pTARGETM中 ;酶切鉴定 ;用电穿孔法将重组质粒转染入Vero-E6细胞 ;用间接免疫荧光法检测其表达产物。结果 酶切鉴定证实S基因已被正确地插入pTARGETTM中 ;在部分转染重组质粒的Vero-E6细胞胞质内观察到中等强度的特异性荧光。结论 重组的真核表达载体pTARGET -hans已被成功地构建并可在体外表达 。

插入CpG序列的汉坦病毒S基因真核表达载体的构建及表达

To improve the effect of the gene immunization against Hantaan virus, we constructed the eukaryotic expression vector pTARGET-hans(ISS) containing Hantaan Virus S gene coding region and CpG motif by cloning S gene segment with CpG motif into eukaryotic expression vector pTARGETTM. After conformed by enzyme analysis, the recombinant expression vector pTARGET-hans(ISS) was transferred into Vero-E6 cells by electroporation and the transient expression of Hantaan virus nucleocapsid protein was detected by indirect immunofluorescence assay(IFA). In some transferred Vero-E6, the green fluorescence was showed, thus we can conclude that the eukaryotic expression vector pTARGET-hans(ISS) was successfully constructed and expressed in vitro, which will lay a foundation for further animal vaccination.

免疫核糖核酸注射对小鼠腹腔细胞内环核苷酸含量变化的影响

i—RNA在体内可诱生特异性抗体,增强巨噬细胞吞噬、杀抑菌功能,激活正常淋巴细胞转化为对特异抗原有免疫活性的效应细胞,以及诱生干扰素、集落刺激因子,IL-1、IL-2、TL-3 TNF等多种细胞因子。

梅毒螺旋体抗原基因的克隆、表达及其在临床检验中的应用

目的 克隆、表达并纯化梅毒螺旋体相对分子质量为 47× 10 3 抗原 ,并检测梅毒患者的血清标本。方法 应用基因扩增技术分离此蛋白的全长基因 ,采用基因工程的方法 ,应用融合表达载体pGEX 2T ,重组、克隆得到带有梅毒螺旋体 47× 10 3 特异性抗原基因的重组菌株 ,经大肠杆菌表达系统获得重组融合蛋白。再经亲和层析获得纯品 ,并联合应用ELISA检测梅毒患者的血清标本 30份 ,同时检测非梅毒患者的血清标本 30份。结果 纯化后获得了梅毒螺旋体相对分子质量为 47× 10 3 的特异性抗原。ELISA检测梅毒患者血清结果均阳性。非梅毒患者血清均阴性 ,无非特异性交叉反应。结论 此项方法具有操作简便、准确的特点 。